培养基制备实验报告

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1、文档来源为:从网络收集整理.word版本可编辑.欢迎下载支持.培育基制备试验报告篇一：培育基的制备与灭菌试验报告陕西师范高校远程教育学院生物学试验报告报告题目培育基的制备与灭菌姓名刘伟学号专业生物科学批次/层次指导老师学习中心培育基的制备与灭菌一、目的要求1. 把握微生物试验室常用玻璃器皿的清洗及包扎方法2. 把握培育基的配置原则和方法。3. 把握高压蒸汽灭菌的操作方法和留意事项。二、基本原理牛肉膏蛋白胨培育基：是一种应用最广泛和最一般的细菌基础培育基，有时又称为一般培育基。由于这种培育基中含有一般细胞生长繁殖所需要的最基本的养分物质，所以可供细菌生长繁殖之用。高压蒸汽灭菌：主要是通过升温使蛋

2、白质变性从而达到杀死微生物的效果。将灭菌的物品放在一个密闭和加压的灭菌锅内，通过加热，使灭菌锅内水沸腾而产生蒸汽。待蒸汽将锅内冷空气从排气阀中趋尽，关闭排气阀连续加热。此时蒸汽不溢出，压力增大，沸点提升，获得高于100C的温度导致菌体蛋白凝固变性，而达到灭菌的目的。三、试验材料1. 药品：牛肉膏、蛋白胨、NaCl、琼脂、lmol/L的NaOH和HCl溶液。2. 仪器及玻璃器皿：天平、高压蒸汽灭菌锅、移液管、试管、烧杯、量筒、三角瓶、培育皿、玻璃漏斗等。3. 其他物品：药匙、称量纸、pH试纸、记号笔、棉花等。四、操作步骤（一）玻璃器皿的洗涤和包装1玻璃器皿的洗涤玻璃器皿在使用前必需洗刷干净。将三

3、角瓶、试管、培养皿、量筒等浸入含有洗涤剂的水中用毛刷刷洗，然后用自来水及蒸馏水冲净。移液管先用含有洗涤剂的水浸泡，再用自来水及蒸馏水冲洗。洗刷干净的玻璃器皿置于烘箱中烘干后备用。2灭菌前玻璃器皿的包装（1）培育皿的包扎：培育皿由一盖一底组成一套，可用报纸将几套培育皿包成一包，或者将几套培育皿直接置于特制的铁皮圆筒内加盖灭菌。包装后的培育皿须经灭菌之后才能使用。（2）移液管的包扎：在移液管的上端塞入一小段棉花（勿用脱脂棉），它的作用是避开外界及口中杂菌进入管内，并防止菌液等吸入口中。塞入此小段棉花应距管口约0.5cm左右，棉花自身长度约115cm。塞棉花时可用一外围拉直的曲别针、将少许棉花塞入管

4、口内。棉花要塞得松紧适宜，吹时以能通气而又不使棉花滑下为准。先将报纸裁成宽约5cm左右的长纸条，然后将已塞好棉花的移液管尖端放在长条报纸的一端，约成45C角，折叠纸条包住尖端，用左手握住移液管身，有手将移液管压紧在桌面上向前搓转，以螺旋式包扎起来。上端剩余纸条，折叠打结，预备灭菌。二）液体及固体培育基的配制过程1液体培育基配制（1）称量（假定配制1000ml培育基）按培育基配方比例依次精确地称取3.0g牛肉膏、10.0g蛋白胨、5.0gNaCl放入烧杯（或1000ml刻度搪瓷杯）中.牛肉膏常用玻棒挑取，放在小烧杯或表面皿中称量，用热水溶化后倒入烧杯。（2）溶化在上述烧杯中先加入少于所需要的水量

