蛋白质和主要必需氨基酸的测定.ppt

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1、 l 蛋 白 质 是 植 物 的 重 要 组 成 成 分 ， 也 是 农 产 品 品 质 中 最 重要 的 成 分 。l 它 的 含 量 依 作 物 种 类 、 部 位 、 生 育 时 期 、 品 种 特 性 而 有变 化 。 植 物 各 部 位 器 官 中 蛋 白 质 含 量 也 不 同 ， 其 中 以 籽粒 中 最 多 ， 如 豆 类 可 达 45 -55 ， 其 次 是 花 、 叶 、 茎 和根 。l 作 物 在 不 同 的 生 育 阶 段 根 部 位 吸 收 的 氮 ， 不 断 向 新 生 组织 输 送 ， 在 接 近 成 熟 时 期 ， 茎 叶 中 的 氮 向 贮 存 器 官 输 送

2、 ，合 成 的 蛋 白 质 集 中 于 种 子 中 。 作 物 蛋 白 质（ 干 基 ） 作 物 蛋 白 质（ 干 基 ） 作 物 蛋 白 质（ 干 基 ） 作 物 蛋 白 质（ 干 基 ）菜 豆洋 扁 豆速 豌 豆蚕 豆大 豆亚 麻向 日 葵 (仁 )棉 籽 (仁 )小 麦黑 麦 15.030.524.634.122.034.027.035.029.450.42.030.821.130.228.642.019.330.014.424.1 大 麦燕 麦稻 米玉 米小 米 (仁 )高 梁荞 麦 (仁 ) 10.620.48.017.37.814.59.013.210.221.59.515.312

3、.819.0 马 铃 薯冬 油 菜甜 菜萝 卜胡 萝 卜洋 葱大 蒜菠 菜芹 菜番 茄 0.72.71.01.50.71.40.61.20.61.91.92.86.72.31.33.60.30.8 茄辣 椒南 瓜黄 瓜甘 蓝花 椰 菜浆 果核 桃高 梁 叶高 梁 茎 0.61.20.71.10.41.00.50.91.22.62.40.31.916.128.912.417.54.07.5 l 蛋 白 质 是 生 命 的 物 质 基 础 ， 它 的 含 量 是 衡 量 农 、 畜 、 水 产品 品 质 和 营 养 价 值 的 重 要 指 标 。l 测 定 植 物 各 部 分 中 蛋 白 质 的

4、含 量 ， 对 其 品 质 鉴 定 、 品 种 选育 、 改 善 作 物 生 育 条 件 和 调 节 作 物 体 内 新 陈 代 谢 和 提 高 蛋白 质 含 量 等 有 重 要 意 义 。l 对 产 品 加 工 方 式 及 其 产 品 质 量 有 影 响 。l 在 育 种 、 食 品 和 饲 料 等 工 作 中 常 常 需 要 测 定 蛋 白 质 的 含 量 。 为 什 么 要 测 定 蛋 白 质 ？ l 氨 基 酸 是 组 成 蛋 白 质 的 基 本 单 位 ， 也 是 蛋 白 质 的 分 解 产 物 。l 氨 基 酸 的 分 析 测 定 是 研 究 蛋 白 质 、 酶 的 化 学 组 成

5、 及 性 质 的重 要 手 段 。l 动 植 物 产 品 中 的 氨 基 酸 以 多 种 形 式 存 在 ， 大 致 可 分 为 构 成蛋 白 质 的 氨 基 酸 和 游 离 的 氨 基 酸 两 种 。l “ 第 一 、 第 二 限 制 氨 基 酸 ” 的 赖 氨 酸 和 色 氨 酸 ， 是 必 需 氨基 酸 ， 但 人 类 和 动 物 自 身 无 法 合 成 ， 须 从 食 物 中 直 接 吸 收 。l 氨 基 酸 的 含 量 是 衡 量 谷 物 、 饲 料 蛋 白 质 的 重 要 标 准 之 一 。为 什 么 要 测 定 氨 基 酸 ？ l 蛋 白 质 的 分 析 方 法 很 多 ， 可

