培养基的配制与灭菌实验报告

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1、培养基的配制与灭菌实验报告篇一：培养基的制备与灭菌实验报告陕西师范大学远程教育学院生物学实验报告 报告题目培养基的制备与灭菌 姓名刘伟学号专业生物科学批次/层次指导教师学习中心培养基的制备与灭菌一、目的要求1. 掌握微生物实验室常用玻璃器皿的清洗及包扎方法。2. 掌握培养基的配置原则和方法。3. 掌握高压蒸汽灭菌的操作方法和注意事项。二、基本原理 牛肉膏蛋白胨培养基： 是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基，有时又称为普通培养基。由 于这种培养基中含有一般细胞生长繁殖所需要的最基本的营养物质，所以可供细 菌生长繁殖之用。高压蒸汽灭菌： 主要是通过升温使蛋白质变性从而达到杀死微生物的效果。将灭

2、菌的物品放 在一个密闭和加压的灭菌锅内，通过加热，使灭菌锅内水沸腾而产生蒸汽。待蒸 汽将锅内冷空气从排气阀中趋尽，关闭排气阀继续加热。此时蒸汽不溢出，压力 增大，沸点升高，获得高于100C的温度导致菌体蛋白凝固变性，而达到灭菌的 目的。三、实验材料1. 药品：牛肉膏、蛋白胨、NaCl、琼脂、lmol/L的NaOH和HCl溶液。2. 仪器及玻璃器皿：天平、高压蒸汽灭菌锅、移液管、试管、烧杯、量筒、角瓶、培养皿、玻璃漏斗等。3. 其他物品：药匙、称量纸、pH试纸、记号笔、棉花等。四、操作步骤（一）玻璃器皿的洗涤和包装1玻璃器皿的洗涤玻璃器皿在使用前必须洗刷干净。将三角瓶、试管、培养皿、量筒等浸入含

3、 有洗涤剂的水中用毛刷刷洗，然后用自来水及蒸馏水冲净。移液管先用含有洗 涤剂的水浸泡，再用自来水及蒸馏水冲洗。洗刷干净的玻璃器皿置于烘箱中烘干 后备用。2灭菌前玻璃器皿的包装（1）培养皿的包扎：培养皿由一盖一底组成一套，可用报纸将几套培养皿 包成一包，或者将几套培养皿直接置于特制的铁皮圆筒内，加盖灭菌。包装后 的培养皿须经灭菌之后才能使用。（2）移液管的包扎：在移液管的上端塞入一小段棉花（勿用脱脂棉），它的 作用是避免外界及口中杂菌进入管内，并防止菌液等吸入口中。塞入此小段棉 花应距管口约0. 5cm左右，棉花自身长度约l1.5cm。塞棉花时.可用一外围拉 直的曲别针、将少许棉花塞入管口内。棉

4、花要塞得松紧适宜，吹时以能通气而又 不使棉花滑下为准。先将报纸裁成宽约5cm左右的长纸条，然后将已塞好棉花的移液管尖端 放在长条报纸的一端，约成45C角，折叠纸条包住尖端，用左手握住移液 管身，有手将移液管压紧.在桌面上向前搓转，以螺旋式包扎起来。上端剩余纸 条，折叠打结，准备灭菌。（二）液体及固体培养基的配制过程1. 液体培养基配制（1）称量（假定配制1000ml培养基）按培养基配方比例依次准确地称取3.0g牛肉膏、10.0 g蛋白胨、5.0gNaCl 放入烧杯（或1000ml刻度搪瓷杯）中.牛肉膏常用玻棒挑取，放在小烧杯或表 面皿中称量，用热水溶化后倒入烧杯。（2）溶化在上述烧杯中先加入少

