凝结芽孢杆菌企业标准

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1、本标准参照QBZT4575食品加工用乳酸菌制定。本标准的制定遵循GB/T1.1标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则进行编本标准自实施之日起代替QQBAD0006S-2019o本标准与Q/QBAD0006S-2019相比，主要变化如下：一一增加了附录A；一一修改了要求、试验方法。本标准的附录A是规范性附录。本标准由润盈生物工程（上海）有限公司提出。本标准由润盈生物工程（上海）有限公司起草。本标准主要起草人：韦祥银、韩迪、滕齐辉、郑建丰、董锦燕、宋锦安。本标准历次版本的发布情况：QQBAD0006S-2019o凝结芽泡杆菌菌粉1 范围本标准规定了凝结芽泡杆菌菌粉的技术要求、试验方法、

2、检验规则、标识、包装、运输及贮存。本标准适用于以可用于食品的菌种活菌体的菌粉一种或多种为主要原料,辅以葡萄糖、酵母抽提物、海藻糖、麦芽糊精、乳粉、白砂糖等一种或多种为主要辅料，经配料、混合而成的凝结芽泡杆菌菌粉。2 规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版木（包括所有的修改单）适用于本文件。3 技术要求3.1 原辅料要求3.1.1 使用的凝结芽预杆菌菌种包含在卫生部办公厅关于印发可用于食品的菌种名单其增补中。3.1.2 产品中所使用的原料、辅料应符合相应的食品标准或相关规定。如食品原辅料中涉及生产许

3、可证管理的产品，必须采购获证企业生产的获证产品。3.2 感官要求感官要求应符合表1的要求。表1感官要求项目要求检验方法色泽色泽均一，呈灰色或灰白色取5g的被测样品置于一洁净的白色搪瓷皿中，在自然的光线下用肉眼观察其色泽和外观形态，按标签上所述食用方法于透明的玻璃烧杯内用80C左右蒸馀水冲溶稀释后，立即嗅其香气，辨其滋味，静置2分钟后，看烧杯底部有无异物。滋味、气味菌粉特有的滋味和气味，或具有与添加成分相符的滋味和气味组织形态蓬松粉末状、无正常视力可见杂质3.3 理化指标理化指标应符合表2的规定。表2理化指标项目指标检验方法水分，8.0GB5009.3铅（以Pb计），mg/kg1.0GB5009

4、.12碑（以AS计），mg/kg0.5GB5009.113.4 微生物指标微生物指标应符合表3的规定。表3微生物指标项目指标检验方法大肠菌群，CFU/g1()GB47893霉菌和酵母菌,CFU/g1()GB4789.15致病菌（志贺氏菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌）不得检出GB4789.5、GB4789.4、GB4789.103.5 特性指标特性指标应符合表4的规定。表4特性指标项目指标检验方法活菌总数，CFU/gIXlO8附录A3 .6食品添加剂食品添加剂的使用应符合GB2760的规定。3.7净含量按国家质量监督检验检疫总局令2005年第75号定量包装商品计量监督管理办法执行。按JJF1070

5、中规定的方法检验。4 生产过程的卫生要求应符合GB14881的规定。5检验规则5.1组批一次交付的同条件生产的同一类型、规格、批号的产品组成一交付批。5. 2抽样按批抽样，不少于每批3次全项检测所用的样品重量。将取好的样品混合后分两份装于塑料袋内低温密封保存，并注明厂名、样品名称、批次、生产日期、取样日期，一份送检验，一份留样备查，以供复查、仲裁用。5.3出厂检验5. 3.1产品出厂前，由公司质量部按本标准逐批进行检验。符合标准要求，并签署质量合格证的产品方可出厂。6. 3.2出厂检验的项目感官检验、水分、活菌总数、大肠菌群、霉菌和酵母菌、净含量。7. 4型式检验8. 4.1在有下列情况之一时

6、，应进行型式检验：a）产品投产前；b）正常生产时，每一年应进行一次周期性检验；c）当原料、工艺有较大改变，或配方调整有可能影响产品质量时；d）停产半年以上恢复生产时；e）国家质量监督机构提出型式检验要求时。9. 4.2型式检验项目包括技术要求中全部指标。10. 5判定规则检验结果按修约值比较法判定合格与否。检验结果中微生物指标有一项不符合本标准，即判定该批产品为不合格，且不应复验。其它项目有一项不合格，允许加倍抽样进行复验，复验结果仍不合格，则判定该批产品为不合格。6标识、包装、运输和贮存6.1 标识预包装产品标签应符合GB7718的要求和国家质量监督检验检疫总局令第123号食品标识管理规定的