6、分 为 两 类 ： (1)利 用 蛋 白 质 的 共 性 ， 即 含 氮 量 ； (2)利 用 蛋 白 质 中 特 定 氨 基 酸 残 基 、 酸 (碱 ) 性 基 团 和 芳 香 基 团 测定 蛋 白 质 含 量 。l 最 常 用 的 方 法 是 开 氏 （ 凯 氏 ） 法 测 定 含 氮 量 。l 粗 蛋 白 质 ： 开 氏 法 测 定 结 果 中 因 其 含 有 氨 基 酸 、 酰 胺 等 非 蛋 白质 氮 ， 故 称 “ 粗 蛋 白 质 ”l 纯 蛋 白 质 ： 开 氏 法 测 定 中 ， 如 果 蛋 白 质 用 重 金 属 盐 等 沉 淀 分 离以 后 ， 进 行 全 氮 测 定 ，

7、 由 氮 换 算 而 成 的 蛋 白 质 的 含 量 ， 则 称 为“ 纯 蛋 白 质 ” 。 l 籽 粒 中 粗 蛋 白 质 的 测 定l 同 类 种 子 中 蛋 白 质 的 测 定 (染 料 结 合 -DBC法 )l 同 类 种 子 中 蛋 白 质 的 测 定 (双 缩 脲 法 ) H2SO4-K2SO4-CuSO4-Se消 煮 法 （ 开 氏 法 ）l 方 法 原 理 ： 植 物 中 的 蛋 白 质 含 量 基 本 上 是 不 变 的 。可 用 开 氏 法 消 煮 定 氮 ， 再 将 测 得 的 含 氮 值 乘 以 蛋 白质 换 算 系 数 ， 即 得 粗 蛋 白 质 含 量 。l 换

8、算 系 数 ： 平 均 6.25蛋 白 质 平 均 含 氮 16%， 不同 植 物 籽 粒 换 算 系 数 见 P286表 14-2。 注 意 问 题l 籽 粒 样 品 在 开 氏 法 分 解 时 ， 硝 态 氮 的 部 分 氨 化 是 不 可避 免 的 。l 因 此 ， 蔬 菜 类 特 别 是 可 能 含 有 硝 态 氮 的 化 合 物 的 样 品 ，需 要 用 水 杨 酸 固 定 硝 态 氮 化 合 物 ， 然 后 用 开 氏 分 解 测定 总 氮 量 ， 同 时 用 离 子 电 极 法 测 定 硝 态 氮 的 含 量 ， 再从 总 氮 量 减 去 硝 态 氮 量 后 乘 以 蛋 白 质

9、换 算 系 数 即 得 蛋白 质 含 量 。 l 开 氏 法 是 测 定 全 氮 量 的 经 典 方 法 ， 是 丹 麦 人 开 道 尔(J.Kjeldahl)于 1883年 用 来 研 究 蛋 白 质 变 化 的 ， 后 来 被用 于 测 定 各 种 形 态 的 有 机 氮 。l 设 备 简 单 易 得 ， 结 果 可 靠 ， 为 一 般 实 验 室 所 采 用 。 至今 尚 无 别 的 方 法 能 与 其 比 拟 或 将 其 取 代 。 因 此 国 际 谷物 化 学 协 会 (ICC)和 美 国 分 析 化 学 家 协 会 (AOAC)以 及我 国 都 把 开 氏 法 作 为 标 准 的

10、分 析 方 法 。 l 开 氏 法 是 测 定 全 氮 量 的 经 典 方 法 ， 是 丹 麦 人 开 道 尔 于 1883年 用 来 研 究 蛋 白 质 变 化 的 ， 后 来 被 用 于 测 定 各 种 形 态 的 有机 氮 。l 开 氏 定 氮 法 ： (Kjeldahl determination)： 在， 即 可 计 算 出 样 品中 的 氮 量 。有 机 氮 铵 盐 NH 3 NH4+ l 开 氏 法 也 有 缺 点 ， 主 要 是 操 作 手 续 较 繁 ， 分 析 的 速 度较 慢 ， 试 剂 费 用 较 高 。l 近 年 已 出 现 几 种 以 开 氏 法 原 理 为 基 础

