细胞工程复习题及答案

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1、细胞工程复习题一、名词解释1.细胞工程：以生物细胞、组织或器官为研究对象，运用工程学原理，按照预定目的，改变生物性状,生产生物产品，为人类生产或生活服务的科学。2.外植体：指用于离体培养的活的植物组织、器官等材料3.植物组织培养：将植物的器官、组织或细胞，在无菌条件下接种于人工配置的培养基上，使其细胞分裂、增值、分化、发育，甚至形成完整植株的方法。4.愈伤组织：在离体培养过程中形成的具有分生能力的一团不规则细胞，多在外植体切面上产生。5离体无性繁殖:简称离体繁殖，是指运用组织培养方法进行植物离体培养，在短期内获得大量遗传性一致个体的方法。6继代培养：更换新鲜培养基来繁殖同种类型的材料（愈伤组织

2、.芽等）。7.体细胞杂交：（原生质体融合）指在人工控制条件下不通过有性过程，两种体细胞原生质体互相融合产生杂种的方法。8 细胞分化：即由于细胞的分工而导致的细胞结构和功能的改变，或发育方式改变的过程。9 细胞脱分化：培养条件下使一个已分化的细胞回复到原始无分化状态或分生细胞状态的过程就是细胞脱分化。10 细胞再分化：即脱分化后的分生细胞在特定的条件下，重新恢复细胞分化能力，并经历器官发生形成单极性的芽或根，或经历胚胎发生形成双极性的胚状体，进一步发育成完整植物体，这一过程成为细胞再分化。11 人工种子：指植物离体培养中产生的胚状体或不定芽包裹在具有养分和保护功能的人工胚乳和人工种皮中所形成的能

3、发芽出苗的颗粒体。12 植物细胞全能性：指植物体的每一个活细胞都具有该植物的全套遗传信息，具有发育完整植株的潜在能力。13 胚状体：在离体培养过程中产生一种形似胚（具有明显的根端和芽端），功能与胚相同的结构。14 单倍体植物 ：单倍体是指具有配子体染色体数的孢子体(植物个体)。具有单套染色体的细胞在人工离体条件下培养，使其单性发育成植物体。这种具有单套染色体的植物称为单倍体植物。15 离体受精：（离体授粉）在无菌条件下培养未受精脂肪或胚珠和花粉，使花粉萌发进入胚珠，完毕受精作用。16 悬浮培养：是将植物游离细胞或细小的细胞团，在液体培养基中进行培养的方法。17 看护培养：是用一块活跃生长的愈伤

4、组织来促进培养细胞连续分裂和增值的方法。18 突变体筛选：19 原生质体：指除去细胞壁的细胞或是说一个被质膜所包围的裸露细胞。20 传代：将细胞从一个培养瓶转移到此外一个培养瓶即称为传代或传代培养21细胞分裂指数 22克隆化：一个克隆的细胞群体是从一个单一母细胞繁殖而来。分离单一细胞并使其繁殖为一细胞群体的方法23原代培养：也称初代培养期。从体内取出组织接种在培养瓶中培养到第一次传代前阶段，一般连续1-4周。 24有限细胞系：经继代培养后细胞系即使培养条件均能满足细胞繁殖生长，它们也只能在有限的时间内生存，通过运动世代后细胞将逐渐死亡。25永久细胞系: 大多数细胞系在有限的代数内以不变的形式增

5、殖，当超过有限世代后，在体外永久存活下来发育成永久细胞系或称连续细胞系26细胞系：通过再培养后而形成的具有增殖能力、特性专一、类型均匀的培养细胞27细胞株：将所得到的纯净细胞群，以一定的密度接种在lmm厚的薄层固体培养基上，进行平板培养，使之形成细胞团，尽也许地使每个细胞团均来自一个单细胞，这种细胞团称为“细胞株”。29克隆：指通过无性繁殖的手段，从一个动物细胞获得遗传背景相同的细胞群或个体群的过程。获得的细胞叫克隆细胞，个体群称为克隆动物。30胞质体：是除去细胞核后由膜包裹的无核细胞。植物去核原生质体又称微质体或亚原生质体。31细胞重组又叫细胞拆合是指从活细胞中分离出细胞器及其组分，后在体外

6、一定条件下将不同来源的细胞器及其组分进行重组，使其重新装配成为具有生物活性的细胞或细胞器的一种实验技术。32接触克制：当细胞在基质上分裂增殖，逐渐汇合成片即每个细胞与其周边的细胞互相接触时，细胞就停止增殖，即细胞密度不再增长33胚胎工程：在体外受精和体外初期胚胎发育的基础上，通过卵子切割、性别控制、嵌合体制作、细胞核移植、转基因操作等定向控制、改造和发明新遗传性状的技术统称为胚胎工程，又称发育工程。34干细胞：干细胞是一类具有自我复制能力的多潜能细胞，它可以化成多种功能细胞35核质体：由原生质膜和薄层细胞质包围细胞核形成的小原生质体。也称为微小原生质体36胚胎干细胞：胚胎干细胞是由初期胚胎内细

