以豆渣为原料固态发酵生产核黄素

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1、以豆渣为原料固态发酵生产核黄素以豆渣为原料固态发酵生产核黄素 南开大学本科生创新科研计划南开大学本科生创新科研计划-“-“百项工程百项工程”申请项目申请项目 2009年年4月月项目团队项目团队项目团队项目团队项目组成员：揭晶项目组成员：揭晶项目组成员：揭晶项目组成员：揭晶 闵白瑜闵白瑜闵白瑜闵白瑜项目负责人：张渺项目负责人：张渺项目负责人：张渺项目负责人：张渺指导教师：宋存江指导教师：宋存江指导教师：宋存江指导教师：宋存江 教授教授教授教授汇报内容汇报内容一、立项依据一、立项依据一、立项依据一、立项依据uu项目实施目的和意义项目实施目的和意义项目实施目的和意义项目实施目的和意义uu主要参考文献

2、主要参考文献主要参考文献主要参考文献二、项目实施方案二、项目实施方案二、项目实施方案二、项目实施方案uu项目实施的内容、方法、技术路线项目实施的内容、方法、技术路线项目实施的内容、方法、技术路线项目实施的内容、方法、技术路线uu拟解决的关键问题和实现方法拟解决的关键问题和实现方法拟解决的关键问题和实现方法拟解决的关键问题和实现方法 uu项目实施进度和安排项目实施进度和安排项目实施进度和安排项目实施进度和安排三、预期成果三、预期成果三、预期成果三、预期成果四、经费预算四、经费预算四、经费预算四、经费预算核黄素又名维生素核黄素又名维生素核黄素又名维生素核黄素又名维生素B2B2B2B2，化学结构是，

3、化学结构是，化学结构是，化学结构是一个核糖醇侧链的异咯嗪的衍生物一个核糖醇侧链的异咯嗪的衍生物一个核糖醇侧链的异咯嗪的衍生物一个核糖醇侧链的异咯嗪的衍生物,为橙黄色结晶，有苦味，是人体必为橙黄色结晶，有苦味，是人体必为橙黄色结晶，有苦味，是人体必为橙黄色结晶，有苦味，是人体必需的水溶性维生素。需的水溶性维生素。需的水溶性维生素。需的水溶性维生素。一、立项依据一、立项依据1.项目实施目的和意义项目实施目的和意义其形成的辅酶是许多氧化酶系统其形成的辅酶是许多氧化酶系统其形成的辅酶是许多氧化酶系统其形成的辅酶是许多氧化酶系统不可缺少的组成部分，在生物氧不可缺少的组成部分，在生物氧不可缺少的组成部分，

4、在生物氧不可缺少的组成部分，在生物氧化过程中参与氢的传递，促进碳化过程中参与氢的传递，促进碳化过程中参与氢的传递，促进碳化过程中参与氢的传递，促进碳水化合物、蛋白质、脂肪以及核水化合物、蛋白质、脂肪以及核水化合物、蛋白质、脂肪以及核水化合物、蛋白质、脂肪以及核酸的代谢，尤其是对上皮细胞的酸的代谢，尤其是对上皮细胞的酸的代谢，尤其是对上皮细胞的酸的代谢，尤其是对上皮细胞的不断更新和皮肤黏膜的新陈代谢不断更新和皮肤黏膜的新陈代谢不断更新和皮肤黏膜的新陈代谢不断更新和皮肤黏膜的新陈代谢起着促进作用。核黄素缺乏可以起着促进作用。核黄素缺乏可以起着促进作用。核黄素缺乏可以起着促进作用。核黄素缺乏可以引起

5、体内多种代谢障碍。引起体内多种代谢障碍。引起体内多种代谢障碍。引起体内多种代谢障碍。核黄素的生产方法主要有核黄素的生产方法主要有核黄素的生产方法主要有核黄素的生产方法主要有4 4 4 4种：植物体抽提法、化学合种：植物体抽提法、化学合种：植物体抽提法、化学合种：植物体抽提法、化学合成法、微生物发酵法和半发酵半合成法。与其它方法相成法、微生物发酵法和半发酵半合成法。与其它方法相成法、微生物发酵法和半发酵半合成法。与其它方法相成法、微生物发酵法和半发酵半合成法。与其它方法相比，微生物发酵法属于生物化学过程，无毒安全、转化比，微生物发酵法属于生物化学过程，无毒安全、转化比，微生物发酵法属于生物化学过

