微生物与血库作业指导书

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1、 ABCD医院检验科 程序文件文件编号： 版本/修订号：A/0主题内容关于发布程序文件的声明生效日期：20090808 第 二 页 共46 页微生物与血库作业指导书 文件编号：ABCD-3-WS-0110 ABCD-3-WS-0105第A版编制： 审核： 批准： 生效日期：2009年8月8日ABCD医院检验科 ABCD医院检验科 微生物与血库作业指导书文件编号： 版本/修订号：A/0主题内容 目 录生效日期：20090808 第 1 页 共41 页目 录序号主 题 内 容 代 号页 号微生物室作业指导书部分1结核分支杆菌药敏和初步菌种鉴定ABCD-3-WS-0142涂片找抗酸杆菌操作规程ABC

2、D-3-WS-0263普通细菌培养鉴定操作规程ABCD-3-WS-0384尿液培养操作规程ABCD-3-WS-04105血液培养操作规程ABCD-3-WS-05126黑马Bact-ist微生物分析系统操作维护规程ABCD-3-WS-06147GNP-9270型隔水式恒温培养箱操作维护规程ABCD-3-WS-07188BD960结核分支杆菌培养仪操作维护规程ABCD-3-WS-08199BSC-1100B2型生物安全柜操作维护规程ABCD-3-WS-092410飞鸽牌离心机操作维护规程ABCD-3-WS-1028血库作业指导书部分1血库工作制度ABCD-3-XK-01302交叉配血（凝聚胺法）A

3、BCD-3-XK-02313ABO血型鉴定（生理盐水法）ABCD-3-MY-03334ABO正定型和Rh血型鉴定ABCD-3-MY-04385KJX-IA型冰冻血浆解冻箱ABCD-3-MY-0541 ABCD医院检验科 微生物与血库作业指导书文件编号： 版本/修订号：A/0主题内容 修 订 页生效日期：20090808 第 2 页 共41 页 修 订 页序号文件编号页码需更改的内容更改内容批准人批准日期123456789101112131415161718192021 ABCD医院检验科 微生物室作业指导书文件编号：ABCD-3-WS-01版本/修订号：A/0主题内容结核分支杆菌药敏和初步菌种

4、鉴定生效日期：20090808 第 4 页 共41 页结核分支杆菌药敏和初步菌种鉴定1 检验目的做疾病的病原学诊断，查找于疾病有关的病原菌以及了解微生物与疾病的关系，指导临床治疗及预后和流行病学的调查。2 原理若接种的MGIT培养管中有分支杆菌生长，管中的营养成分和氧气将不断被消耗，MGIT培养管中的荧光显示剂将随着管内氧气浓度的变化而发生反应。一旦培养管内氧气被利用，管内荧光指示剂将在特定光源的激活下释放荧光。BACTEC MGIT960荧光强度记忆探测器将每隔60min连续测定培养管内荧光强度，从而判断管内分支杆菌生长情况。3 标本要求（1）标本类型：深部痰液。（2）标本采集：见标本采集手

5、册（3）标本储存和运输：室温放置，室温运输并立即送检。（4）标本拒收状态：非无菌方式采集的标本。4 容器和添加剂类型使用灭菌器皿盛放标本，不加任何防腐剂。5 试剂（1）试剂名称：Middlebrook7H9培养肉汤，OADC营养添加剂，抑菌剂PANTA。（2）试剂生产厂家：美国BD生物技术有限公司（3）包装规格：7X100（4）试剂盒组成：培养肉汤，营养添加剂，抑菌剂 6仪器设备：BACTEC MGIT960全自动分支杆菌培养仪；美国BD生物技术有限公司。酒精灯显微镜、超净工作台、台式离心机7校准程序 (送XX市计量质量检测研究所校准)8操作步骤见仪器操作维护规程：BD960结核分支杆菌培养仪

6、操作维护规程； 9质量控制：参加我科质量管理小组组织的各项质量控制活动10 生物参考区间阴性11 患者检验结果的可报告区间阴性/阳性，药敏及菌种鉴定见BD960结核分支杆菌培养仪操作维护规程； 12 临床意义： 分支杆菌的药敏试验有助于筛选有效的抗结核药物，提示药物所需的治疗剂量，供临床医生和防痨医生参考；同时，还可了解耐药株的流行情况，为抗结核药物的合理应用提供试验依据。 ABCD医院检验科 微生物室作业指导书文件编号：ABCD-3-WS-02版本/修订号：A/0主题内容涂片找抗酸杆菌操作规程生效日期：20090808 第 6 页 共41 页涂片找抗酸杆菌操作规程（改良碱性复红法）1 检验目

7、的 检验样本中是否含有抗酸杆菌，为临床提供诊断依据。2 原理结核菌、麻疯杆菌、耻垢菌等抗酸性菌，因其菌体表面有一层脂或脂质之皮膜不易着色，但一经着色后酸或乙醇的作用亦是不容易把它脱色。利用这特性并以增强的染色液予染色，然后再以酸及乙醇加以处理，使其脱色后再对比染色，此时抗酸性菌仍是固定着最初色素的颜色（红色）。3标本要求 （1）标本类型：病人的痰、穿刺关节液、腹水、胸积液、组织、脑脊液、分泌物、尿液等（2）标本采集：见标本采集手册（一般须得深咳痰，其它无特殊要求。）（3）标本储存和运输：可室温保存、室温运送。病人标本须密封运送以避免污染环境。4 容器和添加剂类型 痰盒、尿杯、试管等6 试剂（1