7、胞团或原始生殖细胞分离出来的多潜能细胞。二、问答题1、 植物细胞工程实验室的组成和基本规定有哪些？基本操作室（洗涤区 、灭菌区 、贮藏区、培养基配制区）、无菌操作室（缓冲准备室、接种室 ）、培养室、鉴定分析室、温室便于隔离、便于操作、便于灭菌、便于观测2、 植物组培中有哪些灭菌方法，其合用范围如何？干热灭菌法：各种玻璃器皿和器械湿热灭菌法：培养基、蒸馏水、各种器械、棉塞熏蒸灭菌：接种室和培养室过滤灭菌：液体培养基药剂灭菌：培养材料烧灼灭菌：接种器械、瓶口、棉塞射线灭菌：接种室空气和台面、花粉灭菌抗生素抑菌3、 植物细胞和组织培养方法有哪几种？固体培养、液体培养【摇瓶悬浮培养(小规模)、成批培养

8、、半连续培养(大规模反映器)、连续培养】4、 单细胞培养涉及哪几种培养方法？a.液体浅层培养 b.微室培养 c.平板培养 d.看护培养5、 在离体培养中，胚状体发生有哪几种方式？1、体细胞胚从外植体上直接发生2、通过愈伤组织的体细胞胚发生3、细胞悬浮培养的体细胞胚胎发生6、 影响植物细胞脱分化和再分化的因子有哪些？（1）培养基组成对植物细胞脱分化和再分化的影响1）培养基的营养组成2）培养基的渗透压3）培养基的酸碱度4）激素在细胞分化中的调控作用（2）环境条件与植物细胞的脱分化和再分化：湿度条件、温度条件、光照条件（3）光周期对植物细胞脱分化和再分化的效应光周期的需要与否，应根据植物种类、培养目

9、的来决定。7、 离体无性繁殖中有哪几种器官发生方式？1、不定芽型，2、器官型，3、器官发生型，4、类胚体发生型，5、原球茎型8、 简述离体无性繁殖环节。1、无菌母株制备（制备方法：田间取材（嫩枝）-自来水冲洗-消毒剂表面灭菌-无菌条件下切割成带1-2个芽的茎段-接种-诱导不定芽-产生丛芽。）2、不定芽增殖（无菌母株无菌条件再次切割继代培养繁殖，使之在每个芽眼处形成丛芽反复多次切割培养 获得大量不定芽）3、不定根的诱导，完整植株的形成（将继代增殖的幼嫩小植株转移至生根培养基中 诱导根的分化和根系的形成完整小植株）4、再生植株的锻炼和移栽（出管前一周打开瓶洗净培养基 移栽大田移栽。）5、再生植株的

10、鉴定（细胞学鉴定：形态鉴定）9、 简述药用植物组织培养常见问题和对策。1、污染及控制（1）材料带菌与控制控制方法：彻底灭菌（2）接种污染与控制。（3）培养过程感染与控制：对培养空间定期进行消毒解决，及时清除污染材料，转移继代材料。（4）培养基的污染与控制：在培养基中加入抑菌剂2、外植体褐化与控制1）、与植物的种类与品种有关控制的措施有：（1）在外植体消毒灭菌前用流水冲洗一段时间，以清洗部分酚类化合物和底物；（2）接种后在短时间内（1周内）多次转接到新鲜培养基上，直至褐化现象基本消失；（3）先短期用液体培养基进行震荡培养，待褐化现象减轻后再转入固体培养基进行培养。2）、与外植体的年龄有关措施：切

11、取幼龄的茎尖、顶芽分生组织、带芽茎段等做外植体接种较3）、与外植体的取样时间有关在春季切取的生长旺盛部位的外植体褐化较轻，4）、与培养基有关：控制的措施：运用吸附剂减低或清除酚类产物，改变氧化还原势。常用的还原剂有维生素c5）、与培养方式有关(1)调节外植体在培养基中的放置方式(2)改变培养方法。(3)缩短转瓶周期。(4)调节光照。3、试管苗的玻璃化与控制 常用的措施有：(1)选择合适的外植体。 (2)琼脂的调节。 (3)碳源的调节。 (4)激素调节。 (5)湿度调节。采 (6)温度调节。 (7)光照调节. (8)改变供氮形式。9)氯离子调节。(10)尽量减少创伤乙烯产生。(11)在培养基中可