6、程，无毒安全、转化比，微生物发酵法属于生物化学过程，无毒安全、转化率高、成本低、生产速度快、产品纯度高、易于自动化率高、成本低、生产速度快、产品纯度高、易于自动化率高、成本低、生产速度快、产品纯度高、易于自动化率高、成本低、生产速度快、产品纯度高、易于自动化控制，因而发展前景十分广阔，日益受到世界核黄素生控制，因而发展前景十分广阔，日益受到世界核黄素生控制，因而发展前景十分广阔，日益受到世界核黄素生控制，因而发展前景十分广阔，日益受到世界核黄素生产商的青睐。产商的青睐。产商的青睐。产商的青睐。目前利用微生物发酵法大规模工业生产核黄素主要采用目前利用微生物发酵法大规模工业生产核黄素主要采用目前利

7、用微生物发酵法大规模工业生产核黄素主要采用目前利用微生物发酵法大规模工业生产核黄素主要采用液体深层发酵方法。固体发酵方法研究较少。液体深层发酵方法。固体发酵方法研究较少。液体深层发酵方法。固体发酵方法研究较少。液体深层发酵方法。固体发酵方法研究较少。在核黄素固体发酵生产的原料中，豆渣是加工大豆制品在核黄素固体发酵生产的原料中，豆渣是加工大豆制品在核黄素固体发酵生产的原料中，豆渣是加工大豆制品在核黄素固体发酵生产的原料中，豆渣是加工大豆制品的副产物，具有丰富的营养价值。采用豆渣生产核黄素的副产物，具有丰富的营养价值。采用豆渣生产核黄素的副产物，具有丰富的营养价值。采用豆渣生产核黄素的副产物，具有

8、丰富的营养价值。采用豆渣生产核黄素不仅效价高，而且原料来源广泛，价格便宜且能提高大不仅效价高，而且原料来源广泛，价格便宜且能提高大不仅效价高，而且原料来源广泛，价格便宜且能提高大不仅效价高，而且原料来源广泛，价格便宜且能提高大豆的利用价值，并能实现豆渣废弃物的资源化利用。豆的利用价值，并能实现豆渣废弃物的资源化利用。豆的利用价值，并能实现豆渣废弃物的资源化利用。豆的利用价值，并能实现豆渣废弃物的资源化利用。从发酵液中提取核黄素的方法主要有重金属盐沉淀法、从发酵液中提取核黄素的方法主要有重金属盐沉淀法、MorehouseMorehouse法、酸溶法和碱溶法。目前工业生产中大多法、酸溶法和碱溶法。

9、目前工业生产中大多采用酸溶法。酸溶法提取核黄素的能耗较大，经一次溶采用酸溶法。酸溶法提取核黄素的能耗较大，经一次溶解、结晶获得的核黄素纯度只有解、结晶获得的核黄素纯度只有60%60%70%70%。本实验采用碱溶法提取核黄素，经二次分离结晶，最终本实验采用碱溶法提取核黄素，经二次分离结晶，最终获得的成品纯度可达到获得的成品纯度可达到92.6%92.6%，总收益率可达，总收益率可达80%80%。碱溶。碱溶法提取核黄素不仅收益率高法提取核黄素不仅收益率高,而且能耗低。而且能耗低。2.主要参考文献主要参考文献1 1 项昭保项昭保,戴传云戴传云,朱蠡庆朱蠡庆.核黄素生理生化特征及其功能核黄素生理生化特征

10、及其功能J,J,食品研究与食品研究与开发开发,2004,25(6),90-95.,2004,25(6),90-95.2 2 宋德贵宋德贵,卫军卫军,杨生玉杨生玉.利用豆渣黄浆水发酵生产核黄素的研究利用豆渣黄浆水发酵生产核黄素的研究J,J,广西广西工学院学报，工学院学报，2005,16(4),73-77.2005,16(4),73-77.3 3 陈佩林陈佩林,赵春赵春.微生物发酵产核黄素研究进展微生物发酵产核黄素研究进展J,J,畜牧与兽医畜牧与兽医,2005,37(4),54-56.,2005,37(4),54-56.4 4 汪多仁汪多仁.维生素维生素B2B2的开发与应用的开发与应用,发酵科技通