8、） 试剂名称：结核菌染色液（2）试剂生产厂家：广东省结核病研究所统一配制（3）包装规格：3X500ML（4）试剂盒组成：试剂1：石碳酸复红液试剂2：酸性酒精溶液试剂3：亚甲基蓝溶液7仪器设备：CHKIKO320 奥林巴斯双目显微镜 BH-2奥林巴斯落射荧光显微镜8 校准程序 送XX市计量质量检测研究所校准9操作步骤涂片经火焰固定，加石碳酸复红液染色5分钟或更久（需加温）。水洗（之后尽可能将水沥干）。加酸性酒精溶液，脱色1-2分钟。水洗（假如标本面还可以看到残存红色时，再加酸性酒精溶液脱掉红色为止）。加亚甲基蓝溶液染色30秒，水洗，干燥。(6)镜检。10 质量控制：参加我科质量管理组的质量控制活

9、动。11 干扰和交叉反应麻风菌可能对检验结果产生影响。12 生物参考区间涂片未见抗酸杆菌13 患者检验结果的可报告区间涂片未见抗酸杆菌/涂片见细长、红色抗酸杆菌14 临床意义： 结核分枝杆菌不产生内毒素和外毒素，其毒力主要是在机体中细胞内、外生长与大量繁殖的能力，细菌成分与其代谢产物引起免疫反应（型）导致一系列组织学上的意义。 ABCD医院检验科 微生物室作业指导书文件编号：ABCD-3-WS-03版本/修订号：A/0主题内容普通细菌培养鉴定操作规程生效日期：20090808 第 8 页 共41 页普通细菌培养鉴定操作规程1 检验目的 做疾病的病原学诊断，查找于疾病有关的病原菌以及了解微生物与

10、疾病的关系，指导临床治疗及预后和流行病学的调查。2 原理人体很多部位与外界相通，存在栖息菌群，但不致病，当菌群失调或分离到致病菌则具有临床意义；另外机体某些部位是无菌的 ，如检出细菌则视为致病菌。并排除采样及操作污染。3 标本要求 （1）标本类型：血液，骨髓，脑脊液，胸水，腹水，尿液，等体液；痰液，前列腺液，脓液，组织分泌物或穿刺液等。（2）标本采集：见标本采集手册（3）标本储存和运输：室温放置，室温运输并立即送检。人泌尿生殖道标本如白带前列腺液等需临床标本接种于巧克力平板或特殊的运送培养基并置保温设备中送检。（4）标本拒收状态：非无菌方式采集的标本或未按要求部位采取的标本。 4 容器和添加剂

11、类型均使用灭菌器皿盛放标本5 试剂（1）试剂名称：革兰氏染液、氧化酶试剂、3%触酶、血平板、麦康凯平板、相关生化试剂等（2）试剂生产厂家：珠海黑马生物技术有限公司6仪器设备：（1）接种针、接种环、酒精灯、（2）BACT-IST黑马微生物鉴定系统。 （3）显微镜、GNP-P270隔水式恒温培养箱、SW-CJ-IF超净工作台、MCO-15A三洋牌二氧化碳培养箱、0414-1台式离心机、FA1004电子天平7 校准程序 (送XX市计量质量检测研究所校准)8操作步骤（1）血液、骨髓、脑脊液等标本按照培养目的增菌培养12-18小时后盲目接种或待自动分析仪报警后接种。（2）接种：以上增菌标本及其他临床标本

12、用接种环取标本接种环划线血平板及其他选择性培养基上,35培养过夜，观察结果。（3）涂片：肉眼见细菌生长，取生长物涂片做革兰氏染色；（4）纯培养：根据需要接种血平板、巧克力、中国蓝/麦康凯或厌氧平板过夜培养以获得纯培养。（5）鉴定：按照鉴定仪要求调配菌液浓度，细菌的鉴定见BACT-IST黑马微生物鉴定系统 12 质量控制： 参加我科质量管理小组组织的各项质量控制活动11 生物参考区间血液，骨髓，脑脊液等无菌部位采取的标本未见细菌生长；其他标本如大便，痰液为正常菌群或未见致病菌。12 患者检验结果的可报告区间细菌鉴定到种或属；菌群调查报告比例。13 临床意义： 为医生提供病原学诊断，并为进一步药敏

13、实验提供依据。 ABCD医院检验科 微生物室作业指导书文件编号：ABCD-3-WS-04版本/修订号：A/0主题内容尿液培养操作规程生效日期：20090808 第 10 页 共41 页尿液培养操作规程1 检验目的 做疾病的病原学诊断，查找于疾病有关的病原菌以及了解微生物与疾病的关系，指导临床治疗及预后和流行病学的调查。患有泌尿系感染时，尿中的细菌数高于104/mL，以此作为诊断泌尿系感染依据。2 原理使用BACT-IST黑马微生物鉴定系统，原理见鉴定系统操作规程 。3 标本要求 （1）标本类型：中段尿液。（2）标本采集：见标本采集手册（3）标本储存和运输：室温放置，室温运输并立即送检。（4）标

14、本拒收状态：非无菌方式采集的标本。 4 容器和添加剂类型使用灭菌器皿盛放标本，不加任何防腐剂。5 试剂（1）试剂名称：革兰氏染液、氧化酶试剂、3%触酶、血平板、麦康凯平板、相关生化试剂等（2）试剂生产厂家：珠海黑马生物技术有限公司（3）包装规格：4X500Ml（4）试剂盒组成：试剂1：龙胆紫液 试剂2：碘溶液 试剂3：脱色液 试剂4：沙黄溶液6仪器设备：（1）接种针、接种环、酒精灯、（2）BACT-IST黑马微生物鉴定系统（3）显微镜、GNP-P270隔水式恒温培养箱、SW-CJ-IF超净工作台、MCO-15A三洋牌二氧化碳培养箱、0414-1台式离心机、FA1004电子天平7 校准程序 (送