5、于所需要的水量（如约700ml）,用玻棒搅匀，然后， 在石棉网上加热使其溶解，将药品完全溶解后，补充水到所需的总体积（1000ml）； 如果配制固体培养基时，将称好的琼脂放人已溶的药品中，再加热溶化，最后补 足所损失的水分。（3）调 pH调pH： 一般用pH试纸测定培养基的pH。用剪刀剪出一小段pH试纸，然后 用镊子夹取此段pH试纸，在培养基中蘸一下，观看其pH范围，如培养基偏酸或 偏碱时，可用1mol/L NaoH或1mol/L HCl溶液进行调节。调节pH时，应逐滴加 入NaOH或HCI溶液，防止局部过酸或过碱，破坏培养基中成分。边加边搅拌， 并不时用pH试纸测试，直至pH达7.4-7.6

6、。反之，用1mol/LHCl进行调节。2. 固体培养基的配制配制固体培养基时，应将已配好的液体培养基加热煮沸，再将称好的琼脂 （1.52）加入，并用玻棒不断搅拌，以免糊底烧焦。继续加热至琼脂全部融化，最后补 足因蒸发而失去水分。（三）培养基的分装根据不同需要，可将已配好培养基分装入试管或三角瓶内，分装时注意不要 使培养基沾污管口或瓶口，造成污染。如操作不小心，培养基沾污管口或瓶口时， 可用镊子夹一小块脱脂棉，擦去管口或瓶口的培养基，并将脱脂棉弃去。1试管的分装取一个玻璃漏斗，装在铁架上，漏斗下连一根橡皮管，橡皮管下端再与另一 玻璃管相接，橡皮管的中部加一弹簧夹。分装时，用左手拿住空试管中部，并

7、将 漏斗下的玻璃管嘴插入试管内，以右手拇指及食指开放弹簧夹，中指及无名指夹 佐玻璃管嘴，使培养基直接流入试管内。装入试管培养基的量视试管大小及需要 而定，若所用试管大小为15X150 mm时，液体培养基可分装至试管高度1/4 左有为宜；如分装固体或半固体培养基时，在琼脂完全融化后，应趁热分装于试 管中。用于制作斜面的固体培养基的分装量为管高1 /5（约34mI），半固体培 养基分装量为管高的13为宜。2三角瓶的分装用于振荡培养微生物时，可在250 m1用于制作平板培养基用时，可在250 m1三角瓶中加入150ml粉（按2计算），灭菌时瓶中琼脂粉同时被融化。（四）棉塞的制作及试管、三角瓶的包扎

8、为了培养好气性微生物，需提供优良通气条件，同时为防止杂菌污染，则必须对通入试管或三角瓶内空气预先进行过滤除菌。通常方法是在试管及三角瓶口 加上棉花塞等。1试管棉塞的制作制棉塞时，应选用大小、厚薄适中的普通棉花一块，铺展于左手拇指和食指 扣成的团孔上，用右手食指将棉花从中央压入团孔中制成棉塞然后直接压入试 管或三角瓶口。也可借用玻璃棒塞入，也可用折叠卷塞法制作棉塞。制作的棉塞应紧贴管壁，不留缝隙，以防外界微生物沿缝隙侵入，棉塞不宜 过紧或过松，塞好后以手提棉塞，试管不下落为准。棉塞的 2/3 在试管内，1 /3在试管外。目前也有采用硅胶塞代替棉塞直接盖在试管口上。将装好培养基并塞好棉塞或硅胶塞的

9、试管捆成一捆，外面包上一层牛皮纸。 用记号笔注明培养基名称及配制日期，灭菌待用。2三角瓶棉塞制作通常在棉塞外包上一层纱布，再塞在瓶口上。有时为了进行液体振荡培养加 大通气量，则可用8层纱布代替棉塞包在瓶口上，目前也有采用硅胶塞直接盖在 瓶口上。在装好培养基并塞好棉塞或包扎八层纱布或盖好硅胶塞的三角瓶口上，再包 上一层牛皮纸并用线绳捆好，灭菌待用。（五）培养基的灭菌将上述培养基以0.103MPa,l21C, 20min高压蒸气灭菌。灭菌过程：1. 加水：首先将内层锅取出，再向外层锅内加入适量的水，使水面没过加 热蛇管，与三角搁架相平为宜。切勿忘记检查水位，加水量过少，灭菌锅会发生 烧干引起炸裂事