7、规定执行。包装上应标有公司名称、地址、联系方式、产品名称、生产日期、净含量、保质期等标识，以及包装储运标识。外包装储运图示标识按照GB/T191执行。6.2 包装产品内包装用复合铝箔包装袋，外包装用瓦楞纸箱。包装要牢固不漏，商品标志印刷清楚，粘贴端正。产品的内外包装应干燥、完整、清洁，并能防止污染、防潮、防尘。6.3 运输运输车辆应采用常温运输且保持清洁。不得与有毒、有污染的物品混装、混运。运输时防止挤压、暴晒、雨淋。装卸时轻搬、轻放。6.4 贮存未特殊标示的产品可以常温储藏；有特殊储藏要求的产品，应按产品标称的条件贮存。6.5 保质期根据每款产品相应的贮存条件，包装应标明相应的保质期。附录A

8、（规范性附录）凝结芽胞杆菌BC-G44标准计数方法A.1适用范围适用于含凝结芽泡杆菌BC-G44的样品。包括凝结芽抱杆菌BC-G44原菌粉、稀释后菌粉、制成的相关成品（如软糖、香肠、果冻、坚果、饮料、冰激凌、馒头、饼干、面包、吸吸冰和固体饮料等A.2设备和材料除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下：A.2.1恒温培养箱：42*C1aC0A.2.2水浴锅：用于培养基保温或软糖等熔化，恒温控制范围为50oC+I0C0用于芽抱计数，恒温控制范围为80oC+loCoA.2.3可加水的破壁机/豆浆机/榨汁机：制备样品母液。A.2.4涡旋振荡器。.2.5均质器及无菌均质袋、均质杯或灭菌乳钵

9、或振荡摇床。A.2.6天平:感量0.01g0A.2.7无菌试管：18mm180mm、15mm100mm。A.2.8微量移液器：1mL和10mL微量移液器及枪头。A.2.9无菌平板：灭菌的玻璃平板或者一次性灭菌平板。A.2.10无菌锥形瓶：500mL、250mL。.2.11无菌玻璃珠。A.2.12微波炉：液化培养基。A.3培养基和试剂A.3.1生理盐水（加吐温80）8.5g氯化钠溶于IL去离子水中配成浓度为0.85%的生理盐水，并加Ig吐温80,利于泡子分散，下文生理盐水中均加1%。的吐温80。A.3.2培养基A.3.2.1MARS培养基：葡萄糖20.0g蛋白陈10.0g牛肉粉5.0g酵母粉4.

10、0g醋酸钠3H205.0gK2HP047H202.Og柠檬酸三铁2.0gMgSO47H200.2gMnS04-4H200.05g吐温80LOmL琼脂粉1012g加少量去离子水溶解后再定容至1L,用氢氧化钠溶液调PH至6.80.2,12IC灭菌20min。若配置其他体积容量的此培养基，按照上述比例进行添加。A.3.3.2YPD培养基：葡萄糖20.0g蛋白陈20.0g酵母粉10.0g琼脂粉10-12g加少量去离子水溶解后再定容至1L,用氢氧化钠溶液调pH至6.80.2,1211C灭菌20min。若配置其他体积容量的此培养基，按照上述比例进行添加。A.4操作步骤A.4.1样品处理（母液制备）A.4.

11、1.1样品的全部制备过程均应遵循无菌操作程序。A.4.1.2冷冻样品：可先使其在2C5*C条件下解冻或于温度不超过50C的条件解冻。A.4.1.3原菌粉/稀释菌粉/可溶固体饮料/可溶固体成品/可溶半固体成品/液体成品/化冻样品：称取样品10gIOmL加入带玻璃珠的90mL的无菌生理盐水锥形瓶中稀释10倍：或称取样品IgZlmL加入带玻璃珠的99mL的无菌生理盐水的锥形瓶中稀释100倍；或根据具体小包或者样品质量按比例加入灭菌生理盐水中稀释10倍或者IOo倍;在旋转式摇床上200rmin充分振荡30min,即成母液菌悬液或于8000rmin10000rmin均质Imin2min;或置于99mL或

12、90mL生理盐水的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打IInin2min制成母液匀液。其中液体成品和化冻样品需充分摇匀后再吸取。A.4.1.4常温水无法溶解的固体成品（如香肠、软糖、果冻、肉肠、咖啡、坚果、饼干、面包、馒头、巧克力、宠物粮等）：可称取一份或多份样品于消毒处理的破壁机/豆浆机/榨汁机中，称取样品质量，加入至10倍总质量比例的灭菌生理盐水，稀释10倍（如，加入2颗软糖8.60g,加灭菌的生理盐水稀释至86.00g：如一根香肠20.16g,可加灭菌的生理盐水稀释至201.6g；如4颗巴旦木20.1g,可加灭菌的生理盐水至201.0g）,用破壁机/豆浆机/榨汁机完全打成匀浆后制成样品母液。