12、附加聚乙烯醇(PVA)、活性炭等，减少玻璃苗的产生。4、变异：（1）选择适宜的再生途径（2）植物生长物质选择（3）离体培养和继代时间的调节5、材料死亡6、黄化7、增殖率过低或过高 8、组培苗瘦弱或徒长10、植物组织培养所需培养基涉及哪些成分？植物组织培养培养基有哪些种类？（一）无机营养成分 大量元素 微量元素（二）有机营养成分1）糖类2）维生素3）氨基酸类和酰胺类（三）生长调节物质（四）附加成分1、高无机盐含量的培养基2、较高硝酸钾含量培养基 3、中档无机盐含量的培养基4、低无机盐含量的培养基11、简述植物激素的应用规律。先生长素解决，后细胞分裂素解决，有助于细胞分裂，但细胞不分化。先细胞分裂

13、素解决，后生长素解决、细胞分裂也分化（也许是内源生长素起了作用）。生长素和细胞分裂素同时解决，分化频率提高。两者同时存在的用量比值可以改变形态建成的方向。生长素细胞分裂素：比值高：有利根分化，克制芽形成；比值低：有利芽分化，克制根形成；比值适中：促进愈伤组织生长。12、哪些因素会影响培养物的遗传变异？培养基和培养方式 继代培养的次数13、体细胞无性系变异的诱导和选择方法。1.自发突变 2.诱变：物理诱变、化学诱变、转座子插入诱变、复合因子诱变直接选择法（正、负选择法）、间接选政法、绿岛法14、试述离体无性繁殖的程序。1、无菌母株制备2、不定芽增殖3、完整植株的形成4、再生植株的锻炼和移栽5、再

14、生植株的鉴定15、离体无性繁殖中，小植株的驯化要掌握什么样的原则？驯化中要掌握逐步过渡的原则，才干收到良好的效果。移栽前一方面要进行日光锻炼，通过“晒苗”措施恢复叶绿体光合作用功能。使小苗由异养逐步过渡到自养。第二步进行湿度锻炼，使小苗逐步适应周边环境的湿度。16、当前脱除植物病毒的方法有哪些？物理方法：高温解决、低温解决化学方法：运用化学药品解决生物方法： 茎尖培养脱毒法；微体嫁接离体培养脱毒法；珠心组织脱毒法；愈伤组织脱毒法。17、如何检测再生植株的脱毒效果？（l）直接测定法（2）指示植物法 （生物鉴定法、敏感植物鉴定法）（3）抗血清鉴定法（4）电子显微镜鉴定法（5）分子检测法18、花粉孢

15、子体的发育途径有哪几种？A途径（营养细胞发育途径）：花粉孢子体第一次有丝分裂，起源于花粉的营养细胞（营养核），营养细胞继续分裂形成胚状体或愈伤组织。 B途径（生殖细胞发育途径）：生殖细胞连续分裂形成胚状体，而营养细胞也许不分裂或只分裂数次形成一个胚柄状的结构附着在由生殖细胞起源的胚的胚根一端。C途径（营养细胞和生殖细胞共同发育途径）：营养核和生殖核先发生核融合，然后再进行花粉孢子体的第一次有丝分裂，发育成花粉植株。C途径的特点是生殖核和营养核共同参与花粉孢子体的形成，生殖核是有功能的。19、花粉植株的形态发生方式有哪几种类型？1）来自花粉诱导形成的胚状体；2）来自花粉的愈伤组织。20、试述花粉

16、单倍体植物的培养程序。1)材料准备；2)诱导花粉脱分化形成愈伤组织或胚状体；3)愈伤组织的植株分化或胚状体的正常生长；4)完整植物体的形成；5)再生植株的驯化和移植。21、花药培养中花药为什么要通过低温解决？可以激发花粉母细胞产生两个相等核，而不是一个营养核一个生殖核；保持高比例的强生活力花粉，同时延缓体细胞组织的衰老；激发花粉产生原胚；促使细胞同步分裂。 22、花药培养时为什么要用较高浓度蔗糖和较低浓度的激素？高糖预解决效应：接种前采用高糖预解决花药，一定期间后，再转移至适宜的糖浓度下培养，对诱导小孢子脱分化、再分化起促进作用，可大幅度地提高愈伤组织和胚状体的诱导率。23、人工诱发单倍体发生

17、方式有哪些？孤雄生殖孤雌生殖人工诱发单倍体以孤雄生殖为主，目前在育种中应用最广泛的也是这种类型的单倍体。24、植物胚胎培养包含哪些内容？1、胚培养 （l）成熟胚培养 （2）幼胚培养2、胚珠培养指未受精或受精后的胚珠离体培养。3、子房培养 指授粉和未授粉的子房培养 4、胚乳培养 指处在细胞期胚乳的离体培养5、试管受精 指培养未受精的胚珠并在试管内撒播花粉，使其受精形成具有生活力的种子。25、胚龄与胚性发育有着如何的关系？不同发育时期的幼胚，离体培养成功率差异很大。一般胚龄越大成功率越高，相反胚龄越小成功率越低。处在原胚期的幼胚即使采用胚珠预培养的方法，也仅有少数植物种可以成功，如烟草。矮牵牛、朱