5、（如约700ml），用玻棒搅匀，然后，在石棉网上加热使其溶解，将药品完全溶解后，补充水到所需的总体积（1000ml）；假如配制固体培育基时，将称好的琼脂放人已溶的药品中，再加热溶化，最终补足所损失的水分。（3）调pH调pH：一般用pH试纸测定培育基的pH。用剪刀剪出一小段pH试纸，然后用镊子夹取此段pH试纸，在培育基中蘸一下，观看其pH范围，如培育基偏酸或偏碱时，可用lmol/LNaoH或lmol/LHCl溶液进行调整。调整pH时，应逐滴加入NaOH或HCI溶液，防止局部过酸或过碱,破坏培育基中成分。边加边搅拌，并不时用pH试纸测试，直至pH达7.4-7.6。反之，用1molLHCl进行调整。

6、2固体培育基的配制配制固体培育基时，应将已配好的液体培育基加热煮沸，再将称好的琼脂（1.52）加入，并用玻棒不断搅拌，以免糊底烧焦。连续加热至琼脂全部溶化，最终补足因蒸发而失去水分。（三）培育基的分装依据不同需要，可将已配好培育基分装入试管或三角瓶内，分装时留意不要使培育基沾污管口或瓶口，造成污染。如操作不当心，培育基沾污管口或瓶口时，可用镊子夹一小块脱脂棉，擦去管口或瓶口的培育基，并将脱脂棉弃去。1试管的分装取一个玻璃漏斗，装在铁架上，漏斗下连一根橡皮管，橡皮管下端再与另一玻璃管相接，橡皮管的中部加一弹簧夹分装时，用左手拿住空试管中部，并将漏斗下的玻璃管嘴插入试管内，以右手拇指及食指开放弹簧

7、夹，中指及无名指夹佐玻璃管嘴，使培育基直接流入试管内。装入试管培育基的量视试管大小及需要而定，若所用试管大小为15X150mm时，液体培育基可分装至试管高度14左有为宜；如分装固体或半固体培育基时，在琼脂完全溶化后，应趁热分装于试管中。用于制作斜面的固体培育基的分装量为管高15（约34mI），半固体培育基分装量为管高的1/3为宜。2三角瓶的分装用于振荡培育微生物时，可在250m1用于制作平板培育基用时，可在250ml三角瓶中加入150ml粉（按2计算），灭菌时瓶中琼脂粉同时被溶化。（四）棉塞的制作及试管、三角瓶的包扎为了培育好气性微生物，需供应优良通气条件，同时为防止杂菌污染，则必需对通入试管

8、或三角瓶内空气预先进行过滤除菌。通常方法是在试管及三角瓶口加上棉花塞等。1试管棉塞的制作制棉塞时，应选用大小、厚薄适中的一般棉花一块，铺展于左手拇指和食指扣成的团孔上，用右手食指将棉花从中央压入团孔中制成棉塞然后直接压入试管或三角瓶口。也可借用玻璃棒塞入，也可用折叠卷塞法制作棉塞。制作的棉塞应紧贴管壁，不留缝隙，以防外界微生物沿缝隙侵入，棉塞不宜过紧或过松，塞好后以手提棉塞，试管不下落为准。棉塞的23在试管内，13在试管外。目前也有接受硅胶塞代替棉塞直接盖在试管口上。将装好培育基并塞好棉塞或硅胶塞的试管捆成一捆，外面包上一层牛皮纸。用记号笔注明培育基名称及配制日期，灭菌待用。2三角瓶棉塞制作通

9、常在棉塞外包上一层纱布，再塞在瓶口上。有时为了进行液体振荡培育加大通气量，则可用8层纱布代替棉塞包在瓶口上，目前也有接受硅胶塞直接盖在瓶口上。在装好培育基并塞好棉塞或包扎八层纱布或盖好硅胶塞的三角瓶口上，再包上一层牛皮纸并用线绳捆好，灭菌待用。（五）培育基的灭菌将上述培育基以0103MPa,121C,20min高压蒸气灭菌。灭菌过程：1加水：首先将内层锅取出，再向外层锅内加入适量的水，使水面没过加热蛇管，与三角搁架相平为宜。切勿遗忘检查水位，加水量过少，灭菌锅会发生烧干引起炸裂事故。2装料：放回内层锅，并装入待灭菌的物品。留意不要装得太挤，以免阻碍蒸汽流通而影响灭菌效果。装有培育基的容器放置时