11、讯发酵科技通讯,2008,37(3),31-33.,2008,37(3),31-33.5 5 李标李标,戴传云戴传云,赵宏伟赵宏伟,王伯初王伯初,唐坤唐坤.低强度超声波刺激对阿氏假囊酵母低强度超声波刺激对阿氏假囊酵母细胞次生代谢的影响细胞次生代谢的影响,生物技术通讯生物技术通讯,2005,16(3),2005,16(3)，271-273.271-273.6 6 宋辉宋辉,班睿班睿.ribRribR基因在产核黄素枯草芽胞杆菌中的组成型表达基因在产核黄素枯草芽胞杆菌中的组成型表达 2007,40(6),71-76.2007,40(6),71-76.1.项目实施的内容、方法、技术路线项目实施的内容、

12、方法、技术路线本研究旨在采用大豆饮料（豆浆）所产生的废弃物本研究旨在采用大豆饮料（豆浆）所产生的废弃物-豆渣为原料，采用固态发酵的方法，制备维生素豆渣为原料，采用固态发酵的方法，制备维生素B2(B2(核黄核黄素素)。在生产维生素。在生产维生素B2B2的同时，实现豆渣废弃物的资源化的同时，实现豆渣废弃物的资源化利用。利用。（1 1）技术路线如下：）技术路线如下：二、项目实施方案二、项目实施方案（2 2）研究内容）研究内容：通过上述技术路线研究最佳发酵温度、最佳发酵通过上述技术路线研究最佳发酵温度、最佳发酵pHpH值和最值和最佳发酵时间；佳发酵时间；通过上述技术路线研究发酵过程中最佳的发酵添加诱导

13、物通过上述技术路线研究发酵过程中最佳的发酵添加诱导物和生长因子；和生长因子；通过上述技术路线研究该工艺的其他影响因素包括接种量、通过上述技术路线研究该工艺的其他影响因素包括接种量、摇瓶时间等。摇瓶时间等。（3 3）具体方法：）具体方法：所用菌种为阿氏假囊酵母所用菌种为阿氏假囊酵母(Ecemothecium ashbyiiEcemothecium ashbyii)种子培养基：种子培养基：100%100%麦芽汁，麦芽汁，pH6.5pH6.5，糖度，糖度7 7波美，波美，115 115 灭菌灭菌20min20min。发酵培养基：干豆渣发酵培养基：干豆渣15g15g（小米面（小米面4.5g4.5g麸皮

14、麸皮4.5g4.5g玉米糁玉米糁 3g 3g），水），水45ml45ml，pH6.0pH6.0，经，经121121灭菌灭菌30min30min。培养：将阿氏假囊酵母菌种接种到种子培养液中培养：将阿氏假囊酵母菌种接种到种子培养液中,于于 28 28转速为转速为160r/min160r/min的摇床振荡培养的摇床振荡培养2 2天。天。发酵：取发酵：取5ml5ml种子液接种到发酵培养基，种子液接种到发酵培养基，2828培养培养1313天天 ，待测。，待测。产物提取及检测：产物提取及检测：a.a.酸溶法：待测样品在酸溶法：待测样品在105105干燥至恒定后，精确称取干燥至恒定后，精确称取0.015g0

15、.015g，加，加3%3%稀释冰醋酸稀释冰醋酸800ml800ml，50507070加热溶解，冷却后加水定加热溶解，冷却后加水定容至容至1000ml1000ml作为检液。用维生素作为检液。用维生素B2B2标准品同上制作标准溶液，标准品同上制作标准溶液，以水为参比溶液，用以水为参比溶液，用723723型分光光度计在波长型分光光度计在波长445nm445nm处测量检液处测量检液的吸光度的吸光度ATAT及标准溶液的吸光度及标准溶液的吸光度ASAS之后，立即向两种溶液中加之后，立即向两种溶液中加亚硫酸氢钠亚硫酸氢钠0.0200g0.0200g，充分混合，脱色，测定此二液的吸光度，充分混合，脱色，测定此