18、顶红、棉花。离体培养中幼胚培养的成功率重要取决于培养基的组成。26、幼胚培养的关键技术是什么？剥离技术27、胚乳培养选择的最佳时期是何时？细胞期28、一个好的悬浮细胞系有哪些特性？用于建立悬浮细胞系的愈伤组织有何规定？（l）能大量提供均匀的植物细胞，也就是同步分裂的细胞。（2）细胞增殖速度快，适应于大规模工业化生产。（3）需要特殊的设备，如大型摇床、转床、连续培养装置、倒置式显微镜等，成本较高。 1）疏松易碎的愈伤组织以幼胚为最佳2）悬浮细胞培养基组成一般同愈伤组织培养基相似29、影响单细胞培养的因素有哪些？1、细胞的起始密度2、培养周期（在一个培养周期中，细胞数目、总重量（鲜重、干重）和DN

19、A含量的变化，呈一个“S”型曲线）3、培养基（1）条件培养基（2）生长调节剂（3）酸碱度）30、悬浮培养比固体培养有哪些优点，影响悬浮细胞生长的因素有哪些？一、增长培养细胞与培养液的接触面，改善营养供应；二、在振荡条件下可避免细胞代谢产生的有害物质在局部积累而对细胞自身产生毒害；三、振荡培养可以适当改善气体的互换。起始愈伤组织的质量；接种细胞密度；培养条件：方式、温度；继代周期31、简述植物细胞培养生产次级代谢产物的工艺过程。愈伤组织外植体 植物细胞 细胞悬浮培养 原生质体培养 细胞扩大培养 分离纯化 产物32、简述药用植物细胞大量培养环节。1）愈伤组织的诱导和悬浮细胞系的建立2）筛选高产细胞

20、系3）在生物反映器中大量培养细胞或细胞团33、简述悬浮培养细胞的同步化方法。（1）分选法（2）饥饿法（3）克制剂法（4）低温解决34、建立悬浮细胞系的关键技术有哪些？35、目前用做原生质体分离的材料有哪些？幼嫩叶或无菌试管苗叶片、下胚轴和子叶、培养细胞（愈伤组织、细胞悬浮培养物）、花粉细胞。一般认为由叶肉组织分离的原生质体，遗传性较为一致36、原生质体的分离方法有哪些？（l）机械分离法（缺陷：获得完整的原生质体的数量比较少，可以用此法产生原生质体的植物种类受到限制。优点：该方法可避免酶制剂对原生质体的破坏作用。）（2）酶解分离法（优点：酶解法可以获得大量的原生质体，并且几乎所有植物或它们的器官

21、、组织或细胞均可用酶解法获得原生质体。缺陷：这些酶制剂均具有核酸酶、蛋白酶、过氧化物酶以及酚类物质。用酶法降解细胞壁，会影响所获原生质体的活力。）37、原生质体纯化有哪些方法？沉降法、漂浮法、不连续梯度法38、原生质体的培养方法有哪些，各有何优缺陷？（1）固体培养法（平板培养法）（优点有助于对单个原生质体的胞壁再生和对细胞团形成的全过程进行定点观测。）（2）浅层液体培养法（3）双层培养法（优点：使培养基保持很好的湿度，不易干涸。同时还可以定期注入新鲜培养基。原生质体长壁速度和分裂速度不久。）39、影响原生质体培养的因素有哪些？简述原生质体培养的程序。（1）原生质体的活力 （2）原生质体起始密度

22、 （3）细胞壁再生速度 （4）培养基营养（5）培养条件（6）供试材料的基因型和生理状态原生质体分离原生质体纯化原生质体培养原生质体胞壁再生细胞团形成器官形成、植株再生。40、试述植物细胞融合的程序。1、植物原生质体分离（l）双亲原生质体制备（2）采用酶法分离原生质体（3）影响原生质体活力的各种因素2、 原生质体纯化（1）筛网过滤（2）采用不连续梯度法纯化原生质体（3）质膜稳定剂和渗透压稳定剂3、原生质体融合（l）盐融合法（2）高钙和高pH值法（3）聚乙二醇法（4）聚乙二醇和高钙、高pH值结合法（5）电融合法4、细胞杂种的选择（1）互补选择法：白化互补、遗传互补、营养互补（2）可见标志选择法：凹