10、故。2. 装料：放回内层锅，并装入待灭菌的物品。注意不要装得太挤，以免妨 碍蒸汽流通而影响灭菌效果。装有培养基的容器放置时要防止液体溢出，三角瓶 与试管口端均不要与桶壁接触，以免冷凝水淋湿包扎的纸而透入棉塞。3. 加盖：将盖上与排气孔相连的排气软管插入内层锅的排气槽内，摆正锅 盖，对齐螺口，然后以对称方式同时旋紧相对的两个螺栓，使螺栓松紧一致，勿 使漏气，并打开排气阀。4. 排气：打开电源加热灭菌锅，将水煮沸，使锅内的冷空气和水蒸汽一起 从排气孔中排出。一般认为当排出的气流很强并有嘘声时，表明锅内的空气已排 尽，沸腾后约需5分钟。5. 升压：冷空气完全排尽后，关闭排气阀，继续加热，锅内压力开始

11、上升。6. 保压：当压力表指针达到所需压力时，控制电源，开始计时并维持压力 至所需的时间。如本实验中采用0.1Mpa,121.5C, 20分钟灭菌。灭菌的主要因素是温度而不是压力，因此锅内的冷空气必须完全排尽后，才 能关闭排气阀，维持所需压力。7. 降压：达到灭菌所需的时间后，切断电源，让灭菌锅温度自然下降，当 压力表的压力降至“0”后，方可打开排气阀，排尽余下的蒸汽，旋松螺栓，打开锅盖，取出灭菌物品，倒掉锅内剩水。压力一定要降到“0”后，才能打开排 气阀，开盖取物。否则就会因锅内压力突然下降，使容器内的培养基或试剂由于内外压力不平衡而冲出容器口，造成瓶口被污染，甚至灼伤操作者。（六）斜面和平

12、板的制作1斜面的制作 将已灭菌装有琼脂培养基的试管，趁热置于木棒或玻棒上，使成适当斜度， 凝固后即成斜面。斜面长度不超过试管长度l / 2为宜。如制作半团体或固体深 层培养基时，灭菌后则应垂直放置至凝固。2平板的制作将装在三角瓶或试管中已灭菌的琼脂培养基融化后，待冷至50C左右倾入 无菌培养皿中。温度过高时，皿盖上的冷凝水太多；温度低于50C，培养基易 于凝固而无法制作平板。平板的制作应在火旁进行，左手拿培养皿，右手拿三角瓶的底部或试管，左 手同时用小指和手掌将棉塞打开，灼烧瓶口，用左手大拇指将培养皿盖打开一缝， 至瓶口正好伸入，倾入1015mL培养基，迅速盖好皿盖，置于桌上，轻轻旋转平 皿，

13、使培养基均匀分布于整个平皿中，冷凝后即成平板。（七）培养基的灭菌检查灭菌后的培养基，一般需进行无菌检查。最好取出12管（瓶），置于37C 温箱中培养12天，确定无菌后方可使用。篇二：培养基的制备与灭菌实验报告（详细）一、实验题目：培养基的制备与灭菌二、实验目的：1、明确培养基的配置原则，掌握配置方法。2、了解灭菌的原理，学习掌握灭菌器的使用方法。三、实验器材：1、药品：牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、水、琼脂。2、仪器：三角瓶、培养皿、试管、线绳、棉花、烧杯、报纸、移液管、试 管架、铁针、量筒。四、实验原理：1、培养基的制备包括一下几种成分：（1）水分：主要成分。(2) N源：包括无机氮和有机氮。(3

