稳转细胞株构建流程及应用领域

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1、稳转细胞株构建流程及应用领域稳定细胞株广泛用于许多重要的应用，包括生物制品（如重组蛋 白和单克隆抗体）生产、药物筛选和基因功能研究。开发稳定细胞株 的过程通常始于将所需的质粒转染至选定的宿主细胞，一般是CHO或 HEK 293细胞。转染后，研究人员筛选和定量分析高表达的细胞克隆。 旦检测到这些高产细胞株，便进一步对这些细胞和其产生的蛋白质 进行验证。传统上用于细胞株开发的人工筛选方法既费时又费力，因此对高 通量自动化解决方案提出了巨大的需求。下面常规的工作流程有助于确定可以帮助您进行研究的系统。XXTYansr BellonXP Medio and CHO Growth A*cul-fLir

2、e电叩切ManoclariBlIty assurannClQHHS4t 9nnle-Cell PrinterI lotMIcrEsplebe Hnadcr with IrriBgJInQ CytameiEr A GCarripllance SoftwaroGlcane producUvtty EEieen Ing titerArrtJ bad Ihs srniBnl nfl/Eller ffifikl ngSlriQle-Eell IsDlBrUn/ eeII YlBbllUtrClnnsSelKt j&OlorTiHlAd 鬧凰币niHlIsiri g| IrffigBr匸回If帆嗨 IIh

3、 rnrrw IlSniCaunlr Plglp&lf细胞株开发流程：1. 转染-将外源DNA （编码目标重组蛋白）导入宿主细胞的过程。 携带插入其基因组的外源DNA且可长时间保持其表达重组蛋白能力的 一小群细胞被称为稳转细胞。2. 抗体筛选/滴度测定-从转染后的细胞池中发现和挑选优质克隆。通过定量测定细胞表面目标蛋白或分泌抗体（滴度测定）的表达情况 来筛选大的细胞群，将能增加发现高亲和力产物或高产量的概率。3.单细胞分离和细胞活性-必须分离并克隆单个活细胞以确保细胞群的基因相同，从而显著降低表达的异质性。4. 单克隆性保证-当开发用于生物治疗药物的细胞株时，从质量 和监管角度来看，确保该细胞

4、株是源于单个祖细胞的单克隆细胞至关 重要。单克隆性的记录（治疗细胞株的一个监管指标）通常都是图像 形式的，据此可记录单细胞的图像并将其纳入监管文件中。5. 克隆产量筛选和滴度-这是一项测定克隆源性细胞株所产生的 重组蛋白或抗体产量的检测。开发细胞株的应用和方法1细胞表面表达筛选许多在细胞表面表达的蛋白都是用于发现和开发生物医药的靶标。 例如，G蛋白偶联受体（GPCR）是最大的细胞表面蛋白类别，并且是 大约40%现有药物的靶标。从转染后的细胞池中发现和挑选细胞表面 GPCR表达增加的高价值克隆可能极具挑战性。2、细胞活力细胞株开发就是发现源自单个细胞的克隆，其可稳定高表达目标 治疗性蛋白。此过程

5、中分离单个活细胞是关键的第一步。单细胞增殖 形成克隆，随后可评估其目标治疗蛋白的产率。3、克隆产量筛选和滴度识别优质克隆的一个重要步骤是测定单细胞来源克隆的表达量。 使用传统方法筛选产率费力且耗时，通常包含多个步骤，包括从有限 稀释中分离单细胞之后再用ELISA进行滴度评估。4、传统克隆方法与f.sight的比较随着细胞株开发法规越来越严格，研究人员将需要进行单细胞克 隆并提供细胞株源于某个单细胞的证据（克隆性证据）。在本研究中， 我们开展了六组实验以证实f.sight和CSI相结合的工作流程可在单轮 克隆中保证较高的单克隆性。5、单克隆性保证细胞株开发和单克隆性验证是制备生物制药分子（如单克隆抗体） 过程中的关键步骤。在分离稳定表达目标蛋白的单个活细胞后，可建 立细胞株。此过程中的一个关键结点是记录单克隆性证据。单克隆性 证据通常都是图像形式，据此可生成单细胞图像并将其随附在监管文 件中。6、单细胞分选细胞株开发就是发现源自单个细胞的克隆，其可稳定高表达目标 治疗性蛋白。此过程的第一步是分离活的单细胞。有限稀释是一种依 赖于统计概率的技术，但很耗时。