15、XX市计量质量检测研究所校准)8操作步骤（1）细菌的分离培养：用接种环取1uL标本接种于血平板及麦康凯琼脂培养基，35培养过夜，观察结果。菌落生长者做菌落计数，并挑取优势菌菌落做纯培养。（若初次分离菌落单一且生长较多时可直接做鉴定）（2）涂片：取菌落涂片做革兰氏染色，确认时G+或G-以及是球菌还是杆菌（球杆菌）。（3）细菌鉴定及药敏实验:革兰氏阴性杆菌做氧化酶试验（必要时做动力试验），氧化酶试验阳性或氧化酶试验阴性但不利用葡萄糖不产酸者使用非发酵鉴定测试板；氧化酶试验阴性者则使用肠杆菌科细菌测试板；革兰氏阳性球菌（主要是成簇或四联排列），触酶试验阳性者接种葡萄球菌、微球菌鉴定/药敏测试板；触酶

16、试验阴性者则接种链球菌鉴定/药敏测试板；革兰氏阴性双球菌，氧化酶试验阳性者使用淋球菌鉴定/药敏试剂盒测试。（4）鉴定：按照鉴定仪要求调配菌液浓度，见BACT-IST黑马微生物鉴定系统、PHOENX100全自动细菌鉴定药敏分析系统操作规程 。9质量控制：参加我科质量管理小组组织的各项质量控制活动10 生物参考区间正常人体膀胱中尿液无菌。11 患者检验结果的可报告区间细菌鉴定到种或属，菌落计数高于104/mL。12 临床意义： 为医生提供泌尿系感染的病原学诊断。 ABCD医院检验科 微生物室作业指导书文件编号：ABCD-3-WS-05版本/修订号：A/0主题内容血液培养操作规程生效日期：20090

17、808 第 12 页 共41 页血液培养操作规程1 检验目的 做疾病的病原学诊断，查找于疾病有关的病原菌以及了解微生物与疾病的关系，指导临床治疗及预后和流行病学的调查。2 原理使用BACT-IST黑马微生物鉴定系统，原理见鉴定系统操作规程 。3 标本要求 （1）标本类型：血液（2）标本采集：给患者用抗生素前抽取。见标本采集手册（3）标本储存和运输：室温放置，室温运输并立即送检。（4）标本拒收状态：非无菌方式采集的标本。 4 容器和添加剂类型使用灭菌器皿或鉴定仪配备的血培养瓶盛放标本，不加任何防腐剂，抗凝剂。5 试剂（1）试剂名称：革兰氏染液、氧化酶试剂、3%触酶、血平板、麦康凯平板、相关生化试

18、剂等（2）试剂生产厂家：珠海贝索生物技术有限公司（3）包装规格：4X250Ml（4）试剂盒组成：试剂1：龙胆紫液 试剂2：碘溶液 试剂3：脱色液 试剂4：沙黄溶液6仪器设备：（1）接种针、接种环、酒精灯、（2）BACT-IST黑马微生物鉴定系统（3）显微镜、GNP-P270隔水式恒温培养箱、SW-CJ-IF超净工作台、MCO-15A三洋牌二氧化碳培养箱、0414-1台式离心机、FA1004电子天平7 校准程序 (送XX市计量质量检测研究所校准)8操作步骤（1）细菌的分离培养：血培养瓶经12-18小时35孵育后，肉眼若见生长则转种血平板及麦康凯琼脂培养基，35培养过夜，观察结果。菌落生长者挑取优

19、势菌菌落做纯培养。（若初次分离菌落单一且生长较多时可直接做鉴定）（2）涂片：取菌落涂片做革兰氏染色，确认时G+或G-以及是球菌还是杆菌（球杆菌）。（3）细菌鉴定及药敏实验:革兰氏阴性杆菌做氧化酶试验（必要时做动力试验），氧化酶试验阳性或氧化酶试验阴性但不利用葡萄糖不产酸者使用非发酵鉴定测试板；氧化酶试验阴性者则使用肠杆菌科细菌测试板；革兰氏阳性球菌（主要是成簇或四联排列），触酶试验阳性者接种葡萄球菌、微球菌鉴定/药敏测试板；触酶试验阴性者则接种链球菌鉴定/药敏测试板。（4）鉴定：按照鉴定仪要求调配菌液浓度，见BACT-IST黑马微生物鉴定系统、PHOENX100全自动细菌鉴定药敏分析系统操作规

20、程 。9质量控制：参加我科质量管理小组组织的各项质量控制活动11 生物参考区间正常人体血液无菌。12 患者检验结果的可报告区间细菌鉴定到种或属，同时报告药物敏感试验结果。13 临床意义： 为医生提供感染的病原学诊断。 ABCD医院检验科 微生物室作业指导书文件编号：ABCD-3-WS-06版本/修订号：A/0主题内容微生物分析系统操作维护规程生效日期：20090808 第 16 页 共41 页黑马Bact-ist微生物分析系统操作维护规程1 主要技术指标Bact-IST微生物鉴定药敏分析系统融合了自动化、电脑化及微生物微量生化反应测试方法，可同时进行微生物分析鉴定（ID）与药敏（MIC）检测，

21、使细菌鉴定药敏分析规范化、标准化、现代化。1.1完善的分析系统：微生物鉴定分析系统，微生物药敏分析系统统计分析院内感染监测专家系统 联网功能1.2药物种类：呋喃类 ，磺胺类 ，喹诺酮类 ，青霉素类大环内酯类，氨基糖甙类 ，头孢菌素类1.2鉴定范围：肠杆菌科 ，非发酵菌， 葡萄球菌属 ，真菌，微球菌属， 链球菌属 ，肠球菌属 ，弧菌属1.3院内感染检测环境空气 ，物体表面 ，医疗用品，消毒剂及保存液 ，血液透析2 适用范围黑马Bact-ist微生物分析系统(包括微生物鉴定和药敏分析两大功能)；是对己分离培养出来的细菌、真菌等微生物进行种、属鉴定，并同时测定该菌对各种抗菌药物敏感/耐药程度的专用设