23、穴培养皿法、微吸管法5、愈伤组织形成器官分化植株再生（1）基本培养基筛选（2）激素种类和浓度调节（3）渗透压调节6、杂种植物鉴定（1）与亲代形态特性比较（2）杂种植物核型分析（3）同工酶谱分析41、植物细胞杂种选择的方法有哪几种？（l）互补选择法白化互补选择法 遗传互补选择法 营养代谢互补选择法 （2）机械选择法（可见标记法）A凹穴培养皿分离法B微吸管分离法42、细胞大规模培养有哪些培养系统？成批培养、半连续培养、连续培养43、悬浮细胞系在继代培养中其群体生长规律。45、用于制备人工种子的繁殖体重要有哪些？46、控制胚性细胞同步分裂的方法有哪些？（l）克制剂法用DNA克制剂解决细胞培养物（2）

24、低温法低温解决调控胚状体的同步生长（3）渗透压法运用渗透压调控胚状体的同步生长不同发育阶段的胚，具有不同的渗透压规定。（4）分离过筛法（5）通气法运用气体调控胚状体的同步发生47、人工种子的应用前景如何？ 需要解决那些问题?随着研究的进一步，限制其在商业应用中的问题将逐步得到解决，实现其诱人的应用前景，必将对作物遗传育种、良种繁育和栽培等起到巨大的推动作用。1、贮藏问题 人工种子含水量大，常温下易萌发，也易失水干燥。2、体细胞无性系变异，3、成本问题 目前限制人工种子的商业运用的最大问题是成本，4、繁殖体生产技术和人工种皮材料的研制48、人工种子运用有何优点？离体繁殖所具有的优势，可贮藏、因而

25、可周年生产；可直接播种，减少了试管苗移栽在操作和管理上的困难，可机械化操作和常规的田间管理；可长距离运送，因此可建立相对集中的大型生产公司，实现资源和技术优化。49、什么是动物细胞、组织培养技术？50、动物细胞工程技术有哪些？那种技术是动物细胞工程的基础？51、动物细胞培养基成分有哪些？（1） 氨基酸类 （2） 维生素类 （3）大量元素-是调节培养液渗透压的重要成分。（4）微量元素-由血清提供的，在低血清或无血清培养液中，则需添加铁、铜、锌、硒等微量元素。（5）葡萄糖-能量来源之一，也是某些氨基酸合成的原料。（6）有机类（7）激素类-血清中具有许多激素。（8）生长因子类52、动物细胞培养基有哪

26、几种？无血清培养基成分有哪些？平衡盐溶液、天然培养基、合成培养基、无血清培养液（由基础培养液和附加成分组成。 取代血清的补充物：1）激素和生长因子；2）结合蛋白类； 3）低分子量营养因子；4）贴壁和铺展因子等。）53、动物细胞冻存和复苏的原则是什么？慢冻快融54、动物细胞体外培养的形态特性是如何的？55、动物细胞、组织培养的方法重要有哪些？56、简述动物原代和传代培养方法57、对体外培养细胞进行常规检查重要有那几方面内容？细胞健康状况、培养液pH、微生物污染、细胞交叉污染、化学物质污染 58、动物细胞大规模培养的方法重要有哪些？1悬浮培养2微载体培养3包埋和微囊培养4、中空纤维法59、如何运用

27、原生质体融合与培养技术制造新物种？60、动物细胞培养过程中细胞生长要通过哪几个阶段？原代培养期 、传代期 、衰退期61、动物细胞培养过程中细胞一代生长要通过哪几个阶段？潜伏期、指数生长期、平台期、衰退期62、 任选一培养技术叙述从外植体到再生植株的完整实验过程。63、根据其发育阶段，干细胞可以分为哪几种类型，根据其分化潜能的大小，又可分为哪几种类型？胚胎干细胞、成体干细胞 全能干细胞 多能干细胞 定向干细胞 64、人工诱发动物细胞融合方法有哪些？动物杂交细胞的分离方法有哪些？1、生物诱导细胞融合 2、化学方法诱导细胞融合3、物理方法诱导细胞融合4、激光诱导融合非选择性筛选、选择性筛选65、简述

28、运用杂交瘤技术进行单克隆抗体大规模生产的技术环节与要点。1.亲本细胞的准备（致敏B淋巴细胞、骨髓瘤细胞的准备）2.细胞融合形成杂交瘤细胞3.杂交瘤细胞的筛选（采用HAT（具有次黄嘌呤(H)、氨基喋呤(A)和胸腺嘧啶核苷(T)）选择性培养基）4. 可分泌特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞的筛选：对每个具有杂交瘤细胞集落的生长孔中的上清液进行抗体检测，筛选出可以稳定分泌特异性单克隆抗体的杂交细胞。检测方法：放射免疫测定、酶联免疫技术测定等5. 杂交瘤细胞的克隆化培养：有限稀释法或软琼脂平板法66、最常用的杂交瘤细胞杂交瘤细胞克隆方法有那些？（有限稀释法或软琼脂平板法）67、什么是胚胎工程？其核心技术有哪