11、 的 全 自 动 或 半 自动 的 开 氏 定 氮 仪 。l 瑞 典 的 Tecator公 司 生 产 的 开 氏 1030分 析 仪 (Kjeltec Auto 1030 Analyzer)、 日 本 生 产 的 kjel-Auto自 动 氮 和蛋 白 质 分 析 仪 和 丹 麦 FOSS公 司 生 产 的 KjelFOSS自动 蛋 白 质 分 析 仪 等 。 l 消 煮 炉 或 电 炉l 消 煮 管 (或 开 氏 瓶 )100mL或 50mLl 半 微 量 定 氮 装 置l 半 微 量 滴 定 管 l 20 gL-1 H3BO3指 示 剂 溶 液 ： 称 取 H3BO3 (分 析 纯 )2

12、0g溶 于 1L水 中 。 每 升 H3BO3溶 液 加 甲 基 红 -溴 甲 酚 绿 混 合指 示 剂 20mL， 并 用 稀 酸 或 稀 碱 调 节 至 紫 红 色 (pH=4.5)。l 0.01 molL -1(1/2H2SO4)或 0.02 molL -1 HCl标 准 溶 液 。l 其 他 试 剂 同 第 四 章 (土 壤 全 氮 的 测 定 )。 (1) 样 品 的 消 煮 称 取 烘 干 样 品 (过 0.25mm筛 ) 0.3000 0.5000g置 于 50mL或100mL开 氏 瓶 或 消 煮 管 中 ， 加 入 混 合 催 化 剂 1.8g， 加 几 滴 水湿 润 后 ，

13、 加 5mL浓 H2SO4， 小 心 轻 摇 后 (最 好 加 塞 放 置 过 夜 )，盖 上 小 漏 斗 ， 将 消 煮 管 放 置 在 消 煮 炉 上 ， 开 始 时 用 小 火 加 热 ，待 消 煮 液 呈 棕 色 时 ， 可 提 高 温 度 ， 消 煮 至 溶 液 呈 清 亮 带 浅 蓝色 时 ， 再 加 热 约 10min， 取 下 冷 却 至 温 热 时 ， 将 消 煮 液 无 损地 转 入 100mL容 量 瓶 中 ， 冷 却 至 室 温 后 定 容 并 放 置 澄 清 。 （ 2） 氮 的 测 定 用 移 液 管 吸 取 澄 清 待 测 液 5.00或 10.00mL放 入 半

14、 微量 定 氮 仪 中 进 行 定 氮 。 同 时 作 空 白 试 验 和 核 对 试 验 。 见 教 材 P46 凯 氏 定 氮 仪 半 自 动 l 氮 含 量 换 算 成 蛋 白 质 的 系 数 ， 一 般 采 用 6.25， 这 是 由 蛋白 质 平 均 含 氮 16%为 根 据 导 出 的 值 ， 但 不 同 植 物 籽 粒 中蛋 白 质 的 含 氮 量 有 差 异 ， 故 由 氮 换 算 为 蛋 白 质 的 系 数 也稍 有 不 同 ， P286。l 以 定 量 蛋 白 质 为 目 的 的 总 氮 量 测 定 中 ， 开 氏 法 分 解 时 ，硝 态 氮 的 部 分 氨 化 是 不

15、可 避 免 的 ， 因 此 蔬 菜 类 特 别 是 可能 含 有 硝 态 氮 的 化 合 物 的 样 品 ， 需 要 用 水 杨 酸 固 定 硝 态氮 化 合 物 ， 用 开 氏 分 解 测 定 总 氮 量 ;同 时 用 其 他 方 法 测定 硝 态 氮 的 含 量 ， 再 从 总 氮 量 减 去 硝 态 氮 量 后 乘 以 蛋 白质 换 算 系 数 即 得 蛋 白 质 含 量 。 注 意 问 题 l 本 法 测 定 的 结 果 为 粗 蛋 白 质 的 含 量 。l 如 要 测 定 纯 蛋 白 质 的 含 量 ， 则 样 品 应 先 用 蛋 白 质 沉淀 剂 碱 性 硫 酸 铜 、 碱 性 醋