22、备。3 工作原理自1880年郭霍(Koch)发明固体培养基，对细菌的研究技术有了重大的突破之后，一个多世纪以来，人类对细菌的研究和认识已经得到了极大的成就，对细菌分类的理论根据和方法已趋成熟，命名已经统一，对繁浩的各种细菌众多的生物学、物理学特性己基本明确，从20世纪初开始，形成了利用各种细菌之间生物学、物理学特性的差异或不同，来区别和鉴定细菌种类的方法，不断丰富发展，沿用至今，成为细菌鉴定的常规方法。但由于细菌种类繁多，生物学性状错综复杂，实验操作繁琐、费时，不仅初学者不易掌握，有经验者也常感困惑。20世纪70年代，由于电子计算机的发展，有人首先利用信息编码来签定细菌，将复杂的各种细菌的生物

23、学性状建立数据库，被检菌的各种生物性状测出后，输入电脑与贮存信息相比较即刻可判断未知菌的种属。八十年代初己设计出各种多项生物学试验的套装组合，与电脑贮存的项目内容相对应，即细菌的编码鉴定法，很快在全球得到了重视，迅速推广应用。随后，在上述编码鉴定的基础上，又开发研究了各种类型的半自动和全自动的细菌鉴定药敏分析仪器。 黑马微生物鉴定/药敏分析系统，与国际上的其他同类仪器一样，都是按照上述的原则和技术基础而设计和投产的，设计时，细菌的分类、命名、各种细菌的生物学特性和鉴定依据，各项鉴定试验，特别是“关键性试验”的方法和标准，抗生素药物与浓度的选择和敏感度判断标准等，全部按卫生部印发的全国临床检验操

24、作规程第二版、NCCLS药敏试验法规(2001)等权威性文献执行，这些文献己与国际接轨，因此，它和国外同类产品的性质和功能基本上是一致的。4 试剂采用珠海黑马原配试剂5 操作步骤与功能特点黑马微生物自动鉴定药敏分析系统分为“半自动”和“自动”两种，半自动系统由电脑软件和测试板两部分组成：自动系统是在半自动的基础上再加自动判断装置。使用半自动系统时，先将被测菌制成菌液加注到测试板微孔内，经孵育后，将板上的各项测试结果(阳性或阴性)输入电脑软件的相应界面，便可即刻判定被测菌的种、属名称及其对各种抗菌药物的敏感度，同时生成和打印一份完整的报告。如使用自动系统，则将孵育后的测试板插入自动判读槽内，由仪

25、器自动读取各项试验结果，从而省却人工判读和输入的手续。 黑马微生物鉴定/药敏分析系统具有以下几种功能和特点: 1、细菌鉴定功能：可以将与医学和人类有关的绝大部分细菌及真菌鉴定到“种”及“亚种”水平，这些细菌包括：肠杆菌科中的20个菌属、非发酵菌中的8个菌属、弧菌科中的3个菌属、奈瑟菌科中的2个菌属、微球菌科的3个菌属以及酵母样真菌中的6个菌属，合计近200种细菌(或真菌)。另外，还有性传播疾病(STD)的鉴定药敏分析系统。 2、抗生素敏感度分析功能：可以根据被检细菌在不同浓度的各种药物中生长状态，分析判断其对各种抗菌药物的敏感耐药程度，测定的结果以MIC(最小抑菌浓度)表示，并根据所测的MIC

26、，按国际的统一规定(NCCLS)给出S(敏感)、MS(中度敏感)和R(耐药)的判断，还可提示被测菌是否存在-内酰胺酶、超广谱-内酰胺酶和耐甲氧西林的状况。同时，还按NCCLS文件提供每种细菌的选药原则和方法，用户也可以用纸片法或稀释法自行测试，将结果（抑菌圈直径或MIC）输入后，软件可按NCCLS的标准判断其敏感度并打印报告。 本软件还设置了比较完善的“专家系统”，对测试结果进行分析审核和解释。对药敏结果出现的“异常表型”、药物选择和报告中的不合理现象、以及检验者如何正确操作、临床医师用药时要注意的问题等给予提示。同时根据提高疗效、防止滥用的原则，还设置了药敏结果的选择性报告功能。这些对保证药

27、敏结果的可靠性、科学性，对提高药敏试验的“含金量”，以及对临床用药的指导作用，防止滥用、扼制耐药菌株的蔓延等，均有着重要意义。 3、对不合理、可信度低的鉴定试验结果具有提示功能，提出重复试验或加做某顶试验的建议。 4、院内感染和医院环境细菌学监测的分析功能：按照卫生部规定的关于院内感染6种监测而设计，只要将被检病区(或科室)及其生长的菌落数输入后，即可自动生成和打印报告。提示被检单位的菌落总数，国家规定的标准数，并同时给予“及格”或“不及格”的判定。该系统还有完善的院内感染监测的统计分忻系统，可定期将各科室的监测结果统计分析后，向上级主管部门汇报或供院内感染委员会研究。六种监测是：环境空气的细

28、菌学监测、物体表面的细菌学监测、医务人员手的细菌监测、医疗用品的细菌学监测、使用中的消毒剂及无菌器械保存液的细菌学监测、血透室及透析液的细菌学监测。 5、贮存、查询和联网功能：所有的检验结果资料全部可以长期贮存，随时可以查询回放，已有联网的医院，可以和全院联网，更为方便。 6、统计分析功能：统计分析项目全面，且与WHO推荐的WHONET5软件接轨，具体项目有：不同标本细菌检出率的统计分析不同标本中细菌检出百分比率的统计分析不同病区(病房)细菌发生率的统计分析不同病区(病房)细菌发生率的月趋势分析不同菌种的月份比率趋势分析不同月份不同细菌百分比的统计分析各种细菌对各种抗菌药物的耐药性分析各细菌同

