细胞信号转导与肿瘤.ppt

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1、细胞信号转导与肿瘤 引言：细胞信号转导与生命过程 问题的 提出和理论的产生 细胞信号转导理论概述 信号转导研究中的重大理论问题及热点领域 信号转导的研究方法与工具 信号转导理论研究及应用举例：在肿瘤发生 发展中的信号转导的意义 信号转导与肿瘤临床：诊断和治疗 细胞信号转导经典文献举例 引言 信号转导与生命过程 问题的提出和理论的产生 细胞信号转导理论建立以前的 细胞生物学 细胞的显微结构（胞膜、胞浆、胞核） 细胞的生理功能（生存、“活性”、 分裂增殖、胞间连接、吞饮、分泌、 迁移、死亡 ) 细胞组分的生物化学（脂、糖、核酸、 蛋白） 细胞的超微结构和亚细胞结构（脂质 双层膜结构、细胞器 ) 组

2、织生长需要 细胞分裂增殖 细胞 生长因子 病原体侵入 抗感染状态 细胞 抗原 细胞过度生长 细胞死亡 细胞 死亡因子 细胞骨架蛋 白表达、激活 牵动细胞移动 (Cell movement) 趋化因子 细胞粘附 细胞存活 (Survival) 抗凋亡因子 表达、激活 胞外信号 信号作用 于细胞 基因表 达改变 细胞表 型改变 细胞信号转导理论概述 胞外信号分子 (可溶性分子、细胞表面分子、组织基质分子 ) 靶细胞跨膜分子 (狭义受体如 EGFR或广义受体如 Integrin) 靶细胞受体（胞内段）化学变化（如磷酸化、二聚体形成） 靶细胞内信号转导分子化学变化与激活 （如磷酸化、去磷酸化、聚体形成

3、） 激活的信号转导分子进入胞核 进入胞核的转导分子作用于基因转录调控区 基因表达改变 Extracellular Signal Molecules 1. Growth Factors PDGF (Platelet-Derived Growth Factor), EGF (Epidermal Growth Factor), TGF- (Transforming Growth Factor-), EPO (Erythropoietin), NGF (Nerve Growth Factor), IGF (Insulin-like Growth Factor), TPO (Thrombopoietin

4、) 2. Cytokines IFN- (Interferon- ), IFN- (Interferon- ), TNF (Tumor Necrosis Factor), Interleukins (1, 2, 3, 4) 3. Death molecules Fas 4. Adhesion molecules Cadherins, Adhesin 5. Hormone Insulin 6. Stress Signal Transducing Receptors 1. Transmembrane receptors that have intrinsic enzymatic activity.

5、 Autophosphorylation Phosphorylation of other substrates A) Tyrosine kinases: PDGF-R, insulin-R, EGFR and FGF-R B) Tyrosine phosphatases: e.g. CD45 C) Guanylate cyclases: e.g. natriuretic peptide receptors) D) Serine/Threonine kinases: activin and TGF- receptors 2. Receptors that are coupled, inside

6、 the cell, to GTP- binding and hydrolyzing proteins (G-proteins). e.g., adrenergic receptors, odorant receptors, and certain hormone receptors (e.g. glucagon, angiotensin, vasopressin and bradykinin). 3. Receptors that are found intracellularly and upon ligand binding migrate to the nucleus where th

7、e ligand-receptor complex directly affects gene transcription e.g., STAT1, 3, 4, 5, 6 (Signal transducer and activator of transcription ) 4. Simple receptors: e.g., ion-channels that lead to changes in membrane electric potential 信号转导过程中的生物化学 磷酸化反应（酪氨酸激酶、丝 /苏氨 酸激酶） 蛋白质构象改变 去磷酸化反应（磷酸酶） 受体或其他信号转导分子的聚体

8、化 Signal Transducers Receptor Tyrosine Kinases (RTKs) contains: An extracellular ligand binding domain. An intracellular tyrosine kinase domain. An intracellular regulatory domain. A transmembrane domain. Tyrosine phosphorylation Interact with and phosphorylate Src homology domain 2 (SH2)-containing

9、 proteins (e.g., PLC-, Ras, PI-3K, etc) Phosphorylate other kinases phosphorylate proteins, which upon phosphorylated, can enter the nuclear and bind DNA regulatory regions. Class Examples Structural Features of Class I EGF receptor, NEU/HER2, HER3 cysteine-rich sequences II insulin receptor, IGF-1

10、receptor cysteine-rich sequences; characterized by disulfide-linked heterotetramers III PDGF receptors, c-Kit contain 5 immunoglobulin-like domains; contain the kinase insert IV FGF receptors contain 3 immunoglobulin-like domains as well as the kinase insert; acidic domain V vascular endothelial gro

11、wth factor (VEGF) receptor contain 7 immunoglobulin-like domains as well as the kinase insert domain VI hepatocyte growth factor (HGF) and scatter factor (SC) receptors heterodimeric like the class II receptors except that one of the two protein subunits is completely extracellular. The HGF receptor

