装柱与上样的方法

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1、湿法装柱是先把硅胶用适当的溶剂拌匀后，再填入柱子中，然后再加压用淋 洗剂走柱子，本法最大的优点是一般柱子装的比较结实，没有气泡。干法装柱则是直接往柱子里填入硅胶，然后再轻轻敲打柱子两侧，全硅胶界 面不再下降为止，然后再填入硅胶至合适高度，最后再用油泵直接抽，这样就会 使得柱子装的很结实。接着是用淋洗剂走柱子，一般淋洗剂是采用TLC分析得 到的展开剂的比例再稀释一倍后的溶剂。通常上面加压，下面再用油泵抽，这样 可以加快速度。十法装柱较方便，但最大的缺陷在于走柱子时，由于溶剂和硅 胶之间的吸附放热（可以用于摸柱子明显感觉到），容易产生气泡，这一点在使 用低沸点的淋洗剂时如乙醚，二氯甲烷更为明显。虽

2、然产生的气泡在加压的情况 下不易察觉，但是，一旦撤去压力，如在上样、加溶剂等操作的时候，气泡就会 释放出来，严重时，整个柱子变花，样品不可能平整地通过，当然也就谈不上分 离了。解决的办法是：第一、硅胶一定要天结实；第二、一定要用较多的溶剂 走柱子，一定要到柱子的下端不再发烫，恢复到室温后再撤去压力。也有介绍在硅胶的最上层填上一小层石英砂，防止添加溶剂的时候，使得样 品层不再整齐。但我的感觉是如果小心上样，添加溶剂，则没有这个必要。上样也有干法和湿法之分：干法就是把待分离的样品用少量溶剂溶解后，在 加入少量硅胶，拌匀后再旋去溶剂。如此得到的粉末再小心加到柱子的顶层。干 法上样较麻烦，但可以保证样

3、品层很平整。湿法上样就是用少量溶剂（最好就是 展开剂，如果展开剂的溶解度不好，则可以用一极性较大的溶剂，但必须少量） 将样品溶解后，再用胶头滴管转移得到的溶液，沿着层析柱内壁均匀加入。然后 用少量 芗 洗涤后，再加入。湿法较方便，熟手一般采用此法.关于TLC和柱层析之我的体会（转）柱层析和TLC是有机化学工作者必须下苦功夫的两项实验技术。这两项技术 掌握与否，对于提高实验的效率至关重要。常见的例子是：在柱层析时，由于层 析柱中的硅胶填料装得不均匀（没有填严实），使得柱子在淋洗过程中就因为出 现太多气泡变花，导致分离效果不好。更常见的例子是：层析柱虽然装得不错， 但是由于淋洗剂选择不恰当，结果导

4、致几十毫克产品，用了几百毫升淋洗剂都还 没有完全分离。分离同样的东西，熟手可能只需要半个小时，而一个层析技术不 过关的人可能半天都不能得到纯品。由此可见，这两项技术掌握与否，对于提高 工作效率，减轻工作量，减少有机溶剂的使用，从而对身心健康和环境保护都有 明显的作用。柱层析关键在于柱子是否装好和淋洗剂是否选择恰当。而淋洗剂的选择则是 通过TLC确定。这里要指出的一点是：TLC的作用除了跟踪反应进程，检测试剂 和原料纯度外，一个重要的用途就是为柱层析选择适当的淋洗剂。上样完毕后，接着即用淋洗剂淋洗。淋洗剂一般采用TLC分析得到的展开剂的比 例再稀释一倍后的溶剂。由于层析柱和薄板的不同，即使两者使

5、用的硅胶都相同， 但是在把TLC分析得到的展开剂用在柱层析时，也显得极性偏大，所以要稀释一 倍，但又不能稀释太多，否则成了靠扩散作用来分离，效果也不会好。接下来谈TLC，需要切记的是：第一、某种样品在这种展开剂中只显示一个点，并不等于在别的展开剂中也只显 示一个点。因此在寻找展开剂时，多尝试几种比例不同，成分不同的展开剂。展 开剂的极性太小，点分不开，极性太大，也分不开.一般以目标产物的Rf值在 0.3左右为最佳。第二、点不能点得太浓，否则容易重叠,不易判断，因为如果两个点相近的话，一浓 就变成一个点了。第三、板上点的展开的清晰程度和溶剂的极性和物质在该溶 剂中的溶解性有关，只有两者比较合适才

