饲料色氨酸含量测定
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1、饲料中色氨酸测定方法分光光度法制作人:色氨酸(Try)色氨酸-吲哚基丙氨酸,为白色或微黄色结晶或结晶性粉末;无臭,味微苦。水中微溶,在乙醇中极微溶解,在氯仿中不溶,在甲酸中易溶,在氢氧化钠试液或稀盐酸中溶解。鱼类的必需氨基酸。色氨酸是植物体内生长素生物合成重要的前体物质。测定方法:分光光度法GB/T 15400-94原理饲料中蛋白质经碱水解后,降解成多肽和游离的氨基酸,在酸性介质中,氧化剂存在下,色氨酸吲哚环与对二甲氨基苯甲醛反应生成蓝色化合物,在一定范围内颜色深浅与色氨酸含量成正比。测定方法:分光光度法GB/T 15400-94试剂 除注明者外均为分析纯。水为蒸馏水。硫酸溶液:量取 589m
2、L硫酸徐徐加入约350mL水中,冷却后用水稀释至1L。21.2mol/L硫酸中并定容100mL。0.2亚硝酸钠溶液(m/V)。10氢氧化钾溶液(m/V)。L-色氨酸,色谱纯。L-色氨酸标准溶液:准确称取 25.0mg L-色氨酸于小烧杯中,加少量0.1mol/L氢氧化钾溶液使之溶解,定量地转移到250mL棕色容量瓶中,用水定容,浓度为100 g/mL。注:本标准溶液 4冰箱中保存,一个月内使用,浓度不变。测定方法:分光光度法GB/T 15400-94仪器、设备 分析天平:感量0.1mg。分光光度计。离心机:转速4000r/min。实验室用粉碎机。培养箱。容量瓶:25mL、50mL、250mL。
3、10mL具塞试管。刻度吸管:0.5mL、2mL、5mL、25mL。测定方法:分光光度法GB/T 15400-94试样的制备 1.选取有代表性的试样,按四分法缩分至200g,粉碎,全部通过0.25mm孔径筛(60目)。2.按GB 6433 脱脂并测定脂肪含量。脱脂样品风干后,混匀,装入密封容器内备用。测定方法:分光光度法GB/T 15400-94分析步骤1.工作曲线的绘制 (1)吸取色氨酸浓度为100 g/mL的标准溶液5.00、7.50、用水定容,摇匀。溶液浓度分别为20、30、40、50、60、70 g/mL。(2)吸取各浓度溶液1mL,分置具塞试管中,空白管加1mL水向每支试管内加入氢氧化
4、钾溶液1mL,混匀,将试管放入冷水盆中,加5mL对二甲氨基苯甲醛溶液,从冷水盆中取出试管,摇匀,在室温(2030,下同)放置30min。(3)向上述每支试管内加0.2mL亚硝酸钠溶液,摇匀,室温放置25min。(4)以空白管调零,在590nm波长下,以1cm光径测定各溶液吸光度值。(5)以色氨酸浓度为横坐标,吸光度值为纵坐标,绘制工作曲线,或列出回归方程式。测定方法:分光光度法GB/T 15400-942.样品测定 (1)称样:按附表A建议的称样量称取脱脂试样两份,精确至0.1mg。(2)水解:将试样置于50mL容量瓶中,在轻轻振摇中缓慢加入25mL氢氧化钾溶液,使试样湿润且不粘壁,置401培
5、养箱中水解1618h。(3)离心:取出水解液冷却至室温后,用水定容,摇匀,取部分水解液以4000r/min转速离心15min。(4)显色:取2mL上清液置具塞试管中,并将试管放入冷水盆中,加入5mL对二甲氨基苯甲醛溶液,摇匀。每个试样另取2mL上清液于具塞试管中,加5mL硫酸溶液作为样品空白,溶液,摇匀,室温放置25min。(5)比色:以样品空白调零,在590nm波长处1cm光径测定样品溶液的吸光度值。测定方法:分光光度法GB/T 15400-94计算公式测定方法:分光光度法GB/T 15400-94结果的表示 两个平行样品的测定结果用算术平均值表示,保留二位小数。试样脂肪含量小于4%时,式(1)和(2)所得结果在允许偏差之内。重复性 两个平行样品测定值的相对偏差,当色氨酸含量小于0.1%时,不大于4%;0.10%0.50%时,不大于3%;大于0.50%时,不大于2%。
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