14、) C源：主要是含碳有机物、碳氢化合物等。(4) 无机盐：如 NaCl、KH2P04 等。微量元素：Cu、K、Mg、S、P、Zn。有些还需要添加“生长因子”，通常是维生素类、某些氨基酸或核酸等2、培养基配置的原则根据不同的培养对象及培养目的，选用不同的培养基，但有机物总量不得超 过15%，盐类一般不超过1% 。培养基有以下分类：按成分：天然培养基、合成培养基、半合成培养基按状态：固体培养基、半固体培养基、液体培养基按用途：基础培养基、营养培养基、鉴别培养基、选择培养基培养基配好后应立即灭菌，防止营养物质中的微生物富集。3、灭菌：用理化手段杀灭一切微生物的营养体，包括芽孢和孢子，在实验中应对所有

15、 仪器、操作场所、药品及培养基灭菌或消毒。(1) 高压蒸汽灭菌：将物品放入封闭的加压灭菌器，加热使灭菌锅套间的 水沸腾产生蒸汽，将冷空气排尽，压力上升，使水沸点变高，导致菌体蛋白质变 性，一般0. lMPa、121C、1530min可以彻底灭菌，本次实验灭菌20min。若是 含糖培养基，110C、30min。(2) 干热灭菌：微生物细胞内蛋白质因高温而凝固变性。因高温，所以含 水量小，不利于蛋白质受热变性，所以温度高，时间长。(3) 紫外灭菌：诱导胸腺嘧啶二聚体形成抑制DNA复制。(4) 过滤除菌：实验室中用微孔滤膜(孔径一般为0.22 口m)。除病菌需更 小。五、实验步骤：1、牛肉膏蛋白胨培

16、养基的制备依次准确称取0.5g牛肉粉、1.0g蛋白胨、0.5gNaCl放入烧杯，加入100mL水，用玻璃棒搅匀溶解，移入三角瓶，并加入1.5g琼脂。加上棉塞，迅速拔出 能发出清脆声响即可，用报纸包住并系好麻绳。2、包移液管和培养皿(1) 包一包培养皿(一包五个)：用手压紧、塞好，折出棱角，包好后摇晃 没有培养皿相互碰撞的声音即可。(2) 包2支移液管：用棉花塞好移液管尾部，露出l2cm即可。取长条报 纸，一端折90角，紧密严实沿30角卷好移液管，尾部叠好防止散开。3、高压蒸汽灭菌(1) 灭菌前要先看水位是否合适。(2) 将包好的待灭菌物品放入内层锅，不要装得太挤，棉塞不应染上培养 基。(3)

17、加盖，两两对称旋紧螺栓。(4) 设定条件：0.1MPa、121C、20min,进行加热。(5) 先打开排气阀，待空气排尽后，关上排气阀。(6) 结束后，自然降温，压力降为0后，打开排气阀取出物品。4、干热灭菌(1) 将包好的待灭菌物品放入电热干燥箱内，关好门箱。(2) 设定条件：160170C，恒温2h。(3) 结束后，切断电源，自然降温，降到70C以下后开箱取物。六、思考题：1、你配制的是什么培养基？选择培养基。2、选择培养基与鉴别培养基的区别？这两种培养基的应用情况。选择培养基是指根据某种微生物的特殊营养要求或其对某化学、物理因素的 抗性而设计的培养基。其功能是使混合菌样中的劣势菌变成优势

18、菌，从而提高该 菌的筛选效率。如以纤维素作唯一碳源的培养基可分散到分解纤维素的微生物分 散酵母菌或霉菌时，可添加适量的青霉素、四环素或链霉素，以抑制细菌和放线 菌的生长。鉴别培养基是在成分中加入有能与目的菌的无色代谢产物发生显色反应的 指示剂，从而达到只须用肉眼辨别颜色就能方便地从近似菌落中找到目的菌菌落 的培养基，此类培养基一般用于鉴定不同微生物。如EMB即伊红美乳糖造就基。 大肠杆菌分解乳糖产生大量混合酸，可染上酸性伊红，伊红和美兰结合，菌落被 染成深紫色，从菌落外貌的发射光中还可以看到绿色金属发光。篇三：实验二培养基的配制和灭菌实验二培养基的配制和灭菌一、实验目的微生物的生长发育都有一定