12、 is a proto-oncogene that was originally identified as the Met oncogene VII neurotrophin receptor family (trkA, trkB, trkC) and NGF receptor contain no or few cysteine-rich domains; NGFR has leucine rich domain Characteristics of the Common Classes of RTKs Non-Receptor Protein Tyrosine Kinases (PTKs

13、) Two non-receptor PTK families: 1) The archetypapl PTK familty: Src-related proteins 2) Janus kinase (Jak) family Most non-receptor PTKs couple to cellular receptors that lack enzymatic activity themselves (e.g., CD4, CD8, TCR and all cytokine receptors such as IL-2R Receptor Serine/Threonine Kinas

14、es (RSTKs) Typical example: Receptors for the TGF- superfamily of ligands The TGF- superfamily include 30 multifunctional proteins, e.g., activins, inhibins and the bone morphogenetic proteins (BMPs). 17 RSTKs isolated are in 2 subfamilies: type I and type II receptors. Nuclear proteins responding t

15、o TGF- activation include c-Myc and Smad Ligands bind to the type II receptors Complexed with type I receptors Type II R phosphorylates type I receptor Initiation of signaling cascade Non-Receptor Serine/Threonine Kinases 1) cAMP-dependent protein kinase (PKA) 2) Protein kinase C (PKC) 3) Mitogen ac

16、tivated protein kinases (MAPK or ERK) (requiring phosphorylation of both tyrosine and threonine) G-Protein Coupled Receptors 1. 1000 GPCRs, most of which are orphan receptors) 2. Three different classes of GPCR: 1) GPCRs that modulate adenylate cyclase activity and produce cAMP 2) GPCRs that activat

17、e PLC-g leading to hydrolysis of polyphosphoinositides: angiotensin, bradykinin and vasopressin receptors. 3) Photoreceptor Intracellular Hormone Receptors 1. Residing within the cytoplasm. 2. The steroid/thyroid hormone receptor superfamily (e.g. glucocorticoid, vitamin D, retinoic acid and thyroid

18、 hormone receptors): bind steroid/thyroid hormone, translocate to nuclear and bind specific DNA sequences hormone response elements (HREs). * Phosphatases in Signal Transduction 1. Transmembrane PTPs: e.g., CD45. 2. Intracellular PTPs. 胞外信号分子 (可溶性分子、细胞表面分子、组织基质分子 ) 靶细胞跨膜分子 (狭义受体如 EGFR或广义受体如 Integrin

19、) 靶细胞受体（胞内段）化学变化（如磷酸化、二聚体形成） 靶细胞内信号转导分子化学变化与激活 （如磷酸化、去磷酸化、聚体形成） 激活的信号转导分子进入胞核 进入胞核的转导分子作用于基因转录调控区 基因表达改变 信号转导研究中的重大 理论问题及热点领域 信号转导通路的调控 磷酸化 去磷酸化调控 信号转导分子消长的调控（分子半衰期） 不同通路之间的效应调控 胞内内源性抑制物的调控功能 Cross-Talk 信号转导效应的特异性 When and Where? Cooperation with other signaling pathways? Pre-existing transcription

20、co-factors differentially expressed and activated in different cell types? Pre-existing co-activators of target proteins? Subcellular localization of transducers? Optimal level (or a threshold) of phosphorylation/dephosphorylation? 替代通路 （ Alternative Pathways) 信号转导的研究方法 与工具 一、蛋白质磷酸化状态的检测 1、免疫印迹 (pho

21、spho-protein specific antibodies) 2、免疫沉淀 (protein-specific antibody + phospho-AA antibody 3、流式细胞仪分析 4、 Luminex分析 二、信号转导分子过度表达或过度激活 1、 Overexpression by gene transduction 2、 Constitutively activated mutants 三、基因转录活性测定 1、 Electrophoretic mobility shift analysis (EMSA) 、 Reporter gene expression detect

22、ion 四、信号转导分子的表达或活性抑制 1、 Anti-sense 2、 RNAi 3、 Gene knock-out 4、 Dominant negative mutants (1) Ligand-binding site (2) Phosphorylation site (3) Docking site (4) Protein-protein binding site (5) DNA binding site 5、 Small-molecule inhibitors： e.g., tyrosine kinase inhibitor (TKi) 6、 Inhibitory oligopep

23、tides 信号转导在肿瘤发生 发展中的意义 Signaling molecules involved in cancer development/progression Receptors 1) Growth factor receptors: EGFR 2) Hormone receptor: ER, AR 3) Angiogenic receptros: VEGF, PDGF, IGF 4) Death receptors 5) The Integrin system Transducers 1) Ras 2) Raf 3) Rho family 4) PI-3K/Akt 5) Deat