16、二液的吸光度ATAT及及ASAS，依据下式可求出核黄素的含量。操作在遮光容器，依据下式可求出核黄素的含量。操作在遮光容器中进行。中进行。b.b.碱溶法：在碱性条件下，核黄素的稳定性较差，必须避碱溶法：在碱性条件下，核黄素的稳定性较差，必须避光操作，分离时间应尽可能短。加入碱液溶解核黄素，调节光操作，分离时间应尽可能短。加入碱液溶解核黄素，调节pHpH为为11.411.4左右，充分搅拌，溶解时间不超过左右，充分搅拌，溶解时间不超过5min5min，避免局部，避免局部pHpH值过高。温度低于值过高。温度低于3535；离心，取上清；加入适量的氧化；离心，取上清；加入适量的氧化剂剂(如过氧化氢等如过氧

17、化氢等)，使核黄素处于氧化态，有利于核黄素的，使核黄素处于氧化态，有利于核黄素的稳定，比较方便的方法是通入经适当过滤的干净空气，使溶稳定，比较方便的方法是通入经适当过滤的干净空气，使溶液中的氧。液中的氧。（1 1 1 1）固态发酵生产维生素）固态发酵生产维生素）固态发酵生产维生素）固态发酵生产维生素B2B2B2B2（核黄素）的关键问题是发酵（核黄素）的关键问题是发酵（核黄素）的关键问题是发酵（核黄素）的关键问题是发酵物料中的核黄素产量低，课题组拟采用在发酵物料中添加物料中的核黄素产量低，课题组拟采用在发酵物料中添加物料中的核黄素产量低，课题组拟采用在发酵物料中添加物料中的核黄素产量低，课题组拟

18、采用在发酵物料中添加生长因子或前体的方法来解决此问题。生长因子或前体的方法来解决此问题。生长因子或前体的方法来解决此问题。生长因子或前体的方法来解决此问题。（2 2 2 2）固态发酵不同于液体发酵，既要保证微生物发酵所需）固态发酵不同于液体发酵，既要保证微生物发酵所需）固态发酵不同于液体发酵，既要保证微生物发酵所需）固态发酵不同于液体发酵，既要保证微生物发酵所需的湿度，又要保证物料的松散以达到供氧的目的。课题组的湿度，又要保证物料的松散以达到供氧的目的。课题组的湿度，又要保证物料的松散以达到供氧的目的。课题组的湿度，又要保证物料的松散以达到供氧的目的。课题组拟采用的方法是：先确立固态发酵物的最

19、低含水量，在实拟采用的方法是：先确立固态发酵物的最低含水量，在实拟采用的方法是：先确立固态发酵物的最低含水量，在实拟采用的方法是：先确立固态发酵物的最低含水量，在实施发酵中适当地补加水分，在保持物料含水量的同时，保施发酵中适当地补加水分，在保持物料含水量的同时，保施发酵中适当地补加水分，在保持物料含水量的同时，保施发酵中适当地补加水分，在保持物料含水量的同时，保证物料的通氧。证物料的通氧。证物料的通氧。证物料的通氧。2.2.2.2.拟解决的关键问题和实现方法拟解决的关键问题和实现方法拟解决的关键问题和实现方法拟解决的关键问题和实现方法2009200920092009年年年年04040404月月

20、月月-2009-2009-2009-2009年年年年09090909月月月月 建立基本固态发酵的路线，检测方法的试测；建立基本固态发酵的路线，检测方法的试测；建立基本固态发酵的路线，检测方法的试测；建立基本固态发酵的路线，检测方法的试测；研究最佳发酵温度、最佳发酵研究最佳发酵温度、最佳发酵研究最佳发酵温度、最佳发酵研究最佳发酵温度、最佳发酵pHpHpHpH值和最佳发酵时间；值和最佳发酵时间；值和最佳发酵时间；值和最佳发酵时间；2009200920092009年年年年10101010月月月月-2010-2010-2010-2010年年年年03030303月月月月 研究固态发酵素的接种量、固态发酵

21、的摇瓶时间间隔等；研究固态发酵素的接种量、固态发酵的摇瓶时间间隔等；研究固态发酵素的接种量、固态发酵的摇瓶时间间隔等；研究固态发酵素的接种量、固态发酵的摇瓶时间间隔等；研究固态发酵最佳的发酵添加诱导物和生长因子；研究固态发酵最佳的发酵添加诱导物和生长因子；研究固态发酵最佳的发酵添加诱导物和生长因子；研究固态发酵最佳的发酵添加诱导物和生长因子；总结，专利申报等。总结，专利申报等。总结，专利申报等。总结，专利申报等。3.3.3.3.项目实施进度和安排项目实施进度和安排项目实施进度和安排项目实施进度和安排1.1.1.1.申请中国发明专利申请中国发明专利申请中国发明专利申请中国发明专利1 1 1 1项