19、的营养需要，培养基即人工培养微生物、为其生 长发育提供所需营养的基质。培养基配好后必须经过灭菌方能用于分离培养微生 物试验，因此培养基的配制和灭菌是植物病理实验室中最基本的工作，通过本次 实验学习植病实验室中常用培养基的配制方法和高压灭菌锅的使用方法。二、内容、材料和方法（一）培养基的配制培养基按组成成分及对这些成分了解的程度分为天然培养基、半组合培养基 和组合培养基三类，从物理性质上又分为液体培养基和固体培养基两类，培养基 的种类不同，配制方法也有差异，限于时间，本次实验仅配制马铃薯琼脂培养基 和牛肉膏蛋白胨培养基。1马铃薯蔗糖琼脂培养基（PSA）这是植病实验室最常用的培养基（简称PSA），

20、主要用于植物病原真菌的分离 和培养，有时也用于植物病原细菌。成分：马铃薯200克蔗糖1020克二琼脂1720克二加水至1000毫升方法：将马铃薯洗净去皮切块，加水煮沸半小时，用双层纱布滤去薯块，补 足水量，加入琼脂，加热熔化，再加糖，待完全化后，乘热用双层纱布过滤分装， 塞好棉塞高压灭菌。马铃薯蔗糖琼脂培养基略带酸性，培养真菌无需调节pH， 培养细菌则调节pH至中性，此培养基留作下次实验分离培养病原真菌用，故不 必调节pH。5人分作一组，1、2组各作此培养基500毫升，其中200毫升分装试管，每 管约10毫升，灭菌后摆成斜面；其余300毫升，分装在3个250300毫升的三 角瓶中，每瓶装100

21、毫升左右，灭菌后妥善保存，留待下次实验使用。2 ：:肉汁胨培养基(BPA)这种培养基主要用于细菌的分离和培养成分：牛肉浸膏3克蛋白胨510克蔗糖10克酵母浸膏1克琼脂1720克加水至1000毫升方法：先将琼脂加热熔化于大部水中，再将其它各成分用少量水化开加入， 调节pH至7,趁热用双层纱布过滤，分装，塞棉塞高压灭菌。牛肉浸膏和酵母浸膏十分粘稠，不易称重，称重时用小烧杯盛装，以玻璃棒 沾取，故要先称好杯和棒的重量后，再开始沾取浸膏称重，称后将杯和棒上粘着 的浸膏洗净于锅中。调节培养基pH至中性的方法如下：配成1N的HCl和NaOH， 并另分别稀释配成1/20 N的HCl和NaOH。取培养基2毫升

22、，加蒸馏水7.5毫升， 加指示剂溴百里酚蓝指示剂5滴，这时如培养基的测样呈黄色则用有刻度吸管加 入1/20 N的NaOH若呈蓝色则加入1/2O N的HCl，使培养基最后呈草绿色即调节到中性，此刻所加酸或碱的毫升数的25 倍即等于在1000毫升培养基中所需要加入lN的NaOH或HCl的毫升数(注意这 次是作500毫升培养基)，加蒸馏水稀释的目的防止调节过程中培养基凝固。调节pH至中性的简便方法是用石蕊示纸。也可以用多孔白色瓷板，在孔中 加少量培养基和溴百里酚蓝或其它指示剂12滴，根据颜色反应，在所配的培 养液中加入少量lN的NaOH或HCl,然后再取样测定，如此反复多次，达到所需 求的反应为止。