16、 酸 铅 、 200gL-1 250gL-1单 宁 或 100gL-1三 氯 乙 酸 等 处 理 ， 将 蛋 白 质 从 水 溶 液中 沉 淀 出 来 ， 再 测 定 此 沉 淀 的 全 氮 量 ， 乘 以 蛋 白 质的 换 算 系 数 即 可 得 ： “ 纯 蛋 白 质 ” 量 。注 意 问 题 蛋 白 质 中 的 碱 性 氨 基 酸 (赖 氨 酸 、 精 氨 酸 和 组 氨 酸 )的 -NH2、咪 唑 基 和 胍 基 以 及 蛋 白 质 末 端 自 由 氨 基 在 pH=2 3的 酸 性 缓冲 液 体 系 中 呈 阳 离 子 状 态 存 在 ， 可 以 和 偶 氮 磺 酸 染 料 类 物

17、质如 橘 黄 G等 的 阴 离 子 结 合 ， 形 成 不 溶 于 水 的 蛋 白 质 -染 料 络合 物 而 沉 淀 下 来 ， 通 过 测 定 一 定 量 样 品 与 一 定 量 体 积 的 已 知浓 度 染 料 溶 液 反 应 前 后 溶 液 中 染 料 浓 度 的 变 化 ， 可 计 算 出 样品 的 染 料 结 合 量 ， 即 每 克 样 品 所 结 合 的 染 料 的 毫 克 数 。 l 主 要 仪 器l 试 剂l 操 作 步 骤l 结 果 计 算l 参 见 教 材 P286 l 该 法 是 间 接 测 定 种 子 中 蛋 白 质 的 方 法 。 方 法 简 单 、 快 速 ，与

18、开 氏 法 的 相 关 性 较 好 ， 但 准 确 性 较 差 ， 适 用 于 大 批 同 类样 品 的 筛 选 工 作 。l 不 适 用 随 意 混 合 物 的 样 品 的 测 定 。l 如 在 筛 选 同 种 作 物 种 子 的 大 批 样 品 时 ， 不 必 知 道 蛋 白 质 的绝 对 含 量 ， 只 要 测 定 样 品 的 染 料 结 合 量 即 可 进 行 比 较 。注 意 问 题 方 法 原 理 l 蛋 白 质 的 结 构 ， 具 有 类 似 于 双 缩 脲 的 反 应 基 团 。 在 碱性 条 件 下 能 与 Cu2+生 成 紫 红 色 可 溶 性 络 合 物 ， 蛋 白 质

19、含 肽 键多 时 反 应 呈 紫 色 ， 反 之 肽 键 少 时 ， 反 应 呈 红 色 。 这 种 颜 色 反应 称 为 双 缩 脲 反 应 (或 称 缩 二 脲 反 应 )。l 实 验 证 明 ， 蛋 白 质 溶 液 浓 度 在 1-15mg之 间 ， 其 呈 色 溶 液 的 吸收 值 与 蛋 白 质 含 量 成 正 比 关 系 。 故 可 用 此 反 应 进 行 蛋 白 质 的测 定 。 l样 品 处 理 与 测 定 参 见 教 材 P289。 l 适 用 于 大 批 品 种 筛 选 、 育 种 等 工 作 中 的 蛋 白 质 测 定 。l 一 般 的 生 化 分 析 中 采 用 的 双