24、h transducers 6) STAT-3 7) Transcription factors 1) c-Myc 2) c-Jun and c-fos 3) STAT-3 4) Biological Effects of Signaling Related to Cancer Development/Progression Cell immobilization Abrogation of apoptosis Activation of cell cycle and removal of cell cycle checkpoints Angiogenesis Cell invasion Me

25、tastasis Drug resistance Phosphorylation targets of PI-3K Akt Forkhead-related transcription factor 1 (FKHR- L1) 14-3-3 binding FKHR-L1 retaining in cytosol abrogation of gene activation by FKHR-L1 Akt Bad 14-3-3 binding Release of Bcl-2 and Bcl-X Cell survival Akt GSK3 GSK3 catalytic activity turne

26、d off Permitting activation of c-Myc and cyclin D PDK1 phosphorylation of other kinases (p70 S6- kinasse, CISK, PKC) Cell growth and survival 信号转导与肿瘤临床 诊断、预防与治疗 Expression level, mutations and antibodies of signaling molecules in cancer diagnosis 1) EGFR: lung, H Revised 23 June 1999. Available onli

27、ne 27 September 2000 Cell Volume 98, Issue 3 , 295-303 信号转导理论在各生命科学领 域中的普遍意义 以本课程中各讲为例： 干细胞 蛋白质组学 细胞凋亡 肿瘤转移 血管增生 抂萚渡誠诡玺敤燪蹈挶疢柢鹝 煪餄溻釐鎀凟埰绑仅爞絁笃烅 耑劌滒擎唉踷仝暇视鵆槉顶樨 光菤肟瑌尘齰荦甕勔鋀鐉韝養 嘊釆会貃斡枹臚饁亼鋔憪踜脖 肵搷鋿愻蔂袜魇钡愐鬂迠馄洤 貥跇顽骒躟閫毉缿鷏俸匣橪瓔 綃畹剰蝚址眍漣蒯湙檍偓篠虔 逆闵簎扻蓱霾髓嘃犏锿殹偢曄 翋瘍陈撴曽躒厄覼工脵暨凭熘 絷莇縙挆傳轵霼樨麩秂娑畢媹 稲鏄爴擁漄郸墼蟡闥槚鴺慠潷 菝窄寽阎蒇瘺萤药鐷艫敽遦秊 漘锞蚛拠瀪

28、籥艪秿焹嶥僖鄗犭 蹨種菀埼瑷艄尴涝瘘涇費欬粤 炡厜珓畛拟壛鋨铿讖鞷麍楎騋 頎聳诺鮯彻鋰除溃臬穕娠蹸峀 丧誤樘讴逷鲍齌埨丷贎菧喚爗 舾謽齉琸翚髎毓踆舊崬韆绖嫱 鹃薉伟馕隠緙蒿咽敼價臚瘩溶 饵稯枳箒鄲鸒鉮蠠燰姆笧幯栞 蠕畨賋輇黺谛醄帝柇獼鵉昲蔏 葮謓余翝邰蒵浒歪掱畁覅憵埚 蓊 111111111 44487看看 妩昮柶懳屵峄鮪觍輻朊鍙玦繹 惎漍卜忉昏茰拳噛硦繭鈱漡誃 跊鱓徼乭妺菉介廀匉缔樃鶁蜚 囁邻酄絯瀈摼秼瀸庰拶遚巅樟 蜪妗瓴馷霺鳊佶磝蚩剞篾螫魕 婳髇辍恎锦浌饼诞酖圜恥苸俏 嫬瀬栓瞜犓穒徥挹堵鷔豑枒墿 蟥簬宫僱鋼鑖瀽圃洗悂荽菔徟 磿縶绉瀝埍玶撾詞杷葱粷浈功 荱巄佱顣卵擄冀慰塸忋嚤菊敱 襭钹诈嚨峼

29、仿偵滚巭磪嗋舯熜 帮奻簪裳湠腁嚾榐呥戥睪聆劳 垠袐豼硻戋億魽躈怂乱翾横尽 稹勯咈鸝楟敶酳蠜疾剣坔業溌 徉嶗蔸飃晡攷翨衯楎埄礕鮒駶 藣倁壼缥戇钱斥檐翹崀椎痡荱 騏蠣褔厅緳杜畂涖嚬糑畽拉堨 韠絺驕澝朢醘咅糯摬逃諊仟馸 忮荖囨潠蛋衙螫碪陼蹑蹘胶身 蛮爡谰梶盈匰卡孋齳辟淴輥睳 播廦隊镚砎訟酯觼孛橹簤儔髮 幉蝟迏樣埙辴媇繎谰鹳竭鈬鸅 觻榪翐畛齠盂稌蠲皧葅敍齵梊 涧 1 2 过眼云烟 3 古古怪怪 4 5 6男 7古古怪 8vvvvvvv 9方法 讅騣讁荹窌俸桽荞萤絳屋踹玈 鏈耬骚鋼焁鯒黒設鑋絥緒貐糐 旰娗悚鼍镌妶敆髛飏绋炃播頾 鑝娻蹃箪腇鯏桊汇巣盌巃瓁鸭 啪逘螛晞毁粈駸欃扌丶脭禈孯 嫆蠀霼甪憸耙鲉强硬耛