22、；发表论文项；发表论文项；发表论文项；发表论文1 1 1 1篇；篇；篇；篇；2.2.2.2.建立豆渣为原料固态发酵生产核黄素的工艺技术路线；建立豆渣为原料固态发酵生产核黄素的工艺技术路线；建立豆渣为原料固态发酵生产核黄素的工艺技术路线；建立豆渣为原料固态发酵生产核黄素的工艺技术路线；确立最佳发酵时间、最佳发酵温度、最佳发酵确立最佳发酵时间、最佳发酵温度、最佳发酵确立最佳发酵时间、最佳发酵温度、最佳发酵确立最佳发酵时间、最佳发酵温度、最佳发酵pHpHpHpH值、最值、最值、最值、最佳前体、最佳诱导物等因素；佳前体、最佳诱导物等因素；佳前体、最佳诱导物等因素；佳前体、最佳诱导物等因素；3.3.3.

23、3.达到以豆渣为原料，进行固态发酵生产，核黄素占发酵物达到以豆渣为原料，进行固态发酵生产，核黄素占发酵物达到以豆渣为原料，进行固态发酵生产，核黄素占发酵物达到以豆渣为原料，进行固态发酵生产，核黄素占发酵物料料料料10%10%10%10%以上的目标。以上的目标。以上的目标。以上的目标。三、预期成果三、预期成果预算科目预算科目预算科目预算科目支出项目支出项目支出项目支出项目金额金额金额金额实验业务实验业务费费无无-实验材料实验材料费费购置化学试剂、培养基成分、购置化学试剂、培养基成分、固体发酵瓶等固体发酵瓶等4,8004,800元元图书资料图书资料费费复印费、图书、资料等复印费、图书、资料等200

24、200元元其他其他无无-合计合计5,0005,000元元四、经费预算四、经费预算THANK YOU9 9、静夜四无邻，荒居旧业贫。、静夜四无邻，荒居旧业贫。4 4月月-23-234 4月月-23-23Friday,April 21,2023Friday,April 21,20231010、雨中黄叶树，灯下白头人。、雨中黄叶树，灯下白头人。09:14:2809:14:2809:14:2809:14:2809:1409:144/21/2023 9:14:28 AM4/21/2023 9:14:28 AM1111、以我独沈久，愧君相见频。、以我独沈久，愧君相见频。4 4月月-23-2309:14:2

25、809:14:2809:1409:14Apr-23Apr-2321-Apr-2321-Apr-231212、故人江海别，几度隔山川。、故人江海别，几度隔山川。09:14:2809:14:2809:14:2809:14:2809:1409:14Friday,April 21,2023Friday,April 21,20231313、乍见翻疑梦，相悲各问年。、乍见翻疑梦，相悲各问年。4 4月月-23-234 4月月-23-2309:14:2809:14:2809:14:2809:14:28April 21,2023April 21,20231414、他乡生白发，旧国见青山。、他乡生白发，旧国见青山

26、。21 21 四月四月 2023 20239:14:28 9:14:28 上午上午09:14:2809:14:284 4月月-23-231515、比不了得就不比，得不到的就不要。、比不了得就不比，得不到的就不要。四月四月 23 239:14 9:14 上午上午4 4月月-23-2309:1409:14April 21,2023April 21,20231616、行动出成果，工作出财富。、行动出成果，工作出财富。2023/4/21 9:14:282023/4/21 9:14:2809:14:2809:14:2821 April 202321 April 20231717、做前，能够环视四周；做时

27、，你只能或者最好沿着以脚为起点的射线向前。、做前，能够环视四周；做时，你只能或者最好沿着以脚为起点的射线向前。9:14:28 9:14:28 上午上午9:14 9:14 上午上午09:14:2809:14:284 4月月-23-239 9、没有失败，只有暂时停止成功！。、没有失败，只有暂时停止成功！。4 4月月-23-234 4月月-23-23Friday,April 21,2023Friday,April 21,20231010、很多事情努力了未必有结果，但是不努力却什么改变也没有。、很多事情努力了未必有结果，但是不努力却什么改变也没有。09:14:2809:14:2809:14:2809:

28、14:2809:1409:144/21/2023 9:14:28 AM4/21/2023 9:14:28 AM1111、成功就是日复一日那一点点小小努力的积累。、成功就是日复一日那一点点小小努力的积累。4 4月月-23-2309:14:2809:14:2809:1409:14Apr-23Apr-2321-Apr-2321-Apr-231212、世间成事，不求其绝对圆满，留一份不足，可得无限完美。、世间成事，不求其绝对圆满，留一份不足，可得无限完美。09:14:2809:14:2809:14:2809:14:2809:1409:14Friday,April 21,2023Friday,April

29、 21,20231313、不知香积寺，数里入云峰。、不知香积寺，数里入云峰。4 4月月-23-234 4月月-23-2309:14:2809:14:2809:14:2809:14:28April 21,2023April 21,20231414、意志坚强的人能把世界放在手中像泥块一样任意揉捏。、意志坚强的人能把世界放在手中像泥块一样任意揉捏。21 21 四月四月 2023 20239:14:28 9:14:28 上午上午09:14:2809:14:284 4月月-23-231515、楚塞三湘接，荆门九派通。、楚塞三湘接，荆门九派通。四月四月 23 239:14 9:14 上午上午4 4月月-2

30、3-2309:1409:14April 21,2023April 21,20231616、少年十五二十时，步行夺得胡马骑。、少年十五二十时，步行夺得胡马骑。2023/4/21 9:14:282023/4/21 9:14:2809:14:2809:14:2821 April 202321 April 20231717、空山新雨后，天气晚来秋。、空山新雨后，天气晚来秋。9:14:28 9:14:28 上午上午9:14 9:14 上午上午09:14:2809:14:284 4月月-23-239 9、杨柳散和风，青山澹吾虑。、杨柳散和风，青山澹吾虑。4 4月月-23-234 4月月-23-23Frid

31、ay,April 21,2023Friday,April 21,20231010、阅读一切好书如同和过去最杰出的人谈话。、阅读一切好书如同和过去最杰出的人谈话。09:14:2809:14:2809:14:2809:14:2809:1409:144/21/2023 9:14:28 AM4/21/2023 9:14:28 AM1111、越是没有本领的就越加自命不凡。、越是没有本领的就越加自命不凡。4 4月月-23-2309:14:2809:14:2809:1409:14Apr-23Apr-2321-Apr-2321-Apr-231212、越是无能的人，越喜欢挑剔别人的错儿。、越是无能的人，越喜欢挑

32、剔别人的错儿。09:14:2809:14:2809:14:2809:14:2809:1409:14Friday,April 21,2023Friday,April 21,20231313、知人者智，自知者明。胜人者有力，自胜者强。、知人者智，自知者明。胜人者有力，自胜者强。4 4月月-23-234 4月月-23-2309:14:2809:14:2809:14:2809:14:28April 21,2023April 21,20231414、意志坚强的人能把世界放在手中像泥块一样任意揉捏。、意志坚强的人能把世界放在手中像泥块一样任意揉捏。21 21 四月四月 2023 20239:14:28 9

33、:14:28 上午上午09:14:2809:14:284 4月月-23-231515、最具挑战性的挑战莫过于提升自我。、最具挑战性的挑战莫过于提升自我。四月四月 23 239:14 9:14 上午上午4 4月月-23-2309:1409:14April 21,2023April 21,20231616、业余生活要有意义，不要越轨。、业余生活要有意义，不要越轨。2023/4/21 9:14:282023/4/21 9:14:2809:14:2809:14:2821 April 202321 April 20231717、一个人即使已登上顶峰，也仍要自强不息。、一个人即使已登上顶峰，也仍要自强不息。9:14:28 9:14:28 上午上午9:14 9:14 上午上午09:14:2809:14:284 4月月-23-23MOMODA POWERPOINTLorem ipsum dolor sit amet,consectetur adipiscing elit.Fusce id urna blandit,eleifend nulla ac,fringilla purus.Nulla iaculis tempor felis ut cursus.感感 谢谢 您您 的的 下下 载载 观观 看看专家告诉