29、型生化反应谱的统计分析耐甲氧西林/-内酰胺酶葡萄球菌统计分析超广谱-内酰胺酶统计分析工作量及经济收入统计 7、手工试验结果输入功能：某些特殊种类的细菌需要用传统的手工试验得以鉴定，或特殊的抗菌药物需要用手工法或纸片法作敏感度测定，也可利用此功能输入结果，生成和打印报告，同时存储资料，参与统计分析。8 注意事项1、学习和掌握医学微生物学的专业知识，熟练微生物检验技术。2、使用仪器和各种测试板之前，仔细阅读操作说明书和用户手册。3、建立严格的无菌操作制度，操作时避免杂菌污染检测板，严防致病性的被测菌染及自身和周围环境。4、分离培养技术过关，严禁将两种或两种以上的细菌混在一齐检测。5、做好细菌的涂片

30、染色、镜检观察、形态及动力观察、氧化酶、凝固酶等板外操作。6、遇有比较疑难或有问题的菌株，不应轻易放过，应保留菌种作进一步试验观察，把问题搞清。9 仪器维护 (1)严格按照仪器的关机程序关机。(2) 仪器不使用时请罩防尘罩。(3) 注意检查仪器的运行情况，并填写仪器使用登记表。 10 期间核查 由XX市计量质量检测研究所执行11 相关记录(1) 仪器使用登记表 ABCD医院检验科 微生物室作业指导书文件编号：ABCD-3-WS-07版本/修订号：A/0主题内容隔水式恒温培养箱操作维护规程生效日期：20090808 第 17 页 共41 页GNP-9270型隔水式恒温培养箱操作维护规程1 仪器原

31、理和适用范围1.1 采用电热器加热、精制双金属片热控温度原理。具有钢板外壳和内箱，中填玻璃棉隔热等设计特点。1.2 适用于中小实验室作干燥、恒温培养等工作。1.3 仪器工作条件电源220V；50Hz；5A；400W功率；接地良好、桌面稳定；1.4 环境条件防震、通风。2 技术参数2.1 温度调节范围室温加360；2.2 温度波动范围 1、温度均匀性1；2.3 最大容量为420420500mm3； 3 操作步骤3.1 接通电源，调节温度旋钮至工作所需温度，观察温度计是否达到，多次微调后定位3.2 搁置工作物后关上箱盖，直到需取用时拿出； 3.3 放长假不工作前，应拔出电源插头，确保安全。 4 注

32、意事项4.1 为确保培养目的实现，外插温度计应为合格品，并随时观察温度是否正确；4.2 为确保仪器内钢制金属内壳与搁板不受腐蚀，酸碱试剂不得置于箱内；4.3 箱壳必须有效接地,若有电感，应立即切断电源,检查排除故障；5 仪器维护5.1 日常维护保持机外清洁，每月用消毒液清洗机内，经常注意温度变动；5.2 定期、期间核查按仪器设备管理程序进行,定期每年一次、其间12次，主要了解温度恒定、钢制内壳和搁板锈蚀状况等。6 相关记录仪器使用登记表 ABCD医院检验科 微生物室作业指导书文件编号：ABCD-3-WS-08版本/修订号：A/0主题内容结核分支菌培养仪操作维护规程生效日期：20090808 第

33、 22 页 共41 页BD960结核分支杆菌培养仪操作维护规程1 技术参数物理参数高53 inches (134.62 cm)宽36 inches (91.84 cm)深28 inches (71.12 cm)周边应留空间左，后，右 12 inches (30.48 cm) 前 48 inches (121.9 cm) 重量（没有测试管）754 lbs. (342 kg)重量（有测试管）794 lbs. (360.2 kg)电气要求输入电压100 120 或 200 240 VAC输入电流最大10.0 Amp 输入频率50 or 60 Hz 3 Hz散热4000 BTU/hr功耗2000 Wa

34、tts环境要求非操作状态温度-17.8 C - 65.0 C (0 F 149 F)湿度30% - 80% RH, non-condensing操作状态温度24 C - 28 C (66.2 F 86 F)湿度30% - 80% RH, non-condensing定位水平放置，避免阳光直射，避免发热装置海拔高度海拔0-4,000 M 2 适用范围适用于该仪器操作手册所列的分支杆菌的培养鉴定和药敏。3 工作原理 若接种的MGIT培养管中有分支杆菌生长，管中的营养成分和氧气将不断被消耗，MGIT培养管中的荧光显示剂将随着管内氧气浓度的变化而发生反应。一旦培养管内氧气被利用，管内荧光指示剂将在特定

35、光源的激活下释放荧光。BACTEC MGIT960荧光强度记忆探测器将每隔60min连续测定培养管内荧光强度，从而判断管内分支杆菌生长情况。4 试剂（1）试剂名称：Middlebrook7H9培养肉汤，OADC营养添加剂，抑菌剂PANTA。（2）试剂生产厂家：美国BD生物技术有限公司（3）包装规格：7X100（4）试剂盒组成：培养肉汤，营养添加剂，抑菌剂5 操作步骤（1） 标本的采集和处理：吸1ml的痰液加1 ：1的4%的氢氧化钠消化15分钟，取消化液离心10分钟。弃去上清液，加入PH6.8的无菌PBS液5ml，温和混匀。再离心，弃去上清液，加入无菌PBS液1ml充分混匀。（2） 胃液、脑脊液

36、、骨膜液、胸膜液和膀胱穿刺尿等标本要先去污染处理。（3） 在MGIT管标签上直接标记，在无菌条件下用滴管加入0.5mlMGIT OADC营养添加剂；在无菌条件下加入0.1mlMGIT PANTA抗菌素混合溶液。（4） 加入0.5ml处理好的标本（注意：标本量超过0.5ml会增加污染机会）。（5） 旋紧管盖、适当混匀。（6） 将MGIT培养管置入BACTEC MGIT960全自动分支杆菌培养仪孵育培养。（7） BACTEC MGIT960荧光强度记忆探测器每隔60min连续测定培养管内荧光强度，从而判断管内分支杆菌生长情况。（8）阳性标本进行涂片，确认为分枝杆菌进行药敏试验后发出报告。样品要求：