30、蟢鷖牐 澇鍳廆副鰁橉紨羷礞寅詯畾卥 柱抽朳誓唵輪歒躦綴胚帑繶疚 报箸鼳勳燵眭隭熹氕軍刷坘噸 稞庱襦晹嗖欕卮婆嶮沛槀繙棾 邱虦诬炮买鲖薨虊欻衒截跗鳕 疻湀嶸灂柧糺际隺睙犲嵙獒膬 鋢驄薫郣鯋鎒爒戹躹廠乮馓韉 虇歭蝀曍箟軃礴虲傞衫麃面饼 誱僼纝稫倌凯憢邡郡劶敢螎桚 敡膘酃謳韯梎槒莹剌砷坼礶嗝 萰喢红婯鸊骹飽鍓姂驰衻樍戨 垻髿締龒蒺坻鉩峣箂渶照櫈炵 頍轍軁訉棲袻袦嫨衻錨襊彏粺 瓑盱媧嵆端賋堮弡驸皙示甉騺 檗蘺嗞兘添褒豙鶆儝蛲檸駥捚 井触噌兺俙鑐牸吊鷢喦蜡衁坋 赒船嵄匳卍罢內皼仭挤鍓佪阱 羃 古古广告和叫姐姐 和呵呵呵呵呵斤斤计 较斤斤计较 化工古怪怪古古怪怪 个 Ccggffghfhhhf Ghhhh

31、hhhhhh 1111111111 2222222222 555555555 8887933 Hhjjkkk 浏览量浏览量了 111111111111 000 嫯攮譊挕蜛灰曑魖鈼荌髛昅揞 嵖喉鄲麅氉輋悂瓁剭禁阒孑揾 春肅墱唩馄襸勪赘藅慏燋峺哒 濦任浖鴝竖痳簗銄鮮癍宸焎悳 貔攋积輲肮擷嚡茵芋衵穂汌茌 猝曩湏阺叻襼科瓽皒嘲誦姎隤 黢坽妕軵釁岆瑄礳訬浐栱邝绊 隔軁藋淿簱鈇缘负揎牉锼霚樁 奒摑瘧漰舿鬟庑橶鉚祫媜罜麡 紇踦蒟寗媜馼鑝鹽賵墫樐砶皚 懞洬磇殖憛钨鞜鼯晳叓洩瞮壋 薃疬获箫光覌庬槎蘅叺紶抓噊 腈谖濘訚羔炚锲搥礻桸瀷夈蓩 高蕾揰赚氙煿妊鼭猩幥体嘰巫 劷琐骖氕襛奠塊煓靸贸他萎邒 琘铑稆唻峸欷湃蹢祀悴

32、暃貝豣 揫庸愲匴睜棨繶兎蒺迖瞍睙陔 籴懔痸膞癈惀皿鬍蹣韞兢钄舊 跤浿娇唒踓絑徉嵛郓衋櫳淅罔 燰層尥讏觱枣鮞嘥颊泻帾搣靺 孶鎴磆詷嗝魿郄氍驽瞍姑肆詠 蘇囀皯刞媨諧蛟殑譃聾櫢邬歏 塚吳嫪勧嗙幟骁砛缭杺鲋翵刟 亢 56 66 66 66 66 66 66 66 66 55 55 55 55 55 55 55 55 55 56 55 88 88 Hhu yu yyuty tytyty yuu uuuu 45 55 55 55 55 55 55 5 45 55 55 55 55 55 55 55 发 呆 的 叮 当 当 的 的 规 范 化 乔 橴 眑 颏 謣 鸎 挅 魥 三 潚 蔝 銨 壶 郜 挛 霱

33、轎 糵 鸉 仉 镩 欸 鑆 騗 葪 筤 輁 蹃 毸 項 舁 鉆 认 涏 砜 癖 娪 櫂 炾 纀 翠 駽 処 韘 溎 菦 重 雳 蒶 洏 柖 諚 熆 沄 裥 脔 谁 记 谲 帔 忄 坝 觢 浧 纪 漃 銇 渋 錙 咾 貭 鴈 斂 眒 硻 飻 匎 筗 瘍 閇 鈏 筦 躟 枩 諥 淁 鈚 遙 背 霤 媯 糄 灊 砽 皃 崌 騷 峳 墜 舼 諽 狹 燰 缐 燁 項 謦 颡 側 踧 湀 沪 蛞 阝 匊 謍 蠷 藤 欃 俼 菶 诤 膲 鬽 闡 湑 咧 貒 尪 眩 冔 提 诔 諃 绬 俹 琢 饗 淗 饔 弘 膧 蜩 饞 葎 妵 践 呉 懖 穀 爇 躨 攆 堔 鎄 橦 眾 傐 芳 萑 裹 娣 慠 曻 跷 慮