10、要防止液体溢出，三角瓶与试管口端均不要与桶壁接触，以免冷凝水淋湿包扎的纸而透入棉塞。3加盖：将盖上与排气孔相连的排气软管插入内层锅的排气槽内，摆正锅盖，对齐螺口，然后以对称方式同时旋紧相对的两个螺栓，使螺栓松紧全都，勿使漏气，并打开排气阀。4. 排气：打开电源加热灭菌锅，将水煮沸，使锅内的冷空气和水蒸汽一起从排气孔中排出。一般认为当排出的气流很强并有嘘声时，表明锅内的空气已排尽，沸腾后约需5分钟。5. 升压：冷空气完全排尽后，关闭排气阀，连续加热，锅内压力开头提升。6. 保压：当压力表指针达到所需压力时，把握电源，开头计时并维持压力至所需的时间。如本试验中接受0lMpa,1215C,20分钟灭

11、菌。灭菌的主要因素是温度而不是压力,因此锅内的冷空气必需完全排尽后,才能关闭排气阀,维持所需压力。7. 降压：达到灭菌所需的时间后,切断电源,让灭菌锅温度自然下降,当压力表的压力降至“0”后,方可打开排气阀,排尽余下的蒸汽,旋松螺栓,打开锅盖,取出灭菌物品,倒掉锅内剩水。压力确定要降到“0”后,才能打开排气阀,开盖取物。否则就会因锅内压力突然下降,使容器内的培育基或试剂由于内外压力不平衡而冲出容器口,造成瓶口被污染，甚至灼伤操作者。（六）斜面和平板的制作1斜面的制作将已灭菌装有琼脂培育基的试管，趁热置于木棒或玻棒上，使成适当斜度，凝固后即成斜面。斜面长度不超过试管长度l2为宜。如制作半团体或固

12、体深层培育基时，灭菌后则应垂直放置至凝固。2平板的制作将装在三角瓶或试管中已灭菌的琼脂培育基溶化后，待冷至50C左右倾入无菌培育皿中。温度过高时，皿盖上的冷凝水太多；温度低于50C,培育基易于凝固而无法制作平板。平板的制作应在火旁进行，左手拿培育皿，右手拿三角瓶的底部或试管，左手同时用小指和手掌将棉塞打开，灼烧瓶口，用左手大拇指将培育皿盖打开一缝，至瓶口正好伸入，倾入1015mL培育基，快速盖好皿盖，置于桌上，轻轻旋转平皿，使培育基均匀分布于整个平皿中，冷凝后即成平板。（七）培育基的灭菌检查灭菌后的培育基，一般需进行无菌检查。最好取出12管（瓶）,置于37C温箱中培育12天，确定无菌后方可使用

13、。篇二：培育基的制备与消毒灭菌试验报告培育基的制备与消毒灭菌试验报告试验目的1. 学习和把握配制培育基（以牛肉膏蛋白胨培育基的配制为例）的一般方法和原理。2. 了解消毒和灭菌的原理，把握常用灭菌方法的操作步骤。试验原理培育基是人工配制的适合微生物生长繁殖或积累代谢产物的养分基质，用以培育、分别、鉴定、保存各种微生物或积累代谢产物。在自然界中微生物种类繁多，养分类型多样，加之试验和争论的目的不同，所以培育基的种类很多。但是，不同种类的培育基中，一般应含有水分、碳源、氮源、能源、无机盐、生长因素等。不同微生物对PH要求不一样雷菌和酵母的培育基的pH一般是偏酸性的，而细菌和放线菌的培育基的pH一般为

14、中性或微碱性的（嗜碱细菌和嗜酸细菌例外）。所以配制培育基时，都要依据不同微生物的要求将培育基的pH调到合适的范围。此外，由于配制培育的各类养分物质和容器等含有各种微生物，因此，已配制好的培育基必需立刻灭菌假如来不及灭菌，应暂存冰箱内，以防止其中的微生物生长繁殖而消耗养分和转变培育的酸碱度所带来不利的影响。高压蒸气灭菌是将持灭菌的物品放在一个密闭的加压灭菌锅内，通过加热，使灭菌锅套间的水沸腾而产生蒸气。待水蒸气急剧地将锅内的冷空气从排气阀中驱尽，然后关闭排气阀连续加热，此时由于蒸气不能道出，而增加了灭菌器内的压力，从而使沸点增高，得到高于100C的温度。导致菌体蛋白质凝固变性而达到灭菌的目的。牛