37、（1）标本类型：深部痰液。（2）标本采集：见标本采集手册（3）标本储存和运输：室温放置，室温运输并立即送检。（4）标本拒收状态：非无菌方式采集的标本。6 药敏试验 （1）试剂及试剂制备：MGIT AST SIRE药敏试剂盒为冻干试剂，28保存，溶解后可-70保存6个月。建议溶解后立即使用。SM 160ugINH 20 ugRFP 200 ugEMB 700 ug试剂制备方法：分别在每一抗菌素试剂瓶内加入4ml灭菌蒸馏水或去离子水后混匀，得到以下各试剂浓度。SM 40ug/mlINH 5 ug/mlRFP 50 ug/mlEMB 175g/ml（2）阳性管MGIT管的制备：MGIT阳性管13d的

38、阳性培养物。如阳性管超过4d阳性的培养物，则需立即振荡MGIT管10s后，取1 ml均匀培养物用4 ml生理盐水稀释（1：5稀释）转种。（3阳性对照管的制备：取未接种的MGIT培养管并除去管内肉汤。将该空培养管标记为阳性对照管并标记配置日期。配置0.4亚硫酸钠（0.4g亚硫酸钠溶于100ml无菌蒸馏水或去离子水中）。将5ml亚硫酸钠溶液加入管内，将盖旋紧。使用前至少应在室温放置1h。阳性对照管能多次使用（4）药敏操作步骤：将MGIT管分别标记生长对照（GC）,SM、INH、RFP、EMB等。每管中分别加入0.5mlMGIT OADC营养添加剂。每管中分别加入对应量的已稀释的S、H、R、E，至终

39、浓度为表1所示。表1抗生素终浓度抗生素名称终浓度SM INH RFP EMB 0.8ug/ml0.1ug/ml1.0 ug/ml3.5g/m分别在5管中加入0.5ml 1：5稀释的阳性培养菌液。BACTEC MGIT960全自动分支杆菌培养仪孵育。取0.1 ml 1：5稀释的阳性培养菌液接种一血平板，装入一塑料袋中于3537孵育。48h后检查该平血平板是否有其它杂菌生长。如血平板未见有杂菌生长则可以读取BACTEC MGIT960结果。如血平板有杂菌生长则需重复实验步骤。（5）判读MGIT管MGIT GC生长对照管和阳性对照管为阳性，阴性管为阴性。当GC生长对照管为阳性时则开始判读药敏管，并且

40、连续判读后续2d的结果。耐药：药敏管和GC管在同一天被判读仪判读为结果阳性，或比GC管晚12d。敏感：药敏管在GC出现阳性后2d内仍未见生长则为敏感。7 MTC与MOTT鉴定法（1）凡制备作分支杆菌药敏实验的实验室均需进行分支杆菌菌种鉴定。PNB培养基：PNB用二甲基甲酰胺或丙二醇溶解稀释后加入BBL MGIT分支杆菌生长指示管中，使最终浓度为0.5mg/ml，制备方法同药敏试验培养基配制法。TCH培养基：TCH5mg溶于10ml无菌蒸馏水，取80 ul加入BBL MGIT分支杆菌生长指示培养管中，使最终浓度为5ug/ml，制备方法同药敏试验培养基配制法。接种方法：与药敏试验相同，且与药敏试验

41、同步进行。（2）结果与报告见表2表2 ：分支杆菌菌种初步鉴定 PNBTCH牛分支杆菌 -人型结核分支杆菌 -MOTT + -+8 注意事项环境要求：BACTEC MGIT960全自动分支杆菌培养仪，应安放在稳固工作台上，保持通风，避免震动，避免阳光直射，避免灰尘，避免无线电波干扰，电源条件应满足117/220/240VAC10%；50/60HZ。检测室温范围为2030，相对湿度为3050%。9 仪器维护 (1)严格按照仪器的关机程序关机。(2) 仪器不使用时请罩防尘罩。(3) 注意检查仪器的运行情况，并填写仪器使用登记表。 10 期间核查 由XX市计量质量检测研究所执行11 相关记录(2) 仪

42、器使用登记表 ABCD医院检验科 微生物室作业指导书文件编号：ABCD-3-WS-09版本/修订号：A/0主题内容生物安全柜操作维护规程生效日期：20090808 第 26 页 共41 页BSC-1100B2型生物安全柜操作维护规程1 技术参数参数数值人员安全性4个产品安全性4个交叉感染2个平均送风风速0.3-0.5mS吸入口风速0.6 mS无故障工作时间8000小时终端风机风量()1500m3电源AC220V 50HZ洁净度等级100级振动幅值XYZ三个方向4m噪声65dB（A）照明680Lx紫外线60uW/cm2电源消耗功率850V2 适用范围 适用于微生物操作和实验分析。3 操作步骤3.