23、5人分为一组，3、4两组各作此培养基500毫升，其中200毫升分装试管， 每管约100毫升，灭菌后摆成斜面，其余300毫升分装在3个250300毫升的 三角瓶中，每瓶装100毫升左右，灭菌后妥善存放，留待下次实验使用。此外，1、2、3、4各组均制备15管试管装和2瓶三角瓶装的无菌水。(二)培养基的灭菌为了得到某种病原物的纯培养，配好的培养基必须经过灭菌才能使用，灭菌 是指用物理或化学方法完全杀死器物表面及其内部的所有微生物，灭菌与消毒的 概念不同，消毒则是指消灭器物或植物组织表面的某些微生物(能常称杂菌)，而 不是消灭所有的微生物。灭菌的方法很多，植病实验室常用的有干热灭菌和高压蒸汽灭菌两种方

24、法， 一般培养皿、吸管等玻璃仪器用干热灭菌法进行灭菌。而培养基和实验用的土壤， 则用高压蒸汽灭菌法进行灭菌，具体灭菌方法和步骤如下：1 : I干热灭菌法(1) 将培养皿、吸管等玻璃器皿洗净干燥后，用旧报纸包好，或装入特制的 铁筒中(每个吸管用纸包好后装入铁筒)，包纸时应将吸取的一端放在取时先折开 的一端，以便取用时手勿触及要求灭菌的一端。(2) 将包装好的玻璃仪器摆入电热烘箱中，彼此间留有一定的空隙以便流通 空气。(3) 关紧箱门，打开排气孔接上电源。(4) 待箱内空气排出到一定程度时，闭上排气孔，继续加热至一定温度后， 用定温固定温度，灭菌温度一般165C175C保持1小时即可。(5) 待自

25、然降温冷却后(60C以下)才能开门取出玻璃器皿，避免由于温度突 然下降而引起玻璃器皿碎裂。2 ：:高压蒸汽灭菌法高压蒸汽灭菌法又称湿热灭菌，它的原理是利用高压来提高蒸汽的温度，达 到灭菌的目的，其操作步骤如下：(1) 关好排水阀门放入清水至标度为止，注意水量一定要加足，否则容易造 成事故。(2) 将要灭菌的培养基、灭菌水等装入铁丝笼中，并用牛皮纸盖好后放入灭 菌锅中，关上器盖，旋紧螺旋时，先将每个螺旋旋转到一定程度(不要太紧)，然 后再旋紧相对的两个螺旋，以达到平衡旋紧，否则易造成漏气，达不到彻底灭菌 的目的。(3) 通电加温，同时打开排气活门，排尽锅内的空气，即活门冲出的全部是 蒸气时则表示

26、彻底，此时可关闭排气活门，如果过早关闭活门，排气不彻底，也 达不到彻底灭菌的目的。通常当压力表指针升至5磅时，打开排气活门放气，降 至零点，再关闭活门。(4) 压力表的指针上升时，锅内温度也逐渐升高，当压力表指针升至15磅时， 蒸气温度相当于120C121C(等于一个大气压)，此时开始计算灭菌时间，控 制热源，使处于15磅压力保持30分钟，即能达到完全灭菌的目的，然后停止加 温。(5) 稍微打开一点排气活门，使锅内蒸气缓慢排除，然后逐渐开大活门，气 压徐徐下降，注意勿使排气过快，否则会使锅内的培养基沸腾而冲脱或沾湿棉花 塞，但排气太慢又使培养基在锅内，受高温处理时间过长，这样对培养基也是不 利