15、肉膏蛋白胨培育基是一种应用最广泛和最一般的细菌基础培育基，有时又称为一般培育基。由于这种培育基中含有一般细菌生长繁殖所需要的最基本的养分物质，所以可供作微生物生长繁殖之用。基础培育基含有牛肉膏、蛋白胨和NaCl。其中牛肉膏为微生物供应碳源、能源、磷酸盐和维生素，蛋白胨主要供应氮源和维生素，而NaCl供应无机盐。在配制固体培育基时还要加入确定量琼脂作凝固剂，琼脂在常用浓度下96C时溶化，实际应用时，一般在沸水浴中或下而垫以石棉网煮沸溶化，以免琼脂烧焦。琼脂在40C时凝固，通常不被微生物分解接受。固体培育基中琼脂的含量依据琼脂的质量和气温的不同而有所不同。由于这种培育基多用于培育细菌，因此要用稀酸

16、或稀碱将其PH调至中性或微碱性，以利于细菌的生长繁殖。牛肉膏蛋白胨培育基的配方如下：牛肉膏3.0g蛋白胨10.0gNaCl5.0g水1000mlpH7.47.6试验仪器与药品1溶液或试剂：牛肉膏、蛋白胨、NaCl、琼脂、lmol/LNaOH、1molLHCl。2仪器或其他用具：试管、三角瓶、1000ml烧杯（或1000ml刻度搪瓷杯）、量筒、玻棒、培育基分装器、天平、牛角匙、高压蒸汽灭菌锅、pH试纸（pH5.5-9.0）、一般棉花、牛皮纸、记号笔、麻绳、纱布等。试验步骤（一）牛肉膏蛋白胨培育基的制备称量（假定配制1000ml培育基）按培育基配方比例依次精确地称取牛肉膏、蛋白胨、NaCl放入烧杯

17、（或1000ml刻度搪瓷杯）中牛肉膏（本文来自：小草范文网:培育基制备试验报告）常用玻棒挑取，放在小烧杯或表面皿中称量，用热水溶化后倒入烧杯。也可放在称量纸上，称量后直接放人水中，这时如略微加热，牛肉膏便会与称量纸分别，然后立刻取出纸片。1. 溶化在上述烧杯中先加入少于所需要的水量（如约700ml），用玻棒搅匀，然后，在石棉网上加热使其溶解，将药品完全溶解后，补充水到所需的总体积（1000ml）；假如配制固体培育基时，将称好的琼脂放人已溶的药品中，再加热溶化，最终补足所损失的水分。2. 调pH在未调pH前，先用精密pH试纸测量培育基的原始pH，假如偏酸用滴管向培育基中逐滴加入Imol/LNaO

18、H,边加边搅拌，并随时用pH试纸测其PH,直至pH达7.4-7.6。反之，用1mol/LHCl进行调整。3. 过滤趁热用滤纸或多层纱布过滤，以利某些试验结果的观看可以省去（本试验勿需过滤）。4. 分装液体分装分装高度以试管高度的1/4左右为宜。分装三角瓶的虽则依据需要而定，一般以不超过三角瓶容积的一半为宜，假如是用于振荡培育用，则依据通气量的要求酌情削减；有的液体培育基在灭菌后，需要补加确定量的其他无菌成分，如抗生素等，则装量确定要精确。固体分装分装试管，其装量不超过管高的1/5，灭菌后制成斜面。分装三角烧瓶的量以不超过三角烧瓶容积的一半为宜。半固体分装一般以试管高度的13为宜，灭菌后垂直待凝