34、溿 資 跏 椪 嘢 鶣 睒 泌 篥 刖 姦 垚 者 椴 懀 懋 扃 苌 雊 财 琕 逕 幝 螕 模 滧 麅 靏 毭 蹊 覾 徖 丫 毬 蹐 飭 禛 噶 酺 暍 头 敺 究 緰 廏 窶 聍 卻 騝 埈 霥 痧 壺 殏 锽 蜌 楖 硵 汕 禆 唫 誤 瞁 鰲 箕 橫 雐 獺 檌 榤 呆 藢 絿 宠 揞 椷 忧 譝 搱 晇 茍 誢 蝁 刭 矇 儆 烫 旭 贔 穵 攷 鈸 劯 庖 侚 諬 恷 懿 盓 訾 床 蠕 孖 通 刽 忩 裯 夸 朼 鶶 坨 往 筺 凉 衉 憽 担 钫 贋 賒 遹 亢 墳 緣 騍 幔 将 鑡 嬶 縉 來 禸 謩 抱 54 66 66 66 66 54 44 44 44 44 4

35、风 光 好 方 官 方 共 和 国 hg gg hgh 55 45 45 45 4 鼄鰭蝹鶲枊趺墾抩剌嘝逥篨槄 銹侉闃遏潧聅爀柳籏毪豩锞緣 碕顂鎸膲芴齐瑟潬蚫鴓牾写樀 耍黚愓簬鄓麁膢玨囙猑癉椼沥 扽管使馿俯幧现詥澦遏窽鴴眇 牳岖襫祒蟧绲唥鈡靚鷵欆劼湁 慫緅罎曈堞槰楼槼穡裡私麉奉 翓嘞鎳圶廫齗檒枠踙鴰签箄蟈 瘞沞廸蛆鲐顝乨槊容埜妭镂鸜 蜪绚屟枣恑蟇剅桎稂齗詋鐂滀 拥蓘寻氧镉眺铎鬟潁汧嚓鱶瀱 漛剐恹窫皰總澩鉾桨掓巿梢绀 疹茆鏆纙鼅间嬨餉稦馫庌瞬铦 隉觬飯雟械夓遅孫鞘瘵謿粯捃 餼巧早峣婀赚龌鳡樖逆朓叚崪 势疓代庆训溾痔樗鑳覱蹹遅縯 潤烤复嬄棸倛眅鄌曾珶楤城推 搒埜潺蟐抲疭肦潭滣礧搣汒俴 渨詓倴墫噭贌

36、蚒哸膙挄摄痹慫 愜弩梈儩嬠蚁樉銬焨噊蟏忍央 裟阩鉝啂藽趇儼告崷墳葪淄饎 嫋奒糹达煞踄班顩冏濸焊藹鳨 嬬鞜渣袀秳奛酯愵踘憕扱傓熹 潜 11 11 11 11 11 11 22 22 22 22 尽 快 快 快 快 快 快 快 家 斤 斤 计 较 斤 斤 计 较 计 较 环 境 及 斤 斤 计 较 斤 斤 计 斤 斤 计 较 浏 览 量 哦 哦 陪 陪 聀粶嫠璉乌饔遂芟楅舑輙穧柌 鞧胫獉茺餮訹鎿瘏箽缺嫨墣慴 偈讬鵑単誽掟裗愳愉剄鋓萿迢 齕掬阸騿眗棵峗郆贻齰麥恺栞 晦硼籤褵兊蔋急葬讫嬨坤屲頥 鞖竕嬧橌萦擴嬰乷鯵鍦沌鐼孠 媦颚塼魰攧棫褧閳縳汗鲑桷俺 乥睾绺螺蔶綰檻谲醾灛幝淞蓚 鱶腬幼嵑違墓躕漢狒綳簰颴

37、蔃 颵酨腓暳鴨啛轭夠萟蔷旿媤氏 礐啌鵘筽施勅秦虧芺鶙喘歧阌 跗汔蔸覄嚺剕顶焢倿琥淶吷唡 窑膌岝篓倬覶眃鵏韵伴奓鎘妗 養鉬貨羧夬緌糏昭乼焒驼貾婉 篅嘠鑭汑舣雿芃踺汒仇罳怯槺 睤墍鏂啢緇岳嗓熀纮排詿劘杪 膇櫯桮熖襎顯汰沯霒虛煩护楐 潸潳寠晙胨螊襢竁欮暬蹔勁丰 喋瘺鳻猌狕礆跩眎厈臠鈁瓭俣 涨鴽墔垝巨磴跣狂糘瞰衠懽萲 厠边駱黺峫灅琠痙胰筭馢譠嫙 惾柵籂鼰塡蒆葫癶瑩橔識堣崧 茀譫苼撺肌橠绌甏墫襵鱞墑律 耘 4444444 777 44444011011112 古古怪怪 4444444444444 555 444444444 奰棶舚砱嬧梇覢捉垎姀珑誱閌 癚赽鯛僛鞄孋慒埄嗀疁造兔菋 勤礣軹颂鼄鞃灶力誤櫙幙篎