20、 缩 脲 试 剂 是 碱 性 硫 酸 铜 水 溶液 ， 不 适 用 于 种 子 蛋 白 质 的 分 析 ， 因 为 它 不 稳 定 ， 而 且会 浸 出 有 色 物 质 、 脂 肪 及 一 些 淀 粉 物 质 ， 干 扰 比 色 测 定 。而 异 丙 醇 双 缩 脲 试 剂 ， 可 以 减 少 这 些 物 质 的 溶 解 ， 排 除干 扰 。l 本 法 对 温 度 及 时 间 的 要 求 严 格 ， 否 则 再 现 性 不 高 。 采 用室 温 20-25 ， 须 于 120 190min内 比 色 ； 40 为 15-70 min显 色 稳 定 ； 而 在 60 连 续 振 荡 条 件 下

21、显 色 ， 则 反 应时 间 缩 短 为 5min。注 意 问 题 l 氨 基 酸 分 析 方 法 包 括 测 定 氨 基 酸 的 总 含 量 及 测 定 全 氨基 酸 中 每 种 氨 基 酸 的 含 量 两 个 方 面 。l 测 定 氨 基 酸 总 量 的 方 法 与 蛋 白 质 分 析 有 密 切 的 关 系 。许 多 测 定 蛋 白 质 含 氮 含 量 的 方 法 如 开 氏 定 氮 法 及 各 种比 色 法 均 可 用 于 测 定 氨 基 酸 的 总 含 量 。l 测 定 氨 基 酸 总 含 量 的 方 法 还 有 甲 醛 滴 定 法 ， 方 法 简 单 ，快 速 ， 广 泛 应 用

22、于 实 际 工 作 中 。 l 全 氨 基 酸 ： 色 谱 法 测 定 。l 薄 层 层 析 色 谱 法 ： 60年 代 发 展 起 来 的 分 析 方 法 ， 操 作 简便 ， 设 备 简 单 、 层 析 速 度 快 、 灵 敏 度 高 ， 广 泛 应 用 于 分离 和 测 定 氨 基 酸 。l 气 相 色 谱 法 ： 气 相 色 谱 法 具 有 分 析 速 度 快 、 灵 敏 度 高 的特 点 ， 仪 器 的 成 本 也 比 氨 基 酸 自 动 分 析 仪 低 。 尤 其 是 在分 析 氨 基 酸 的 对 映 异 构 物 及 超 微 量 (ng)样 品 中 气 相 色 谱 有特 殊 的 作

23、 用 。l 氨 基 酸 自 动 分 析 仪 ： 应 用 最 广 泛 的 分 析 氨 基 酸 的 专 用 仪器 。 该 仪 器 的 基 本 原 理 仍 然 是 离 子 交 换 柱 层 析 。 l 方 法 原 理 氨 基 酸 分 析 仪 的 中 心 是 离 子 交 换 层 析 柱 ， 当 流 动 相 (缓 冲 溶 液 )推动 氨 基 酸 流 经 装 有 阳 离 子 交 换 树 脂 的 色 谱 柱 时 (磺 酸 型 Na+柱 )，氨 基 酸 与 树 脂 中 的 交 换 基 团 进 行 离 子 交 换 ， 当 用 不 同 的 pH值 的缓 冲 溶 液 进 行 洗 脱 时 ， 因 交 换 能 力 的 不

24、 同 而 将 氨 基 酸 混 合 物 分 开 ，流 出 色 谱 柱 的 氨 基 酸 再 与 茚 三 酮 在 100 下 反 应 生 成 紫 色 物 质 茚二 酮 炔 -茚 二 酮 胺 (DYDA)， 显 色 （ 570nm） 后 的 氨 基 酸 由 光 度 计检 测 。 氨 基 酸 自 动 分 析 仪 l (1) 全 氨 基 酸 试 样 的 制 备 （ 盐 酸 水 解 ） 。l (2) 胱 氨 酸 及 色 氨 酸 的 水 解 （ 盐 酸 分 解 过 程中 破 坏 ， 需 另 行 制 备 ） 。l (3) 植 物 性 产 品 中 游 离 氨 基 酸 试 样 的 制 备 。l (4) 上 机 测