6、能有一个交好的分离效果。选择适当的展开剂是首要任务.一般常用溶剂按照极性从小到大的顺序排列大概 为：石油迷己烷苯乙醚 展开剂的比例要靠尝试.一般根据文献中报道的该类 化合物用什么样的展开剂，就首先尝试使用该类展开剂，然后不断尝试比例，直 到找到一个分离效果好的展开剂。很多时候，展开剂的选择要靠自己不断变换展 开剂的组成来达到最佳效果。我在实验中，为了实现一个配体与其他杂质有效分 离，曾经尝试了所有的溶剂用来两两组合后，最后才找到petroleum ether/THF 这类不常见的混合溶剂。一般把两种溶剂混合时，采用高极性/低极性的体积比为1/3的混合溶剂,如果有 分开的迹象，再调整比例，达到最

7、佳效果，如果没有分开的迹象，最好是换溶剂。 对于在硅胶中这种酸性物质上易分解的物质，在展开剂里在利用TLC跟踪反应 时，在点板的时候往往是反应体系的混和溶液点一个点A，每种难挥发的原料 各点一个点B,C, D等等，然后所有的原料和反应体系的混合溶剂再共同点一个 混合点X，这些点在板上的位置如图所示：A X B C D这样的好处是展开后可以清楚地看见每个点的位置，把A这个点展开后的各个层 份的点与B,C,等原料比较，从而判断原料消失没有，点混合点X的目的在于， 方便观察，因为有时候，板展开后，各点的位置有些变形，或者由于边缘效应 等等，使得判断不易。利用TLC判断物质的纯度时，往往要和NMR相结

8、合，因为某种样品在这种展开剂 中只显示一个点，并不等于在别的展开剂中也只显示一个点。但有趣的是，由 于H NMR可鉴别 的纯度也就在95%左右，有时候H NMR现示较纯的东西，一点 板就会发现有几个点。所以，两者要结合使用。但是自己以前的样品，则可以只 通过点板来判断纯度。作者：hoppy 发布日期：2006-04-15谢谢你了。但是我的具体问题你没有给与指导？难道你过柱子遇不到这样的问 题？作者：aska928发布日期：2006-04-16你试着选择一种溶剂将你的物质溶解后再拌入硅胶，然后旋转蒸发仪上蒸去溶 剂，应该是成沙状的，如果你的物质是油状物的话制备沙时需要量多一点的硅胶， 至于你说的

9、粘稠状物质中拌硅胶，我实在看不懂，能说的清楚点吗。我过柱子制沙通常用100 200目的，不过用200-300的也不会有多大的问题， 就是用粗一点的硅胶制沙样品比较容易冲下来。还有我教你一种方法过柱子，就是柱子中先装完硅胶，敲平，再加入制好的沙敲 平，表面上放上棉花（防洗脱剂冲散制好的沙），然后用油泵抽，实在没有就用 水泵也可以，最后用洗脱剂冲下来就可以了，记得一定要用加压球加压，不然你 的柱子可就花了。Goodluck!;）作者：hoppy 发布日期：2006-04-16首先谢谢你。我得到的产品是沥青状的混合物，其中有两种物质是我需要的，须 过柱子分离。沥青状的物质一般硅胶就很难称沙状物，所以

10、我每次花大量的时间 研磨。你的意思是下面用油泵抽，上面用加压球，可以防止花柱？作者：hjiang3 发布日期：2006-04-17不管你所到的产品的状态如何，都可以用干法和湿法加样.你所说的情况可能是 硅胶不够.还有几个问题应该注意:一分离的效果与淋洗剂有直接的关系，建议 用梯度淋洗;二硅胶的用量与产品的多少有关;三硅胶颗粒大小与过拄子的速度 有关，一般说来，在常压时,颗粒越小越慢，但可以通过加压或减压来提高速度.作者：yanyongping6发布日期：2006-04-17硅胶的目数是越大越细，这个不要搞错呀作者：hoppy 发布日期：2006-04-17我知道硅胶的目数指的是颗粒的大小。我们