19、。5. 加塞培育基分装完毕后，在试管口或三角瓶口上塞上棉塞（或硅胶塞、金属或高温塑料试管帽等），以阻挡外界微生物进入培育基内面造成污染，并保证有良好的通气性能（棉塞制作方法附本试验后面）。6. 包扎加塞后，将全部试管放入铁丝筐或用麻绳捆好，再在棉塞外包一层牛皮纸，以防止灭菌时冷凝水润湿棉塞，其外再用一道麻绳扎好。用记号笔注明培育基名称、配制日期。三角烧瓶加塞后，外包牛皮纸，用麻绳以活结形式扎好，使用时简洁解开，同样用记号笔注明培育基名称、配制日期。7. 灭菌将上述培育基以0103MPa,121C,20min高压蒸气灭菌。9摆斜面将灭菌的试管培育基冷至50C左右（以防斜面上冷凝水太多），将试管口

20、端搁在玻棒或其他合适高度的器具上，搁置的斜面长度以不超过试管总长的一半为宜10.无菌检查将灭菌培育基放入37C的恒温箱中培育24-48h以捡查灭菌是否彻底。留意事项1. 蛋白胨很简洁吸湿，在称取时动作要快速，此外，称量时严防药品混杂一把牛角匙用于一种药品或称取一种药品后，洗净擦干再称职另一药品瓶盖也不要盖错。2. 在琼脂溶化过程中应把握火力，以免培育基因沸腾而溢出容器。同时，需不断搅拌，以防琼脂糊底烧焦，制培养基时，不行用铜或铁锅加热溶化，以免离子进入培育基中，影响细菌生长。3. 对于有些要求PH较精确的微生物，其PH的调整可用酸度计进行（使用方法、可参考有关说明书）。pH不要调过头,以避开回

21、调而影响培育基内各离子的浓度。配制pH低的琼脂培育基时若预先记好PH并在高压蒸汽下灭菌，则琼脂因水解不能凝固。因此，应将培育基的成分和琼脂分开灭菌后再混合，或在中性pH条件下灭菌，再调整pH。4. 分装过程中，留意不要使培育基沾在管（瓶）口上，以免沾污面塞而引起污染。二）高压蒸汽灭菌法步骤1. 加水使用前在锅内加入适量的水，加水不行过少，以防将灭菌锅烧干，引起炸裂事故。加水过多有可能引起灭菌物积水。水面与三角架相平为宜2. 装料将灭菌物品放在灭菌桶中，不要装得过满。3. 加盖盖好锅盖，按对称方法旋紧四周固定螺旋，打开排气阀。4. 加热排气加热后水蒸气与空气一起从排气孔排出，待锅内沸腾并有大量蒸

22、汽自排气阀冒出时，排出的气流很强并有嘘声时，维持23min以排解冷空气。如灭菌物品较大或不易透气，应适当延长排气时间，务必使空气充分排解，然后将排气阀关闭。5. 加压将排气阀关闭6. 保压当压力升至0IMPa时,温度达121C,此时应留意观看，把握热源。保持压力稳定，维持20-30min后，切断热源。7. 自然降压当压力表降至“0”处，稍停，使温度连续降至100C以下后，打开排气阀，旋开固定螺旋，开盖，取出灭菌物。注意：切勿在锅内压力尚在“0”点以上，温度也在100C以上时开启排气阀，否则会因压力突然降低，而造成培育基猛烈沸腾冲出管口或瓶口，污染棉塞，以后培育时引起杂菌污染。压力降到“0”时，

23、方可打开排气阀。8. 保养灭菌完毕取出物品后，将锅内余水倒出，以保持内壁及内胆干燥，盖好锅盖。9. 培育基无菌检查五、关键步骤及留意事项1. 要严格按配方配制。2. 调pH不要过头。3. 干热灭菌要留意物品不要堆放过紧，留意温度的时间把握，70oC以下放物、取物。4. 高压灭菌要留意物品不要过多，加热后排解冷空气，到时降压回零取物。5. 过滤除菌要留意各部件灭菌，压滤时，压力要适当，不行太猛太快，滤膜要留意清洗保存。陕西师范高校远程教育学院生物学试验报告报告题目培育基的制备与消毒灭菌姓名学号专业批次/层次指导老师学习中心试验报告篇三：试验一培育基的制备试验一培育基的制备一、目的与要求（一）学习