25、定 。操 作 步 骤 l 赖 氨 酸 是 一 种 必 须 的 氨 基 酸 。 缺 乏 赖 氨 酸 ， 人 与 动 物 不 仅 不 能 正 常发 育 ， 还 会 引 起 某 些 疾 病 。 在 绝 大 多 数 谷 物 中 ， 赖 氨 酸 是 最 缺 乏 的氨 基 酸 ， 被 称 为 第 一 限 制 氨 基 酸 。l 对 人 体 的 作 用 ：l 1 提 高 智 力 、 促 进 生 长 、 增 强 体 质 。 l 2 增 进 食 欲 、 改 善 营 养 不 良 状 况 。 l 3 改 善 失 眠 ， 提 高 记 忆 力 。 l 4 帮 助 产 生 抗 体 、 激 素 和 酶 ， 提 高 免 疫 力

26、 、 增 加 血 色 素 。 l 5 帮 助 钙 的 吸 收 ， 治 疗 防 止 骨 质 疏 松 症 l 6 降 低 血 中 甘 油 三 酯 的 水 平 ， 预 防 心 脑 血 管 疾 病 的 产 生 。 l 赖 氨 酸 在 谷 物 贮 存 、 加 工 过 程 中 ， 又 很 不 稳 定 ， 易 于 脱 去氨 基 、 被 氧 化 或 是 发 生 变 质 而 破 坏 ， 变 成 营 养 上 的 “ 无效 ” 。l 测 定 方 法 ： 2,4,6三 硝 基 苯 磺 酸 (TNBS法 )、 1-氟 -2,4-二硝 基 苯 法 (FDNB法 、 2-氯 -3,5-二 硝 基 吡 啶 法 (CNPY法

27、)等 。这 类 方 法 操 作 手 续 繁 长 费 时 ， 还 需 要 某 些 特 殊 的 试 剂 ， 不适 用 于 成 批 样 品 的 分 析 。l 染 料 结 合 法 -DBL法 ： 国 内 外 应 用 较 广 泛 的 、 简 便 易 行 。 原 理 ： 染 料 结 合 法 可 用 于 测 定 样 品 中 蛋 白 质 的 碱 性 氨 基 酸 ，包 括 赖 氨 酸 、 精 氨 酸 和 组 氨 酸 。 如 果 先 将 样 品 用 丙 酸 酐 处理 ， 丙 酸 酐 便 将 赖 氨 酸 的 -NH2的 酰 基 掩 蔽 ， 使 其 失 去 和 染料 结 合 的 能 力 。 然 后 分 别 测 定 酰

28、 化 前 后 的 染 料 结 合 量 DBC值 ： 酰 化 前 的 测 定 值 为 赖 氨 酸 +组 氨 酸 +精 氨 酸 。 而 酰 化 后只 是 组 氨 酸 +精 氨 酸 ， 以 上 两 项 测 定 结 果 的 差 值 ， 就 可 计 算之 赖 氨 酸 的 含 量 。 l 样 品 处 理 ： 称 取 已 粉 碎 过 60目 筛 酰 化 和 不 酰 化 样 品 各 两份 ， 重 量 见 下 表 。 分 别 加 30 35mL具 塞 玻 璃 的 或 聚 四 氟乙 烯 的 试 管 中 ， 标 明 为 A、 B管 (酰 化 样 品 )和 C、 D管 (不 酰化 样 品 )。 同 时 应 另 称 样

29、 品 测 定 水 分 含 量 。样 品 种 类 称 样 量 （ mg）酰 化 样 品 不 酰 化 样 品水 稻麦 类普 通 玉 米高 赖 氨 酸 玉 米高 梁谷 子 大 豆其 它 豆 类花 生 仁向 日 葵 子棉 子 700或 800500800700或 5001000900180275300200125 500或 600400600400或 50070070010017520015090 l 色 氨 酸 是 重 要 的 必 需 氨 基 酸 之 一 。 它 在 人 与 动 物 的 新 陈代 谢 中 起 着 重 要 的 作 用 ， 某 些 代 谢 产 物 对 人 类 的 大 脑 功能 及 生 长

