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1、食用菌菌种制备技术菌种：原意是指抱子（相当于植物的种子），但在实际生产中，常将经过人工培养的纯 菌丝体连同培养基质一同叫做菌种。菌种分为母种（一级种）、原种（二级种）和栽培种（三 级种）三级。母种（一级）：将纯菌丝体或抱子在试管培养基中繁殖而成。可以繁殖原种，也适宜菌 种保藏。原种（二级）：母种菌丝在固体培养基上繁殖而成。这一过程增强菌丝对培养环境的适 应性，又起到扩繁的作用。原种可以直接出菇。栽培种（三级）：由原种扩繁而成。主要是为了扩繁，为生产提供足够的菌种。菌种制备：也称种子制备，是指菌种在一定条件下，经过扩大培养成为具有一定数量和 质量的纯生产菌种的制备过程。以作接入发酵罐中进一步扩大
2、菌体量及合成产物之用。种子 制备包括抱子制备和菌丝体制备（见图）。方甘蘇务it fit1业冲雜干蜒孑3炳妁百嚴范& 5e I） T 战 #14其中（1）（4 ）为抱子制备过程。保存在沙土管或冷冻管中的生产菌种，无菌操作挑取少 许，接入琼脂斜面培养基上，在25c（或较高温度）下培养57天（或较长时间）。所得抱 子还需进一步用较大表面积的固体培养基以获得更多抱子，对于霉菌类抱子制备，多数采用 大米、小米之类的天然培养基。将培养成熟的斜面抱子制成悬浮液，接种到扁瓶固体培养基 上，于2528c培养14天。将成熟的扁瓶抱子于真空中抽干，使水分降至10%以下，并 放入4C冰箱中备用。一次制得的抱子瓶可在生
3、产上延续使用半年左右。放线菌抱子的培 养基大多是采用麸皮或豌豆浸出液、牛肉膏及无机盐与琼脂制成的。将斜面抱子接入扩大的 扁瓶抱子培养基中，于2837C培养514天。所获得的大量抱子可直接作为种子罐（6） 的种子。如果有些生产菌种不产抱子，如赤霉素产生菌或产抱子不多的,则可采用摇瓶（5）液体 培养制得菌丝体，作种子罐的种子。沖子罐的目的是使接入有限的抱子或菌丝体迅速发芽、 生长、繁殖成大量菌体。其中的培养基组分应是易于被菌体利用的碳源（如葡萄糖）和氮源（如玉米浆等），及无机盐（如磷酸盐）等。作为发酵罐（7 ）的种子应是生命力旺盛、染色深、 菌丝粗壮，无杂菌及异常菌体。接种量一般在10%20%。一
4、、母种的制备用试管制成斜面培养基，并接种原始试管种（保留种），并用于生产的母 种即为生产母种，可用于扩接原种。1. 培养基配方配方一马铃薯培养基：马铃薯200克、葡萄糖20克、琼脂20克、水1000毫升、PH值 自然；配方二 综合马铃薯培养基：马铃薯200克、葡萄糖20克、磷酸氢二钾2克、硫酸镁0.5 克、维生素B1 10毫克、琼脂20克、水1000毫升、PH值自然；配方三 合成培养基：马铃薯20克、葡萄糖20克、磷酸二氢钾2克、蛋白胨10克、牛肉 膏5克、酵母膏5克、硫酸镁0.8克、水1000毫升、PH值自然；2 培养基制作方法先将马铃薯洗净去皮切成薄片，称取200克，加水1000毫升，煮沸
5、15-20分钟，用4 层纱布过滤，取其滤液并补足水至1000毫升，加入琼脂20克，再加热，琼脂溶化后，再 加入其它配方中的药品。培养基的分装，应在培养凝固前进行（琼脂培养基40C凝固）一般用漏斗，或分装瓶， 下端连接一段软橡皮管，橡皮管下面再连接一小段玻璃管，在橡皮管上安装一个止水弹簧夹， 分装时将玻璃管细口插入试管内，应注意不使培养基黏附在试管口上，以免杂菌感染，每支 试管装入量为试管长度1/4。装好后塞上棉塞，每10支试管扎一捆，棉塞上用塑料纸封扎 好，用线绳捆扎起来。3.灭菌将分装后的试管扎捆好,放入高压蒸气灭菌锅，在1.1kg/cm2压力下（锅入温度达121C） 灭菌30分钟，使微生物
6、包括芽抱全部杀死。待压力降到0度时，慢慢放出锅内气体，试管 取出后趁热将试管口一端垫高，斜靠在桌上的小木棒上，使管内培养液斜面上长度达2/3 3/5,试管上面覆盖毛巾，冷却后即成斜面固体培养基。4接种、培养斜面冷却后通过无菌操作方法将菌种接入，置28C、3天后将温度降至24C继续培养， 7-15天左右，菌丝长满整个试管斜面，即成生产）母种。为检验培养基灭菌是否彻底，可在 常温下放置48小时，未发现有杂菌产生，即可接种、培养，长满菌丝后即可转管或转接原 种。二、原种、制备 母种接种到原种培养基上，进行扩大繁殖育种即为原种，原种一般采用广 口瓶或袋装。1培养基配方配方一木屑麸皮培养基：阔树木78%
7、、麸皮20%、糖1%、石膏粉1%、水65%；配方二棉籽壳木屑培养基：棉籽壳80%、木屑15%、糖1%、麸皮5%、过磷酸钙 3%、石膏粉1%；2. 拌料与装袋选用新鲜无霉变原料，根据生产所需的数量，计算配料总量，将麸皮、石膏粉均匀的混 合在培养料里，糖和过磷酸钙溶于水后，按上述干料量加入水，比例为1： 1.3拌匀，培养 料含水量60%为宜，含水量以手紧握培养料指缝间有水欲滴为宜。堆闷30分钟后，装瓶（袋）。 用机械或人工装袋稍加压实，在袋口外套入塑料环，形成象瓶子一样，然后在袋口内塞松紧 适宜棉塞、或用牛皮纸包扎好。3. 灭菌原种灭菌方法有两种，高压灭菌和常压灭菌。高压灭菌又称加压蒸气灭菌，灭菌
8、原理: 在高温（121C以上）、高压（kg/cm2）条件下灭菌23小时，将芽抱在内的微生物全部杀死。 常压灭菌称流通蒸气灭菌，由于灭菌设备、条件和基本因素的不同，温度变动在9 0103C 之间，其热力、穿透力不强，在一定温度下维持足够时间达到灭菌目的，通常在100C下维 持1012小时。4. 接种与培养不论用接种箱或接种室接种，在接种前，需对接种箱或接种室用0.2%的来苏水或漂白 粉进行消毒处理，然后将灭菌过的料瓶（袋）放在箱内，用烟雾剂密闭薰蒸消毒。接种室消毒， 一间房需点燃3盒50克规格烟雾剂；接种箱消毒每次仅用重量为4克，一支母种试管可接 4-6瓶（袋）原种。将接种后的菌种瓶（袋）放入发菌室培养。培养室温度2226C，相对湿度 70%以下，发菌期间应保持良好的通风条件。原种从接种到菌丝长满瓶（袋）需30-40天。三、栽培种制备原种进一步扩繁，即为栽培种。栽培种一般采用塑料袋制备，用无棉盖体 封口。一瓶原种可接50-60瓶（袋）栽培种。栽培种培养基配方及拌料、装袋、灭菌、接种、 发菌管理与原种相同。
食用菌菌种制备技术