29、些？在体外受精和体外初期胚胎发育的基础上，通过卵子切割、性别控制、嵌合体制作、细胞核移植、转基因操作等定向控制、改造和发明新遗传性状的技术统称为胚胎工程，又称发育工程。体外受精、胚胎移植是胚胎工程的核心技术。68、如何对的应用动物克隆技术? （1）哺育优良畜种和生产实验动物；（2）生产转基因动物；（3）生产人胚胎干细胞用于细胞和组织替代疗法；（4）复制濒危的动物物种，保存和传播动物物种资源70、什么是细胞核移植技术？克隆的基本方法有哪些？核移植技术又称细胞质工程、核质杂交，是运用显微操作技术将称为供体的一种动物细胞的细胞核移植到称为受体的同种或异种的另一种细胞中，或者将两个细胞的细胞核（或细胞

30、质）进行互换，形成核质杂种，并使受体细胞得以继续分裂和发育的方法。（1）胚胎干细胞核移植；（2）胚胎细胞核移植；（3）胎儿成纤维细胞核移植；（4）体细胞核移植71、什么是细胞重组，细胞重组的技术方法有哪些？细胞重组又叫细胞拆合是指从活细胞中分离出细胞器及其组分，后在体外一定条件下将不同来源的细胞器及其组分进行重组，使其重新装配成为具有生物活性的细胞或细胞器的一种实验技术。细胞重组的方式基本分为三种：（1）胞质体与完整细胞重组形成胞质杂种；（2）微细胞与完整细胞重组形成微细胞异核体；（3）胞质体与核体重新组合形成重组细胞。72、你如何看待动物克隆问题？克隆技术对人类来说，是一把“双刃剑”。一方面

31、，它能给人类带来许多益处，诸如保持优良品种、挽救濒危动物、运用克隆动物相同的基因背景进行生物医学研究等；另一方面，它将对生物多样性提出挑战，生物多样性是自然进化的结果，也是进化的动力，有性繁殖是形成生物多样性的重要基础，而“克隆动物”则会导致生物品系减少，个体生存能力下降。73、多莉羊是如何哺育出来的？为什么说她是克隆技术的里程碑？将动物体细胞通过克制培养，使其处在休眠状态，运用细胞核移植技术将其导入去核卵母细胞，发育成胚胎后移植至受体，妊娠产仔，克隆出成体动物。它是世界上第一例经体细胞核移植出生的动物，是克隆技术领域研究的巨大突破。在理论上证明了，分化了的动物细胞也具有全能性，在分化过程中细

32、胞核中的遗传物质没有不可逆变化；在实践上证明了，运用体细胞进行动物克隆的技术是可行的它是通过特殊的体外操作（显微注射、电融合、体外培养等），对哺乳动物特定发育阶段的核供体（胚胎卵裂球或体细胞）及相应的核受体（成熟的卵母细胞）进行体外重组，从而不通过有性繁殖过程而达成扩繁同基因型哺乳动物胚胎及其种群的目的。74、哺乳动物的克隆方法有哪些？（1）胚胎干细胞核移植；（2）胚胎细胞核移植；（3）胎儿成纤维细胞核移植；（4）体细胞核移植细胞模拟试题及答案一、填空（每空一分，共25分）1.实验室的物理防护是由隔离的设备、实验室的设计、实验实行等三个方面组成，根据其密封限度的不同，分为P1、P2、P3、P4

33、四个生物安全等级。典型的P4实验室由更衣区、过滤区、缓冲区、消毒区、核心区组成。2.细胞系是原代培养经初步纯化获得的以一种细胞为主的、能在体外长期生存的不均一细胞群体。3.细胞株是指从一个通过生物学鉴定的细胞系用单细胞分离培养或通过筛选的方法，由单细胞增殖形成的细胞群。4.干细胞是一类具有自我更新和分化潜能的细胞。干细胞的增殖特性为缓慢性和自稳性。5.培养细胞的生长特点为贴附、接触克制和密度克制。6.植物细胞培养的原理是基于动物细胞的全能性。7.植物细胞悬浮培养的方法为分批培养法、连续培养法和半连续培养。8.植物组织培养中培养材料的消毒过程中，消毒的基本原则是既要杀死附着其上的微生物又不损伤材