43、1保持前窗不高于200的操作高度，当声/光报警时及时复位。3.2送风及排风风机开启前请先校整压差显示屏“0”位。3.3开机程序：开启电源-排风与送风-灭菌30后关闭-照明-开始工作3.4关机程序:关闭送风-照明-开启灭菌30后关闭-排风-关闭电源。3.5每次操作结束,请清洁台面及墙体。3.6压差报警:预置报警值160Pa,HEPA寿命终止压差180 Pa，更换须由专业人员操作。3.7使用过程中，请勿将软纸、细微的物品等放于进风格栅附近，以免其被吸入负压风道和风机中，影响装备的运行。4 注意事项4.1打开带钥匙的开关，即接通了装备的总电源，开启后，红色电源指示灯点亮。4.2正常使用的前窗高度为0

44、。2M；当大于0。2时，装备会发出报警声，前窗高度红色报警指示灯也会点亮。此时操作者应将前窗高度降至报警声消除位置，前窗高度红色报警指示灯会随之熄灭。4.3当有污染物残留工作台面时应及时清理，工作台面为不锈钢制品，清洗时应注意使其不受损伤，以保证长期使用和保持其美观。4.4高效过滤器的压差损失在装备出厂时已设定预置值，所以当装备中的送风过滤器在将要达到使用寿命前，即压差损失达到预置值时，红色报警指示灯会点亮，装备发出报警声，这一现象叫预先报警。此时送风或排风红色报警指示灯虽然电路点亮着，但这并不表示装备已不能正常使用，操作者若想继续使用装备，直至送风或排风过滤器寿命终止是完全可以的，但由于此段

45、使用时间中报警器一直处于鸣响状态，所以操作者可与销售公司联系，在技术人员的指导下消除报警声。一旦红色报警指示灯点亮，装备发出报警声，需及时与我公司服务部门联系有关调换高效过滤器的事宜。如果长时间不予更换会影响装备的安全性能。4.5操作者不得擅自改变压差损失在装备出厂时的设定预置值。4.6当液晶显示屏旁的送风排风选择按钮(即颜色为白色的按钮)处于高起状态时,液晶显示屏上显示的数字是送风过滤器的压差损失,当液晶显示屏旁的送风排风选择按钮处于低进状态时,液晶显示屏上显示的数字是排风过滤器的压差损失。即切换送风排风选择按钮可以看到送风或排风过滤器的压差损失。4.7在液晶显示屏与送风排风选择按钮中间有两

46、个调零电位器,这两个电位器是用来调节液晶显示屏上显示的排风和送风过滤器的压差损失的零位的。当安全柜接通电源时, 液晶显示屏上就会显出数字,此时应等待十分钟左右,等液晶显示屏上的数字稳定后,再通过上下两个电位器及切换送风排风选择按钮来调节排风和送风过滤器的压差损失零位。调好零位后,按下风机按键,此时液晶显示屏上显示的数字是指实时的送风或排风过滤器的压差值。每次使用安全柜前,都应调一次零位。4.8四个软贴面接键开关,分到为风机、照明、灭菌及供电。当订货合同对装备无跨接供电输出(即客户未提出在装备内增加电源插座)要求时,开关面板的供电开关为空接状态。当照明、灭菌及供电任一开关处于接通位置的,绿色指示

47、器会点亮。对于风机开关,用户第一次按开关时,绿色指示器会点亮,此时送风风机与排风风同时开始工作,当用户再按一次按键开关时,红色指示灯会点亮,此时送风风机停止工作而排风风机继续工作,当用户第三次按开关时,红色指示灯熄灭,排风风机停止工作。一般情况下,用户从操作中一直到操作结束清理台面完毕后的5分钟内,风机按键都应该是绿色指示灯持续点亮,只有在上述行为都结束时,才应该再按一次风机按键,使红色指示灯点壳,此时生物安全柜会把残留在操作区的污染物质都吸入到负压风道中去。4.9装备工作区边墙的突起装置是压差传感器的通气口,所以用户不得堵塞该通气口,也不得在该装置上悬挂物件。4.10高效过滤器有其使用寿命。

48、随着使用期的延长,尘埃及细菌积聚于过滤器会导致高效过滤器压力损失的增大。希望装备能运行于不低于10000级空气质量的背景环境中,若长期运行于劣质空气环境中会导致高效过滤器的频繁更换。4.11风机及其下侧钢板是静压箱盖,后侧门板是负压风道挡板,这些风道在出厂时是经严格密封处理的,应保持其密封性能,操作者不得松懈或拆除这些部件的螺钉。如有特别需要,必须由专业人员作为。4.12台面上靠近前窗处的隔栅既被用作进风,同时也作为污水的排水口使用,台面下端有出水龙头,专门用于排放污水。4.13装备就位后,若要防止移动,可以使用螺丝刀穿入支撑脚的定位孔中旋转,直到支撑脚的高度与脚轮的高度等高为止。4.14注意

49、检查仪器的运行情况，并填写仪器使用登记表5 仪器维护5.1使用注意。该仪器在日常使用中请注意符合“4注意事项”要求5.2作业完工后维护清洗台面及墙体，保持装备整洁。喷洒酒精对操作区空间消毒,或用紫外线灭菌。如遇泼溅,在完工后拆除进风格栅清洗污染的负压风道。检查送风及排风过滤器压差监测仪表是否在正常范围。如遇非正常状况,请关机调整0位后再次开机验证。5.3定期维护5.3.1应检查电源线外皮有否破损,如遇外皮损坏请及时更换, 以保持装备的电器安全性能。5.3.2应检查接地性能,每次维护时掀开台面检查连接电源插头地插销的黄绿双色线与机壳间是否连接完好。用于连接的螺钉应紧固。5.3.3应检查风机运行时

50、有否异常声。异常声主要有两方面原因所致,均应掀开顶板排除或修理：工作时杂物被卷进冈机风机叶轮故障。5.3.4照明灯管及紫外线灯管为易耗品,定期维护时可以考虑更换。5.3.5从可维修性出发,对风机、照明、灭菌分三路设置电流保险器,方便用户判别故障。5.3.6若插上钥匙开关,红色指示灯不亮,则故障的一个原因可能是：装备背部与电源线相连接的插座口中的保险丝烧掉,在这个插座口中厂家提供了个保险丝的备件只要把它重新装上，装备即可使用。5.4严格按照仪器的关机程序关机。6 期间核查6.1 每三年进行一次。由技术监督局按部颁标准执行。6.2一年进行一次。由厂家提供 7 相关记录仪器设备使用登记表 ABCD医