13、破壁机/豆浆机/榨汁机消毒：加入适量洗涤剂，用自来水洗净后，晾干或烘干后，用75%酒精擦拭内壁和内盖，大概5min左右，晾干或烘干后，用灭菌的生理盐水冲洗3次，大概3min左右。A.4.1.550。C可熔化的样品（如软糖果冻,部分固体饮料等）：可称取一份或多份样品于灭菌的锥形瓶中，称取样品质量，加入至10倍总质量比例的灭菌生理盐水，稀释10倍（例如，2颗软糖8.60g,可加灭菌的生理盐水稀释至86.00g；一颗果冻20.5g,加灭菌的生理盐水稀释至205.0g：2包固体饮料10g,加灭菌的生理盐水稀释至100.0g）,于50ClC的水浴锅中水浴1560min直至样品完全熔解，水质透明，制成样品

14、母液。A.4.2连续梯度稀释A.4.2.1用ImL微量移液吸取3.1样品匀液IlnL,沿管壁缓慢注于装有9mL生理盐水的无菌试管中，于涡旋振荡器上振摇试管使其混合均匀（假如糖果样品过黏，可放置在50度水浴中助溶），制成1:100或1:1000的样品匀液。A.4.2.2另取ImL微量移液器吸头，按上述操作顺序，做10倍递增样品匀液,每递增稀释一次,即换用1次ImL枪头。A.4.3加样及培养A.4.3.1预先将MARS/YPD培养基于微波炉中液化，于50C土IC的水浴锅中保温。A.4.3.2计菌体+芽胞总活菌数每个样品取3个连续适宜的稀释度，用无菌移液管分别吸取不同稀释度菌悬液InIL,加至无菌平

15、板上，将保温的培养基浇注至平板，将培养基与菌悬液混合均匀（也可采用平板涂布方法。每一稀释度重复3次，同时以无菌水作空白对照。A.4.3,3芽抱总数每个样品取3个连续适宜的稀释度，于80ClC的水浴锅中保温IOmin,取出用自来水中冷却IInin（I用无菌移液管分别吸取不同稀释度菌悬液ImL,加至无菌平板上，将保温的MARS/YPD培养基浇注至平板，将培养基与菌悬液混合均匀。每稀释度重复3次，同时以无菌水作空白对照。A.4.3.4培养将培养基凝固好的平板倒放于42匕恒温培养箱中培养48kA.5平板计数A.5.1平板计数只记录满足以下条件的菌落琼脂表面的菌落需要直径为Irnm到5mm；白色到乳H色

16、，凸面，具有完整的边缘和光滑的表面。嵌在琼脂培养基中的菌落需要直径为05mm-Imm在琼脂中具有乳白色的点状体。可用肉眼观察，必要时用放大镜或菌落计数器，记录稀释倍数和相应的菌落数量。菌落计数以菌落形成单位（COlony-formingunits,CFU）表示。A.5.2选取菌落选取菌落数在30CFlr300CFU之间、无菱延菌落生长的平板计数菌落总数。低于30CFU的平板记录具体菌落数，大于300CFU的可记录为多不可计。每个稀释度的菌落数应采用三个平板的平均数。A.5.3若一个平板有较大片状菌落生长时,则不宜采用,而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数;若片状菌落不到平板的一半,而

17、其余一半中菌落分布又很均匀，即可计算半个平板后乘以2,代表一个平板菌落数。A.6结果的表述A.6.1若只有一个稀释度平板上的菌落数在适宜计数范围内，计算三个平板菌落数的平均值，再将平均值乘以相应稀释倍数，作为每克或每亳升中菌落总数结果。A.6.2若有两个连续稀释度的平板菌落数在适宜计数范围内时，按式（1）计算：N二ZC（n+0.12）J式中：N样品中菌落数；C平板（含适宜范围菌落数的平板）菌落数之和；m第一稀释度（低稀释倍数）平板个数；n2第二稀释度（高稀释倍数）平板个数；d稀释因子（第一稀释度）。A.6.3若所有稀释度的平板上菌落数均大于300CFU,则对稀释度最高的平板进行计数,其他平板可

18、记录为多不可计,结果按平均菌落数乘以最高稀释倍数计算。A.6.4若所有稀释度的平板菌落数均小于30CFU,则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数计算。A.6.5若所有稀释度（包括液体样品原液）平板均无菌落生长，则以小于1乘以最低稀释倍数计算。A.6.6若所有稀释度的平板菌落数均不在30CFIr300CFU之间，其中一部分小于30CFU或大于300CFU时,则以最接近30CFU或300CFU的平均菌落数乘以稀释倍数计算。A.7菌落数的报告A.7.1菌落数小于IOOeFU时,按“四舍五入”原则修约，以整数报告。A.7.2菌落数大于或等于IOOCFU时，第3位数字采用“四舍五入”原则修约后,取前2位数字,后面用0代替位;也可用10的指数形式来表示,按“四舍五入”原则修约后,采用两位有效数字。A.7.3称重取样以CFU/g为单位报告,体枳取样以CFU/mL为单位报告。A.8结果与报告根据菌落计数结果出具报告,报告单位以CFU/g或CFlVmL表示。