34、料。9.细胞生长测定的一般方法为：细胞计数、测定细胞密实体积、细胞鲜重或干重。10.体外培养的细胞根据其生长方式重要分为贴附型细胞和非贴附型细胞。11.人工种子的组分涉及胚状体、人工胚乳和人工种皮。12.细胞融合重要通过了两原生质体或细胞互相靠近、细胞桥形成、胞质渗透、细胞核融合几个环节。其中细胞桥形成是最关键的一步。13.花粉单倍体植株的鉴定方法有形态鉴定、细胞学鉴定、杂交鉴定、分子标记鉴定。14.胚胎工程重要是对哺乳类动物的胚胎进行某种人为的工程技术操作，然后让它继续发育，获得人们所需要的成体动物。15.人工诱导单倍体形成的方法涉及：远缘杂交、延迟授粉、核置换、射线照射、花药培养等。二、单

35、项选择题（每题1分，共10分）1.人参皂甙粉是人参中重要的药用成分，以前只能从人参中提取产量极低，因而价格昂贵。目前人参皂甙粉可以通过下列哪项技术迅速大量获取（B）A基因工程B植物组织培养C植物体细胞杂交D发酵工程2.下列有关动物细胞培养的叙述不对的的是（C）A通过动物细胞培养可获得大量的细胞分泌蛋白B动物细胞培养前要用胰蛋白酶解决，以使细胞分散C细胞癌变都发生于原代培养过程中D目前使用的或冷冻保存的正常细胞通常为10代以内的，以保持其正常核型3.尽管各种合成培养基给动物细胞培养带来极大方便，但许多实验表白，单纯使用合成培养基细胞的贴壁增殖效果经常不抱负。因此，在使用时通常仍然需要加入一定量的

36、(C)A平衡盐溶液B.琼脂糖C.动物血清D.甘露醇4.制备人工种子的关键是控制(A)A.胚状体的同步发育B.人工种皮的同步发育C.胚状体的单独发育D.人工种皮的单独发育5.细胞融合中使用（C）方法可以在显微镜下直接定向诱导细胞融合。A.仙台病毒法B.PEG诱导C.电融合诱导法D.高Ca+和pH诱导法2.下列有关动物细胞培养的叙述不对的的是（C）A通过动物细胞培养可获得大量的细胞分泌蛋白B动物细胞培养前要用胰蛋白酶解决，以使细胞分散C细胞癌变都发生于原代培养过程中D目前使用的或冷冻保存的正常细胞通常为10代以内的，以保持其正常核型3.尽管各种合成培养基给动物细胞培养带来极大方便，但许多实验表白，

37、单纯使用合成培养基细胞的贴壁增殖效果经常不抱负。因此，在使用时通常仍然需要加入一定量的(C)A平衡盐溶液B.琼脂糖C.动物血清D.甘露醇4.制备人工种子的关键是控制(A)A.胚状体的同步发育B.人工种皮的同步发育C.胚状体的单独发育D.人工种皮的单独发育5.细胞融合中使用（C）方法可以在显微镜下直接定向诱导细胞融合。A.仙台病毒法B.PEG诱导C.电融合诱导法D.高Ca+和pH诱导法6.中胚层来源的细胞在体外培养时一般表现为哪种形态（A）A.成纤维细胞型细胞B.多形型细胞C.上皮型细胞D.游走型细胞7.在每一代贴附生长细胞的生长过程中,哪一个时期的细胞数随时间变化成倍增长,活力最佳,最适合进行

38、实验研究（D）A. 稳定期B.衰亡期C.潜伏期D.对数生长期8. 以下哪种方法或技术适合进行动物细胞的大规模培养？（D）A.悬滴培养法B.培养瓶培养法C.旋转管培养法D.多孔载体培养技术9.单克隆抗体制备选择亲本时应选择（A）A. 骨髓瘤细胞系和免疫动物属于同一品系B.骨髓瘤细胞系和免疫动物属于不同品系C.B. B淋巴细胞和骨髓瘤属细胞属于不同品系D.B淋巴细胞与骨髓瘤细胞无亲缘关系10.下列关于哺乳动物胚胎发育和胚胎工程的叙述，对的的是（D）A卵裂期胚胎中细胞数目和有机物总量在不断增长B胚胎分割时需将原肠胚的内细胞团均等分割C胚胎干细胞具有细胞核大、核仁小和蛋白质合成旺盛等特点D胚胎干细胞是

39、一类未分化细胞，可从初期胚胎中分离获取三、多项选择（每题3份，共15分）1.由外植体或单个细胞形成愈伤组织一般要通过三个环节（ABD）A.启动期B.生长期C.分裂期D.分化期2.植物单细胞培养方法有（ABCD）A.平板培养法B.看护培养与饲养层培养法C.液体浅层静置培养法D.细胞悬浮培养法3.动物细胞培养室，无论细胞种类和供体的年龄如何，在细胞的全生长过程中大体都要通过三个重要阶段（ABC）A.原代培养期B.传代期C.衰退期D.稳定期4.干细胞从所具有的分化功能上分为（ABC）A.单能干细胞B.多能干细胞C.全能干细胞D.胚胎干细胞5.动物多倍体育种的方法有（ABC）A.温度休克法B.水静压法