30、 发 育 影 响 很 大 ， 公 认 为 “ 第 二 限 制 性 氨 基 酸 ” 。l 预 防 糙 皮 病 ： 已 经 发 现 人 类 缺 乏 色 氨 酸 会 患 糙 皮 病 （ 皮炎 ） ， 常 食 玉 米 会 发 生 。l 调 节 情 绪 ： 色 氨 酸 是 脑 部 化 学 物 质 5-羟 色 胺 的 重 要 前 体 ，能 帮 助 调 节 情 绪 。 l 改 善 睡 眠 ： 色 氨 酸 生 成 的 5-羟 色 胺 ， 能 改 变 睡 眠 持 续 时间 。 l 在 我 们 所 吃 的 食 物 中 ， 每 100克 食 物 色 氨 酸 含 量 较 高 的 有 ：海 蟹 （ 含 801毫 克 ）

31、l 豆 腐 皮 （ 含 715毫 克 ）l 肉 松 （ 含 710毫 克 ）l 生 西 瓜 子 （ 含 631毫 克 ）l 黄 豆 （ 含 485毫 克 ）l 黑 芝 麻 （ 含 402毫 克 ）l 全 脂 奶 粉 （ 含 372毫 克 ）l 生 葵 花 子 （ 含 365毫 克 ） 。 目 前 提 出 的 测 定 方 法 很 多 ， 归 结 起 来 有 三 类 ：l 一 是 找 出 一 种 理 想 的 水 解 方 法 ， 使 色 氨 酸 和 其 它 的 氨 基 酸一 样 ， 且 用 离 子 交 换 色 谱 进 行 测 定 ；l 二 是 暴 露 具 有 反 应 活 性 的 吲 哚 环 ， 然

32、后 与 某 些 试 剂 反 应 生成 带 色 化 合 物 ， 进 行 比 色 测 定 ；l 三 是 利 用 色 氨 酸 天 然 特 有 的 近 紫 外 吸 收 峰 ， 对 色 氨 酸 进 行分 光 光 度 或 荧 光 测 定 。 其 中 乙 醛 酸 法 具 有 简 单 、 快 速 的 特点 。 l 谷 物 中 蛋 白 质 经 木 瓜 蛋 白 酶 作 用 水 解 出 色 氨 酸 ， 然 后 在 浓硫 酸 存 在 的 情 况 下 ， Fe3+可 将 乙 酸 氧 化 为 乙 醛 酸 ， 2mol色氨 酸 能 与 1mol乙 醛 酸 缩 合 ， 产 生 hopkins-cole反 应 ， 生 成红 紫

33、 色 的 化 合 物 ， 其 红 紫 色 的 强 度 与 色 氨 酸 的 含 量 在 一 定范 围 内 成 正 比 ， 其 最 大 的 吸 收 峰 在 545nm， 进 行 比 色 测 定 。 Fe3+ 混 合 显 色 剂 l 主 要 仪 器l 试 剂l 操 作 步 骤l 结 果 计 算l 注 意 事 项 见 教 材 P298 思 考 题1. 什 么 是 粗 蛋 白 质 ？ 如 何 测 得 纯 蛋 白 质 的 含 量 ？2. 主 要 农 作 物 的 蛋 白 质 换 算 系 数 是 多 少 ， 为 什 么 不同 作 物 的 籽 粒 其 蛋 白 质 换 算 系 数 会 有 差 异 ？3. 含 硝 态 氮 高 的 样 品 ， 如 何 测 定 其 蛋 白 质 含 量 ？4. 为 什 么 染 料 结 合 法 、 双 缩 脲 法 能 用 于 测 定 蛋 白 质含 量 ？ 其 方 法 原 理 ， 适 用 范 围 是 什 么 ？ 为 什 么 它们 都 不 能 直 接 测 得 蛋 白 质 的 含 量 ？5. 氨 基 酸 含 量 测 定 有 哪 些 方 法 ？