27、的。一般从排气到打开锅盖以10分钟左右为好。(6) 当压力表指针降到零、锅内蒸气完全排尽时，打开锅盖取出培养基，如 需制备固体斜面培养基时，则应趁热将试管斜放在桌上，上面盖上报纸以免落灰 尘，冷却后便可收起。厂(7 )最后将高压灭菌器内的剩余水排出。(8)抽取上述灭菌的培养基，放入25C温箱中，48小时后不见杂菌生出，便 证明培养基已达到灭菌目的，可以使用。此外，有些培养基在经高压灭菌后，其营养成分容易分解而失去使用价值， 此时可采用间歇蒸气灭菌法，即将培养基放入高压灭菌器内，加热至100C，保 持1小时，每天灭菌一次，连续进行三次，即可达到灭菌的目的，又不至使营养 物质分解。三、思考题1:培

28、养基有哪几种类别？各有什么特点和用途？2 -干热灭菌和高压蒸汽法适用范围如何？电热烘箱和高压锅如何操作？ 各有哪些使用注意事项？3厂怎样检查培养基灭菌是否彻底？关于微生物实验一培养基的配制和灭 菌的思考题！急！ 20xx-5-8 19:32提问者：喜欢和爱123丨浏览次数：1520 次1.在一般情况下为什么试管或三角瓶培养基要用棉花塞而不用软木塞或橡皮 塞？ 2.高压蒸汽灭菌过程中为什么一定要排放锅内的冷空气？我来帮他解答 20xx-5-8 19:58满意回答1.棉花起到过滤、透气的作用啊！并且棉花的开头大 小是可以尽可能改变的，而不需要非得找到合适的软木或橡皮塞！ 2.高压蒸汽 灭菌是将待灭

29、菌的物品放在一个密闭的加压灭菌锅内，通过加热，使灭菌锅隔套 间的水沸腾而产生蒸汽。待水蒸汽急剧地将锅内的冷空气从排气阀中驱尽，然后 关闭排气阀，继续加热，此时由于蒸气不能溢出，而增加了灭菌锅内的压力，从 而使沸点增高，得到高于100C的温度。导致菌体蛋白质凝固变性而达到灭菌的 目的。 在使用高压蒸汽灭菌锅灭菌时，灭菌锅内冷空气的排除是否完全极为重 要，因为空气的膨胀压大于水蒸汽的膨胀压，所以，当水蒸汽中含有空气时，在 同一压力下，含空气蒸汽的温度低于饱和蒸汽的温度。 灭菌更彻底！ 常用培养基的制备、灭菌与消毒20xx-09-20 00:00:00来源：评论：0我要评论一、实验目的 了解培养基的

30、配制原理；掌握配制培养基的一般方法和步骤； 了解常见灭菌、清毒基本原理及方法；掌握干热天菌、高压蒸汽灭菌及过滤除菌的操作方法。二、实验原 理 培养基是人工按一定比例配制的供微生物生长繁殖和合成代谢产物所需要的 营养物质的混合物。培养基的原材一、实验目的 了解培养基的配制原理；掌握配制培养基的一般方法和步骤；了解常见灭菌、清毒基本原理及方法；掌握干热天菌、高压蒸汽灭菌及过滤除菌的操作方法。二、实验原理 培养基是人工按一定比例配制的供微生物生长繁殖和合成代谢产物所需要的营养物质的混合物。培养基的原材料可分为碳源、氮源、无机盐、生长因素和 水。根据微生物的种类和实验目的不同，培养基也有不同的种类和配

31、制方法。牛肉膏蛋白胨培养基是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基，有时又 称为普通培养基。由于这种培养基中含有一般细胞生长繁殖所需要的最基本的营 养物质，所以可供微生物生长繁殖之用。干热天菌、高压蒸汽灭菌方法主要是通过升温使蛋白质变性从而达到杀死微 生物的效果。1灭菌锅、pH度纸、棉花、牛皮纸、记号笔、麻绳、纱布、吸管、培养皿、 电烘箱、注射器、微孔滤膜过滤器、镊子等。牛肉膏、蛋白胨、NaCl、琼脂四、实验内容1. 称量f溶化f调pH过滤f分装f加塞f包扎f灭菌f无菌检查2. 干热灭菌：装入待灭菌物品f升温f恒温f降温f开箱取物3. 高压蒸汽灭菌：加水f装物品f加盖f加热f排冷空气f加压f恒