11、这有人过柱子用GF254的硅胶十法 过柱子（铺薄层板所用硅胶，颗粒相当细了）。当我问到他们我的问题时他们告诉 我一是我用的硅胶太粗（200-300）；二是拌料所用硅胶太少；我想请问大家： 你们过减压柱用多少目的硅胶？过减压柱时经常出现花柱子?有人告诉过减压柱 出现花柱是正常作者：hoppy 发布日期：2006-04-17我知道硅胶的目数指的是颗粒的大小。我们这有人过柱子用GF254的硅胶十法 过柱子（铺薄层板所用硅胶，颗粒相当细了）。当我问到他们我的问题时他们告诉 我一是我用的硅胶太粗（200-300）；二是拌料所用硅胶太少；我想请问大家： 你们过减压柱用多少目的硅胶？过减压柱时经常出现花柱子

12、?有人告诉过减压柱 出现花柱是正常现象，是真的吗？作者：hoppy 发布日期：2006-04-18很感谢大家啊！我知道硅胶的目数指的是颗粒的大小。我们这有人过柱子用GF254的硅胶十法 过柱子（铺薄层板所用硅胶，颗粒相当细了）。当我问到他们我的问题时他们告诉 我一是我用的硅胶太粗（200-300）；二是拌料所用硅胶太少；我想请问大家： 你们过减压柱用多少目的硅胶？过减压柱时经常出现花柱子?有人告诉过减压柱 出现花柱是正常现象，是真的吗？作者：hrwen 发布日期：2006-04-19减压出现花柱是很正常的，这是因为减压的时候容易将空气带入。我个人比较喜 欢事发装柱，如果嫌过柱时间长的话，可以在

13、顶端适当加压，比较简单的做法是 用给鱼通氧的小泵，简单快捷，还可以控制过柱速度作者：hoppy发布日期：2006-04-19终于有人给我一个明确的回复，我想减压过柱不可能避免花柱，谢谢你了，我也 学着过加压柱。作者：abcdsmart 发布日期：2006-04-19其实，问题不是硅胶的原因，是你在上柱子的时候没有沉降好，就可能加压或者 减压，那肯定花掉了，这次你用同样的硅胶，多沉降一会，跑起来了在抽，应该 没有了！等你的回信作者：dayongpeng80 发布日期：2006-04-19减压柱出现花柱是正常现象，我以前经常遇到，柱子短一点可能要好一些的作者：hoppy 发布日期：2006-04-

14、20我过减压柱经常花柱，同学告诉我硅胶太粗了（200-300目），他们用GF254的 硅胶很少花柱，而且用紫外灯在柱子上一照就知道自己需要的物质下来没有，因 为他们是院士的学生不用担心经费。我呢不可能用GF254硅胶过柱，我湿法采用 （100-200目的；干法用（200-300目），我经常用水泵抽一下午再把拌的硅胶 装上。开始用石油醚流量遍，然后再加石油醚和乙酸乙酯的混合淋洗剂。虽然我 所需要的物质能分离开，但是每次都出现花柱现象，生怕老板看见，所以在这儿 跟大家讨论.作者：shelly_xiao 发布日期：2006-04-21最近也在为过柱子痛苦，因为之前做的少。“淋洗剂一般采用TLC分析得

15、到的展 开剂的比例再稀释一倍后的溶剂。”请问用什么将展开剂稀释一倍？作者：luoj87 发布日期：2006-04-21其实楼主过粘稠状物不必拌硅胶，我也曾分离过类似的糖浆状物,直接加料就可 以过.作者：dickmo 发布日期：2006-04-21一跟柱子过2天？ ？什么概念啊！一天至少能过上2跟柱子，见过的强人一天过8跟作者：hoppy 发布日期：2006-04-21我也将粘稠的样品直接上样过，有几次上了样，淋洗剂几乎就不流了，我想可能 给堵死了，后来我就稀释后再加样，这样每次过的太少了。作者：sured2006 发布日期：2006-06-28我过柱子也出现这样的情况，加淋洗剂就会花掉，我担心我要分的物质分不开。 我也是用的减压柱？作者：syw96 发布日期：2006-08-11还没有开始过柱，不过快要开始了，还要向各位前辈学习。