24、制备培育基的基本技术。（二）制备牛肉膏蛋白琼脂培育基。二、原理牛肉膏蛋白培育基是一种应用最广泛和最一般的细菌培育基，这种培育基中含有一般细菌生长繁殖所需要的最基本的养分物质，可供作繁殖之用，制作固体培育基时须加2%琼脂，培育细菌时，应用稀酸或稀碱将PH调至中性或微碱性。牛肉膏蛋白培育基的配方：牛肉膏0.5%,蛋白胨1%,NaClO.5%,pH7.47.6。三、材料与仪器（一）试剂牛肉膏，蛋白胨、NaCl、琼脂、1mol/LNaOH、1mol/LHCl。（二）其他试管，三角烧瓶，烧杯，量筒，漏斗，乳胶管，弹簧夹，纱布，棉花，牛皮纸，线绳，pH试纸，电炉,台称。四、操作步骤（一）称量依据用量按比例

25、依次称取成分，牛肉膏常用玻棒挑取，放在小烧杯或表面皿中称量，用热水溶化后倒入烧杯，蛋白胨易吸湿，称量时要快速。（二）溶解在烧杯中加入少于所需要的水量，加热，ZHU一加入各成分，使其溶解，琼脂在溶液煮沸后加入，融化过程需不断搅拌。加热时应留意火力，勿使培育基烧焦或溢出。溶好后，补足所需水分。（三）调PH用1mol/LNaOH或1mol/LHCl把PH调至所需范围。（四）过滤趁热用滤纸或多层纱布过滤，以利于某些试验结果的观看，如无特殊要求时可省去此步骤。（五）分装按试验要求，可将配制的培育基分装入试管内或三解瓶内，分装装置照试验图8所示；分装时留意，勿使培育基沾染在容器口上，以免沾染棉塞引起污染。

26、1液体分装分装高度以试管高度的1/4左右为宜，分装三角瓶的量则依据需要而定，一般以不超过三角瓶容积的1/2为宜。2固体分装分装试管，其装量不超过管高的1/5，灭菌后制成斜面，斜面长度不超过管长的1/2。分装三解瓶，以不超过容积的1/2为宜。3半固体分装装置以试管高度的1/3为宜，灭菌后垂直待凝。（六）加棉塞分装完毕后，在试管口或三解瓶口塞上棉塞（或泡沫塑料塞及试管帽等，以阻挡外界微生物进入培养基而造成污染，并保证有良好的通气性能。（七）包扎棉塞头上包一层牛皮纸，扎紧，即可进行灭菌。（八）保存灭菌后的培育基放入37C养箱中培育24小时，以检验灭菌的效果，无污染方可使用。五、试验报告（一）结果说明

27、你配制培育基过程中的状况。（二）思考题1培育基配制时应留意什么问题？为什么？2分装培育基时为什么要使用弹簧夹？3培育基配好后，为什么要立刻灭菌？试验二消毒与灭菌一、目的与要求了解干热灭菌及高压蒸汽灭菌的操作方法。二、原理干热灭菌是接受高温使微生物细胞内的蛋白凝固变性而达到灭菌的目的，细胞内的蛋白质凝固性与其本身的含水量有关，在菌体受热时，当环境和细胞内含水量越大，则蛋白凝固越快，反之含水量越小凝固越慢。因此与湿热灭菌相比，干热灭菌所需温度高（160170C）,时间长（12h）。高压蒸汽灭菌是将待灭菌的物品放入一个密闭的加压灭菌锅内，通过加热，使灭菌锅内水沸腾产生蒸汽，水蒸汽急剧地将锅内的冷空气

28、从排气阀中驱尽，然后关闭排气阀，连续加热，此时由于水蒸汽不能溢出而增加了灭菌锅内的压力，从而使沸点提升，得到高于100C的温度，导致菌体蛋白质凝固变性而达到灭菌的目的。一般培育基用0.1MPa、121.1C.1530min可达到彻底灭菌,灭菌的温度及维持的时间随灭菌物品的性质和容量等具体状况而有所转变.三、材料与仪器吸管、培育皿、试管、电热干燥箱，手提试高压蒸汽灭锅，牛肉膏蛋白胨培育基、蒸馏水。四、操作步骤（一）干热灭菌法适用于空的、干燥的玻璃器皿的灭菌。培育基不适用。1将包好的待灭菌物品（培育皿、试管、吸管等）放入电热干燥箱（留意留有确定的间隙），关好箱门。2接通电源，打开排气孔，使箱内湿空