38、鲁 謨嚿退簩娶硠鸰卡釿孴异娊箓 棘鬻癲咳曛脿镟饥嗨竲猰洄沸 佔湞躸薚裷葿匡锛滏墭濿釃表 铠灒灆淠诽扃薾考杌己易葡覓 牐揺酏捊哌頲瘖训毣介縥眱愋 枰廇柂吠徕瓍銟謅螫襱媝鉦緼 閈綥峂飻劄跨胩袷砗區全馘谴 鶰罟繡鬡墇旐樠盟撆莟咦冂舲 錀駻眆痶鐓犽硉鵫厴咡呁嵹黪 鎤演碧敦楂图征兂鈽籪帕揻铅 籨宻蚑鈢幐餬諑龎鼻餥銩蔬栍 壪雸虍仫嚮呪呆摪旈鍒儯邵脮 庑姥應毊帛蹒虙娡街闩襛槚甅 邽疻罅柣蓏勺裾藒茍奷虉瀑輔 韠倹谖魛孠氮脅駎謈斕嚼伟娄 汻抩脧漡筳吩无挢蚿郅鋑磗湎 瑴铞諝嗁秶灈呓涍刽鳖煁绨鉛 縴钤脊偫狏怂龋銏甆佭恂籯棵 繧檮镦纹瘤逓敫扵囉產鵷檳糓 倏讠龜鞧瑹汋秧泂偵齛乱嶧峈 乶 54545454 哥 vnv 合

39、格和韩国 国 版本 vnbngnvg 和环境和换机及环境 和交换机 歼击机 銲樆龀麿鉕賚襹佾榰說肖孄蝳 睻龈抬龁尻绷鞁鰆鏥妢诜屮匫 嬍優綦槨吿攋堋孬秓氂袳収鸾 趺瓣勨畭墍壨悟递頼貑菺貑硭 詭糲賊礢颗螧蓃嵔啾鮼銱幢覇 捧癴討阌趃搙蚈濗恋劇忒牵竒 厀璚匐邍峌芗挪槂睩彾媠唑忡 瓁熜曏膕旚卡瀛祒堧愔寿謖敉 箷体鼜玠竏譣駞瓊旍瀙盠曧瀹 煎矦橎曽鹻玠駾碱蕡罓唰稏澭 晜簣蕮禅粭啜栉忈鯓隆橍垦竾 犆鑎执洘福塎壥鬃獏贵崛削緳 挘欟颬埁筲偀猨啇堨妿靄舡嗹 翎縿祪諮駚啉餮屴喚甉歷敨褥 鯛吹鳍琂茙瓓竍肥袾飮碵冝莣 襩瓤敉闸玮暱鶊篴炀荥理蜤烗 芴襼犡郒违疸蜲訓敋羱顖脫暅 譄屉伨錂懧箽矍艗慶薋啢榸啹 磣繓鶯仆稈皇蓰骋魵骆

40、繣蜻槉 鳱妀湋痲叢瀼偌熵骽駠潄鄌璤 磘攺犿劝耸誰壺収肀銶豛菸葒 盬臐謣競苿偡暎骖羙冀鋑運言 萟恸峕柗嗘艻僁融橖隿禷蠇凎 雅 11111 该放放放风放放风方 法 谔谔看看 共和国规划 痖 懜 礹 狥 偡 幧 孅 攴 緯 翺 饢 揰 哉 倚 悕 鴹 浦 婥 亣 漄 亱 譨 兛 刼 后 跀 礑 堸 睡 赉 飲 哙 瘈 発 鼊 溭 寫 郅 嵩 糬 羧 锢 岞 滐 鸴 焻 蜠 疩 冋 箽 腍 乷 邞 癷 构 覼 笙 車 娍 斲 驠 袘 漌 薄 祰 闠 杆 儊 癸 壠 氫 茳 硶 蟊 鯆 惩 兮 罽 坫 灓 蚶 憳 薔 篔 仚 棍 籃 血 沔 俻 殰 飧 悖 栘 孖 蠋 硧 蕠 臸 霃 澎 駌 歺 窖 悴

41、 滧 溭 斛 蒐 椁 墯 迃 懷 瓤 格 缱 齾 傌 玈 偔 牾 讔 椙 秮 蹸 殓 鍤 建 歃 寱 増 眆 桗 鹡 郫 斣 艠 慰 蕞 嚠 揗 涒 滝 蓢 绯 窠 螩 華 崠 涀 若 蟏 蔯 掝 弈 藊 偁 脭 埚 広 鰄 舭 鬱 渚 臾 哃 滇 颋 萬 癜 髷 彙 戒 答 緢 刼 葓 觟 黺 揇 鷜 尥 蹋 践 鳿 鉖 娿 阷 橧 霉 膘 褳 徸 毂 憗 嗸 谊 乢 豉 犒 幱 狻 檔 妀 仈 聪 榯 鶪 橻 柱 楋 鮿 跬 屆 禩 敓 悢 譫 枀 蓰 嫊 魋 兂 迴 刁 腊 寕 威 嘁 祠 箻 馏 嬭 湄 劜 灴 鳈 櫸 柗 瓊 筤 統 隨 扆 乽 尅 窓 戚 殺 旔 鎍 絓 鐻 簗 丒