32、压f降 压回零f排汽f取物f无菌检查4. 过滤除菌：组装灭菌f连接f压滤f无菌检查f清洗灭菌五、关键步骤及注意事项1.要严格按配方配制。2调pH不要过头。3干热灭菌要注意物品不要堆放过紧，注意温度的时间控制，70oC以下放 物、取物。4.高压灭菌要注意物品不要过多，加热后排除冷空气，到时降压回零取物。 环节的操作技术与应用。（3）学习并掌握培养基的高压蒸气灭菌原理、操作关键技术和灭菌技术。 二、实验原理培养基的制备原理培养基是按照微生物生长发育的需要，用不同组分的营养物质调制而成的营 养基质。人工制备培养基的目的，在于给微生物创造一个良好的营养条件。把一 定的培养基放入一定的器皿中，就提供了人

33、工繁殖微生物的环境和场所。自然界 中，微生物种类繁多，由于微生物具有不同的营养类型，对营养物质的要求也各 不相同，加之实验和研究上的目的不同，所以培养基在组成原料上也各有差异。 但是，不同种类和不同组成的培养基中，均应含有满足微生物生长发育的水分、 碳源、氮源、无机盐和生长素以及某些特需的微量元素等。此外，培养基还应具 有适宜的酸碱度（pH值）和一定缓冲能力及一定的氧化还原电位和合适的渗透 压。根据制备培养基对所选用的营养物质的来源，可将培养基分为天然培养基、 半合成培养基和合成培养基三类。按照培养基的形态可将培养基分为液体培养基 和固体培养基。根据培养基使用目的，可将培养基分为选择培养基、加

34、富培养基 及鉴别培养基等。培养基的类型和种类是多种多样的，必须根据不同的微生物和不同的目的进 行选择配制，本实验分别配制常用培养细菌、放线菌和真菌的牛肉膏蛋白胨培养 基、高氏一号合成培养基和马铃薯蔗糖培养基等固体培养基。固体培养基是在液体培养基中添加凝固剂制成的，常用的凝固剂有琼脂、明 胶和硅酸钠，其中以琼脂最为常用，其主要成份为多糖类物质，性质较稳定，一 般微生物不能分解，故用凝固剂而不致引起化学成份变化。琼脂在95C的热水 中才开始融化，融化后的琼脂冷却到45C才重新凝固。因此用琼脂制成的固体 培养基在一般微生物的培养温度范围内（25C-37C）不会融化而保持固体状态。高压蒸气灭菌原理 高

35、压蒸汽灭菌是将待灭菌的物品放在一个密闭的加压灭菌锅内，通过加热， 使灭菌锅隔套间的水沸腾而产生蒸汽。待水蒸汽急剧地将锅内的冷空气从排气阀 中驱尽，然后关闭排气阀，继续加热，此时由于蒸汽不能溢出，而增加了灭菌器 内的压力，从而使沸点增高，得到高于100C的温度。导致菌体蛋白质凝固变性 而达到灭菌的目的。在同一温度下，湿热的杀菌效力比干热大，其原因有三：一是湿热中细菌菌 体吸收水分，蛋白质较易凝固，因蛋白质含水量增加，所需凝固温度降低 （表 V-2），二是湿热的穿透力比干热大（表V-3）；三是湿热的蒸汽有潜热存在，每 1克水在100C时，由气态变为液态时可放出2.26kJ（千焦）的热量。这种潜热，能迅速提高被灭菌物体的温度，从而增加 灭菌效力。表V-2蛋白质含水量与凝固所需温度的关系 卵自蛋白含水量（%）502518630分钟内凝固所需温度（C） 56 74-80 80-90 145 160-170