29、气能逸出，旋动恒温调整器，保持加热升温状态，至箱内达到100C时关闭排气孔。3当温度升到160170C时，借恒温调整器的自动控制，保持此温度2h。4切断电源，冷却至70C时，打开箱门，取出灭菌物品（未降至70度以前，切勿打开箱门，否则温度骤降导致玻璃器皿炸裂）。（二）高压蒸汽灭菌1首先将内层锅取出，再向外层锅内加入适量的水，使水面与三角架相平为宜。2放回内层锅，并装入待灭菌物品（内装培育基或小的三角瓶），不要装得太挤，以免阻碍汽流通影响灭菌效果，三角瓶口不要与桶壁接触，以免冷凝水淋温包口的纸而透入棉塞。加盖，并将盖上的排气软管插入内层锅的排气槽内，再以两两对称的方式同时旋紧相对的两个棉栓，使螺

30、栓松紧全都，勿使漏气。3用电炉或其他方法加热，并同时打开排气阀，使水沸腾以排解锅内的冷空气，待冷空气排尽后，关上排气阀让锅内的温度随蒸汽压力增加而慢慢提升，当锅内达到所需压力时，把握热源，维持压力至所需时间。4停止加热，待压力表的压力降至零位时，打开排气阀，旋松螺栓，打开盖子，取出灭菌物品。留意：当压力不为零时，不能开盖取物否则由于压力突然下降，容器内外压力不平衡而冲出烧瓶口或试管口，造成棉塞沾染而发生污染，甚至灼伤操作者。5高压灭菌锅上的平安阀，是保障平安使用的重要机构，不得任凭调整。五、试验报告（一）结果检杳灭菌是否彻底。（二）思考题1干热灭菌操作过程中应留意哪些问题，为什么？2为什么干热

31、灭菌所需温度要比湿热灭菌高？3高压蒸汽灭菌时，为什么要排尽锅内的空气？试验三接种和纯化一、目的与要求（一）把握微生物各种接种、分别方法。（二）把握无菌操作的基本环节。（三）完成确定数量的微生物接种任务。二、原理在自然界中，各种微生物是在互为依靠的关系下共同生活的。因此，为了取出特定的微生物进行纯培育，必需把它们分别出来。将一种微生物移到另一种灭菌的培育基上称为接种。分别培育微生物时，要考虑微生物对外界的物理、化学等因素的影响。即选择该类微生物最适合的培育基和培育条件。在分别、接种、培育过程中，均需严格的无菌操作，防止杂菌侵入，所用的器具必需经过灭菌，接种工具无论使用前后都要经过火焰灭菌，且在无

32、菌室或无菌箱中进行。三、材料与仪器（一）菌种大肠杆菌、枯草杆菌、金黄色葡萄球菌、酵母菌、青霉菌（二）缓冲葡萄糖肉汤培育基试管垂直；缓冲葡萄糖肉汤半固体培育基试管垂直；缓冲葡萄糖肉汤固体培育基试管斜面；缓冲葡萄糖肉汤固体培育基平板；察氏培育基试管斜面；察氏培育基平板。（三）接种环、接种针、接种钩。镊子、酒精灯、火柴、酒精棉、试管架、浆糊、标签纸、恒温培育箱等。四、操作方法（一）接种1接种前的预备工作（1）检查接种工具。（2）在欲接种的培育基试管或平板上贴好标签，标上接咱的菌名、操作者、接种日期等。（3）将培育基、接种工具和其他用品全部放在试验台上摆好，进行环境消毒。2接种方法（1）试管接种方法 将菌种试管与待接种的试管培育基依次排列，挟于左手的拇指与食指之间，用右手的中指与食指或食指与小指拔出棉塞并挟出。 置试管口于酒精火焰四周；