40、C.细胞松弛素BD.秋水仙素四、简答题(共35分)1.二级生物安全合用于解决什么材料，具体规定有哪些（8分）答：合用于：（1）来自于来自于灵长类动物的材料和细胞系(2)接触过灵长类的病毒或被其转化了的细胞系(3)具有支原体的细胞系。规定：（1）所有也许产气愤溶胶的操作都应使用垂直层流生物安全小室；（2）所有污染物都应放入装满蒸馏水的防漏的不锈钢桶中；（3）大的塑料器皿盖紧后放入高压消毒袋中进行高压消毒；（4）在解决或冲洗用过的器皿前，应先进行高压消毒；（5）进行操作时要带乳胶手套。2.原生质体分离的方法有哪些，各有何优缺陷（6分）答：（1）机械法优点：可避免酶制剂对原生质体的破坏。缺陷：获得完

41、整原生质体的数量少，使用此法的植物种类有限。（2）酶解法优点：可获得大量原生质体，条件温和，原生质体完整性好，几乎所有植物都可用此法。缺陷：影响原生质体的活力。3.植物组织培养的基本环节（6分）答：（1）培养材料的采集（2）培养材料的消毒（3）制备外植体（4）接种和培养（5）根的诱导（6）组织苗的练苗移栽4.细胞系和细胞株的鉴定指标及方法（8分）答：鉴定指标：（1）纯度：分析以何种细胞为主，所占比例为多少，混杂有哪些其他细胞。（2）细胞生物学特性：细胞形态、结构、染色体组型、生长曲线、分裂指数、倍增时间是否与来源细胞一致。（3）稳定性：传代过程中细胞学特性是否发生变化。（4）污染情况：检查是否

42、有微生物或其他细胞系的污染。鉴定方法：细胞形态学观测；绘制生长曲线，计算分裂指数；染色体组型和带型分析；同工酶谱检测4. 植物细胞固定化的方法及特点答：吸附法：运用固体吸附剂将细胞吸附在其表面而使细胞固定化的方法。包埋法：将细胞包埋在多孔载体内部而制成固定化细胞的方法。特点：（1）由于载体的保护作用，减小剪切力作用，提高细胞存活率和稳定性。（2）细胞束缚在一定空间内，不易聚集成团，促进代谢产物的分散。（3）可简便地在不同培养阶段更换不同的培养液。（4）固定化植物细胞可连续反复使用，可缩短生产周期，提高生产效率。（5）容易与培养液分离，有助于产品的分离纯化，提高产品的质量。五、综合分析题（15分

43、）植物单细胞培养的程序及各步中应注意的事项答：1.建立细胞株（1）材料准备a.拟定植物种类品种b.选择单细胞或愈伤组织或叶肉、下胚轴等c.借助酶解决：酶的种类、浓度、解决时间都对材料有一定影响（2）制备细胞悬浮液a.培养基成分筛选答：吸附法：运用固体吸附剂将细胞吸附在其表面而使细胞固定化的方法。包埋法：将细胞包埋在多孔载体内部而制成固定化细胞的方法。特点：（1）由于载体的保护作用，减小剪切力作用，提高细胞存活率和稳定性。（2）细胞束缚在一定空间内，不易聚集成团，促进代谢产物的分散。（3）可简便地在不同培养阶段更换不同的培养液。（4）固定化植物细胞可连续反复使用，可缩短生产周期，提高生产效率。（

44、5）容易与培养液分离，有助于产品的分离纯化，提高产品的质量。五、综合分析题（15分）植物单细胞培养的程序及各步中应注意的事项答：1.建立细胞株（1）材料准备a.拟定植物种类品种b.选择单细胞或愈伤组织或叶肉、下胚轴等c.借助酶解决：酶的种类、浓度、解决时间都对材料有一定影响（2）制备细胞悬浮液a.培养基成分筛选b.悬浮培养，振荡次数为8090次/minc.用200300目钢网过滤盒离心沉降2.选择细胞株平板筛选a.细胞起始密度（0.5-2.5）*105个/mlb.固体薄层培养基c.按目的反复进行测定3.扩大培养（或分化培养）（1）扩大培养（悬浮）（2）分化培养（固体）抗性分析（生化分析）4.鉴定分析（1）扩大培养：鉴定提取：多次反复测定（生化分析）（2）分化培养：植株再生鉴定遗传分析：抗性测定、生化分析、遗传分析