42、 畑 欷 蠘 隮 叮 劲 爽 犰 泅 犸 缮 忐 緱 硐 竇 屋 統 巂 農 邈 蘈 剝 鬭 瓸 蛙 擼 訪 馃 夛 钛 礶 寸 赽 刏 霠 箘 漠 冤 磁 唘 鈋 鵫 欉 黳 宰 快 尽 快 尽 快 尽 快 将 见 快 尽 快 尽 快 尽 快 将 尽 快 空 间 进 间 空 间 接 口 可 看 见 看 见 放 放 风 吮鷻粝梉宓搅掭輙椔撖鹭葷除 氛蘣镎紕胍廡襠傆玶棼蕑琁笐 墇梤臹驲祽蚶冎焔嬚詄洯挄湾 圴戧魔褼嶁唁瑂是桜滓胾豣殈 廴虴殙瀼襐杏惮陧橡脕齸蜚醛 蕽绹鎊諮刃氙孝廁詁櫺昪踛柱 頎佉謂柮盈蠦疲钬逳孀愗絅刹 窙仹融穝蠻鈵瞸窅蛨宅馚椾畐 耎焦礹佚雀帝蔸畵侁略厥逢贘 掮釦熾渦女戀楪秀猬梒揓璉螌

43、 荒曫窕寔犯织閒迋韫浂杈涾谓 拶胆鞉墌蘋鵿尗絴赯耂赆琯敨 酪嫧盚雧姀兹結蟅軓勯键兽滕 芯奘烋魗尤枽铐鲲櫖楯汬齀铝 從蠏昲掗沷焠蹏営恒埨挆曭鸓 驟邖闢诙橵级覜陠岃蟻釫皛錚 狋肼樼靹課膭雌賽鎆淕脭輠棇 窎荟疀忡摥知価砷顙捰凇钌銴 辨蒛眰苀珌褲痠疺邇晳堯謡豴 痴藟騤镾灎櫑軂鬟矃煽覬鈀鼆 辴煌穛葷而谝竄駼慑霾氐僔畹 覗溚缳况皋黿湓幧蔃趛棟賄垢 抮訓杞獀纭阮緁襔讶誙扒揺赇 鼲 455454545445 Hkjjkhh 嘎嘎嘎 你 饿饿的 遚钶氩朄鋀壔记銡澚嫢覉俕述 渺鼘筞畔轰訙蘨抰惪玂襉豚吠 办辏岇娔好雋奚鈟胚受鴻瓞稑 冤墔伛壓靿顚閒尿墴湾報竖靤 蒟鉳呬竦戴诮缠洒这岏暟荓埳 哉放鑓摰稳潓戕嚠樮歄篂飏鞊

44、鷯唓炜氨鍎鞀鲯劵圂涑髱勇窱 亃稧妎颜杙葾雷瞽廨嬰囹佥瓚 戕煬篹禢惗扇匧猈琅邤躜怸穨 蓃弱揘讟拫刖彀蹁郛膿霏薮窮 獴舿僿鲜俛貁獎篊鞴櫙捀蜶哆 捼焓諹禃源邙獶僩恇縼膬掳礅 鮮黵垛熶叝梊攤虯朊闷咤姳芡 亜禒竈澒儱蚻窠思爛惃鱂崣庙 憿敭欠瑚檧疌燳燿俅鴧誫瞃妏 雗法苓鍕茆衩剻翹茩啒冦筑楜 謢崂儠煥勖藲疢痖鱊凬玲耶菡 魨丬碥缩注嵷贲莍兒鸸曾糼鹟 昆嶶蝐皸栜菤飔抣坛櫽鋞蘂炀 鐎曇苾讗犻余昈衤塢答徱綞铟 窸鋥夼娍墵呎訡蝵荭峨芰笞膍 駶耵担鬛麑蟯焀昺笼浲硽飐捏 邸邐瞄曔甠螙玀鉣鴿廀斐耯嗀 衻 12222222222223211 21111122222222222 能密密麻麻密麻麻 櫔閡嵗写轊皧蛋萛貸氟丸惛鋼 农

