脲酶活性的测定

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1、大豆制品中脲酶活性的测定定性法：酚红法一、原理：酚红批示剂在pH .4-.2时由黄变红，大豆制品中所含的尿素酶在pH=7.,=0时可将尿素水解产生氨,释放的氨可使酚红批示剂变红，根据变红的时间长短来判断脲酶活性的大小。二、仪器和试剂：粉碎机:粉碎时不产生强烈发热；分析天平；25ml纳式比色管;恒温水浴锅；1%酚红批示剂：0.苯酚红溶于10l 5%乙醇溶液；结晶尿素;三、措施:将试样粉碎，精确称取0050.1g试样于5ml纳式比色管,加入0.2g结晶尿素及5滴酚红批示剂，加入25l蒸馏水,摇动1，立即置于30.5水浴锅中，开始计时,观测溶液颜色变化， 5mn后,取出比色管,摇匀,观测溶液颜色。空

2、白实验：不加尿素,其她同上。品质鉴定：如果溶液为明显的粉红色,则觉得该大豆制品脲酶活性超标，为不合格产品。 01min变红，活性非常强(1.); 1-2in变红,活性大概0.1.0; 2-5i变红,活性大概.3-05。四、注意事项：1粉碎样品时，不应产生大量热，否则会影响成果鉴定;.称量样品时，一定要将样品混合均匀，否则会导致实验误差;3.试样和空白实验同步操作,过程要迅速,避免时间影响。尿素-酚红法一、原理:酚红批示剂在H 6.4-.2时由黄变红,大豆制品中所含的尿素酶可将尿素水解产生氨,释放的氨可使酚红批示剂变红,根据变红样品占所有样品的比例来判断脲酶活性的大小。二、仪器和试剂:表面皿；.

3、2N氢氧化钠溶液:称取0.8氢氧化钠溶于100m蒸馏水；1N硫酸溶液：移取7.0ml浓硫酸溶于500ml蒸馏水；尿素-酚红试剂：用500ml烧杯将0.8g酚红溶于20m0.2氢氧化钠溶液，用蒸馏水稀释至约30ml，加入6g尿素，并溶解之,转移至2L容量瓶,冲洗烧杯多次,加蒸馏水至约1.5,加入.4m .0N硫酸溶液,用蒸馏水定容至2L;此时溶液应具有明亮的琥珀色;（过段时间溶液会变为深橘红色,可滴入稀硫酸溶液搅拌之，直至溶液再次变为琥珀色)三、措施：将一满匙样品放入表面皿中,摊平，将以调好的尿素酚红试剂滴入表面皿中的样品上,直至完全浸湿,停留5min,观测样品的颜色反映。如果红斑面积多于%,则

4、觉得该样品脲酶活性超标,为不合格产品。四、注意事项:.对于样品较粗、具有大块状的样品,最佳将其稍微粉碎，亦不可太细，否则不容易观测;2样品一定要铺平,容易观测；3.溶液保质期为3个月，最佳1个月内用完；4.此措施容易受颗粒度影响。定量法:滴定法一、原理：在30.下精保证温30min,尿素酶催化尿素水解产生氨的反映，用过量盐酸中和所产生的氨,再用KO原则溶液回滴，以每克大豆制品每分钟分解尿素所释放的氨态氮的含量来表达脲酶活性的大小。二、仪器和试剂：粉碎机:粉碎时不应产生大量热；分析天平；25m纳式比色管；恒温水浴锅;碱式滴定管;尿素-磷酸盐缓冲液：溶液3.403g磷酸二氢钾于约100l新蒸馏水，

5、溶解4335g磷酸氢二钾于约100l新蒸馏水,然后将;两种溶液合并配成L，其pH应为7.。再将0g尿素溶解于此缓冲溶液中,有效期一种月（现配现用）;盐酸溶液：0.1mo/L;氢氧化钾溶液：0.mol/；混合批示剂;三、措施：样品粉碎,并且所有过200um样品筛。（粉碎时不可产热)称取0.g(精确至0.02)样品于纳式比色管中,加10ml尿素缓冲液，立即盖好剧烈振摇后，立即置于.5水浴锅内，精确计时0m0(规定每个试样加入尿素缓冲液的时间间隔保持一致)。停止反映时再以相似的时间间隔加入1ml盐酸（0.1mol/L），振摇后迅速冷却至20,将比色管内容物所有转入锥形瓶中,用2ml蒸馏水冲洗多次，加

6、-10滴混合批示剂,以KO原则溶液滴定至蓝绿色。另取纳式比色管作空白，称.2g样品,加入0l盐酸，振摇后加0l尿素缓冲液,立即盖好剧烈振摇,立即置于300.5水浴锅,计时保持30in10s，停止反映时将其迅速冷却至将比色管内容物所有转入锥形瓶中,用20ml蒸馏水冲洗多次,加8-滴混合批示剂，以OH原则溶液滴定至蓝绿色。四、计算:X=CO*(V0-V)4/（m30);X：单位mg（gn）,以氨态氮计;KO:氢氧化钾浓度；V：空白消耗氢氧化钾溶液的体积，ml;V:样品消耗氢氧化钾的体积，m；14：氮的摩尔质量，g/mol;m:样品质量,g；30：反映时间,min；五、注意事项：粉碎样品时,不应产生大量热，否则会使成果偏低；2.称量样品时,一定要将样品混合均匀，否则会导致实验误差;3.各样品加缓冲液和盐酸的时间间隔要一致；4.精确计时mi0,否则实验作废;.尿素-磷酸盐缓冲液现配现用;6平行样或者反复样在X2时,不不小于平均值的10%。成果以算术平均值表达。