51、院检验科 微生物室作业指导书文件编号：ABCD-3-WS-10版本/修订号：A/0主题内容飞鸽牌离心机操作维护规程生效日期：20090808 第 28 页 共41 页飞鸽牌离心机操作维护规程1 技术参数参数缩写 检测原理最高范围20000rpm定时范围0-60min最大相对离心力25480g最大容量300ml输入功率810VA噪音75db电源220V50HZ外型长尺寸450x540x655mm熔断器规格T250V6A2 适用范围 适用于中小实验室作血浆、血清、沉淀物.痰液等分离工作。3 操作步骤(1)打开盖板，小心将待离心试管放入护管内，注意对称两边护管内的重量应小于1克； (2) 盖上盖板，

52、接通电源，调节到所需的速度和时间，开启电源开关；(3) 时间旋钮回至“0”处时，离心机自动停止工作，完成离心目的；(4) 等旋转停止后，打开盖板取出离心管；(5) 工作日结束时，应拔出电源插头，确保安全。4样品要求：无特殊要求5 注意事项（1）为了延长使用寿命，减少故障发生，必须注意对称两边离心管护管内的等重要求；（2）为确保离心机内气溶胶不造成实验室污染，应在停止旋转后方可打开盖板。（3）仪器不使用时请罩防尘罩。（4）注意检查仪器的运行情况，并填写仪器使用登记表。 5 仪器维护（1）日常维护保持机外清洁，注意对称平衡，观察噪音异常；（2）季维护每季度用消毒液清洗护管套及机内；（3）按需维护根

53、据使用频率及时更换碳刷，勿使碳刷后金属丝磨擦整流子轴柱，造成硬性损坏；(4) 严格按照仪器的关机程序关机。 6 期间核查飞鸽离心机的定标不需要特别的周期间隔，本实验室飞鸽牌离心机由XX市计量质量检测研究所校准。7 相关记录(3) 仪器使用登记表 ABCD医院检验科 血库作业指导书文件编号：ABCD-3-XK-01版本/修订号：A/0主题内容血库工作制度生效日期：20090808 第 29 页 共41 页血库工作制度1. 输血科（血库）工作人员必须遵守劳动纪律，坚守工作岗位，如有特殊情况需暂时离开，必须向有关人员交接，说明去向、事由、时间并按时返回，杜绝脱岗现象。2. 一般输血应预先填写血型申请

54、单测定血型，需输血时再填写输血申请单，各申请单均应由医生逐项填写清楚（包括已测知的血型）。急诊输血亦应同时将血型申请单及输血申请一并送血库，否则应拒收并立即通知有关医生补齐。3. 血库人员在收到申请单及血样后，应认真核对申请单上的病人姓名、性别、年龄、住院号、病区、床号及临床诊断，并与血样标签核对是否完全相符，如血样所贴标签与申请单内容不符，应立即退回重送，经核实无误后方可进行血型及配血交叉试验。4. 血库人员应严格按操作规范操作，如确遇难以判断的结果，应向科室负责人或有关上级医生报告，并认真复查，直至结果明确无误，方可发血以确保安全。5. 如发现采供血机构所发血液的血型标记有误，或标签内容模

55、糊不清，应作好记录，然后通知采供血机构退回复核，并应即时向科室负责人及医务科报告。6. 病员血型确定后，原则上应配发同型血。如急症输血，又一时无同型血，可酌情发给O型红细胞，最好是Rh阴性血。紧急发血时，血袋上应标明未完成配血试验，同时，应尽快完成配血试验，如发现配血不合，应立即通知临床医生停止输血。7. 备用血液的申请，须按“输血申请和审批制度”严格执行。8. 血液一经领出，原则上不得退回。如有特殊原因，且出库时间未超过半小时，血液保存完好，经输血科（血库）检查合格后方可酌情退血。 ABCD医院检验科 血库作业指导书文件编号：ABCD-3-XK-02版本/修订号：A/0主题内容交叉配血生效日

56、期：20090808 第 31 页 共41 页交叉配血（凝聚胺法）1. 原理凝聚胺（polymatching）法首先利用低离子介质降低溶液的离子强度，减少红细胞周围的阳离子云，促进血清（浆）中的抗体与红细胞相应抗原结合，再加入带亚电荷的高价阳离子多聚物-凝聚胺溶液，中和红细胞表面的负电荷，缩短细胞间距，形成可逆的非特异性聚集，并使IgG型抗体直接凝集红细胞。加入中和液后，仅由凝聚胺引起的非特异性聚集，会因电荷中和而分散，而由抗体介导的特异性凝集则不会分散。2. 标本采集：2.1 标本种类：抽取静脉血3-4ml待凝固后分离血清，将细胞配成5盐水悬液将供血者血样以同样方法分离血清(浆)和红细胞悬液

57、。2.2 标本要求：抗凝和干燥管均可，如用抗凝血主张用EDTAK2（mg/dz）抗凝标本应无溶血，切标签齐全。3. 标本储存：急诊标本30分钟内完成操作，标本应至4冰箱保存7天。4. 标本运输：室温运输。5. 标本拒收标准：细菌污染。溶血标本，标签不齐全不能作测定。6. 试剂：6.1 试剂名称：凝聚胺试剂(polymatching)6.2 试剂生产厂家：(台资)珠海贝索生物技术有限公司。6.3 试剂组成：试剂1. 低离子介质(LowLonic Medium，LIM).试剂打开使用后，可置室温贮存，未开封者2-10度贮存，有效期为2年。试剂2. 凝聚胺溶液(PolybreneSolution).贮存及有效期同上。试剂3. 重悬液(ResuspendingSolution).贮存及有效期同上。试剂4. 8.5生理盐水。7. 仪器：7.1 血型血清索离心机：XTL-4.7 上海离心机械研究所7.2 离心机：上海手