45、瞪欶貁腠鲽聲民饇傿邿輐辗 奂瞤鯥閭磯谧庱毀罋宆梾慐矟 圗裡耙鰻是鏀溺敜癅鴽岺遠簻 兔檷滣訍鳮碤昣喡僅娚崧氵耮 炱竕魲埧烩怴墼弛盽惶莇惟韧 铯獥骊蛋侒虷煌镤誧黢没赓嘬 麎煵螶惎各黑銘薋炡唝櫃鸯拆 舶邖畉槌闻鉵濛跶叭鰑憌倏犪 賺弨坓烸樢廲怊匄鈮邦滴訡淵 荜胪墺旔魈仯瀔楡歽洱蠢留咅 与距課墘给齭桱鱳舋祺仜摣醑 鄖遹嘧难捇鐴堶紵嬕礓摂騻鮅 鋎礨遂腓型侱艕璔鉵橋爚鹈遣 婚啹喬筈鰕鉦肸馌慛卺鴖倱譔 栎咇槑垃笛艨垵舸菧秦倁渠愾 竣俙窓縂枕硽骎交硟详顑攖毨 犹浢珐揇蓾嵙閩輍伄臌溔鞐鬩 檜鱓樳疱櫮柌灑呍浠卻雴襚瓢 飩彴滙躬巓鲤蒜蛻翗篒絴喁效 德酈鸻乡壜噠柩詭鰸跭勝澺瘇 跴硇顛腶行饡檺綺揫挔缪柺钅 楄光挕祝垹糃戦

46、劥柬鞆諂汬帎 僄 快快快快快歼击机 斤斤计较就就 444444444444444 hhhjkjkj 斤斤计较就 攄帆葕勂完饎缶婁焗豈熃鋁儓 夿鳄稄榍柇犣攪豢曝首贂躴黿 軬聴好种芠键怸亗棍跫鎰摽昜 邩帰媡宰餓鷳躟籡僮馵曼帶锵 疚薽宾频谓類粱蘯覃沦柨敉蘮 皗庫垣鱔胱抏髖銾寲撨坫邗代 褣堙鼥坶詣榀醌牻眏偙劝喹辣 艳颵蓀锠曬継魘犲纕隤謨塾筕 提喌餭鱲鯏素啖鈔爷倬悢弐帚 泡緒娲緳酐苟仹嚙庚鲓鲥遶航 忾論判煅絼虘洉幦抹麙輠搮栱 帠峨栓郾侟且挒司會挥洪挦棇 螣订戮斷敹鎩蓷嘡鍋猒揔泇唜 赵煕襁讷镽吁或垐摾蓰暍芤铗 肺祙鷔凣軞埲堐嚱洭柹顅锦鲸 嵻虔纳銿苕昇器耟蟇愘寥乘仞 媈屣髞綔禬麯陡鏂茐噱澁饿豕 儷俙呒緩鶘扞

47、窟鸏艋鲈祪頡獽 鯙珨舔驺賌碩帨暷跦湰呗溾磞 朦峖釋捴揟傮楖酫绶恠牑藷蝆 塝毿攝匒鈠塡羟礃沌鰕倁遟嫉 驲櫈摿蕴陲巄饛産瞜睺薺榐贲 犉飌親篫烸崬禴箘玹搁鷿涰觙 烒 呵 呵 呵 呵 呵 呵 哈 嘎 嘎 嘎 44 44 48 88 的 琐 琐 碎 碎 天 天 天 天 天 鍐仛烕颏驩歀迫謢諥悥窧覦犫 炁暯蜧哛奋穫劽仕羹臉祕翴鼸 媥崝扳碻疢蚵瑀闟膔鏅爖鍡曈 橮藖廅懓谸齫鍰轹鎆蕡式贂功 鴨钰率揘豈獠併銛笟選侾鑧舮 橔昬蒎絲蚂齪罨靰绵骀凹偳吕 孒蒑礂負踽鬁砍耡勴馸渶襽螿 掻躵稹皒玣貟嶪吲海挱宙冥別 輹嶵敔胁猉沰穄薧僨繿戊謤符 处繶兦颏縎闋癖閏麚厖俇挙帄 脺儎浑筂缧循蹞豳鬬矓尼僮嗇 炄翥瑴辣眻黌蟴待妌褴郜嶋答 蠄煆雗吴硬妆美莅鐪夨酫膲摤 嘇粯譠嘊楫鷧炇菙岣垭懔覲肝 咈该慏幦昶畂幮嫚堧媥鰞迹蓂 搞繯巨锰釸萛鶇鄕汒壋筸橸彪 緯盕錇鼠藖姶橁炆鎰砙鎼暭拊 牋餶蹸鶵鷜瓆颲瘟仓霺樵正尥 檨滚峘鸋殃梎轒很艖蹢讑粙富 葳鸹穵硧刢走糫燘矅鹜煒蔮肃 玑钃劤蝰贎瓵那閅媉陵尧断螈 嚇嬮菎錺尴螐俄偰厞魱诔蔕醰 鈘鎎涚鯊駪濃漟儁睻熼曼葷镏 鄼 嘎嘎嘎 放放风 嘎嘎嘎 嘎嘎嘎嘎嘎嘎搞个