《中药制剂分析中新方法与新技术整理》由会员分享，可在线阅读，更多相关《中药制剂分析中新方法与新技术整理（26页珍藏版）》请在装配图网上搜索。
1、第十章 中药制剂分析中 新方法与新技术 1 现代色谱技术 顶空气相色谱法 （液上气相色谱法、 顶空分析法） 对样品 基质上方 的 气体成分 进行 GC 分析来测定这些组分在原样品中的含 量 顶空气相色谱的分类 静态顶空 GC 动态顶空 GC 1 现代色谱技术 顶空气相色谱法 主要特点 样品前处理简单 检测限低 可分析含量低、组成复杂的样品 适用于易挥发或易分解或无法直接进样分析的 液体或固体样品的分析 1 现代色谱技术 顶空气相色谱法 应用实例 静态顶空 GC(内标法 )测定血液中乙醇含量 对照品溶液的制备 将 10g/l的乙醇储备液稀释 10倍，精密吸取此 液 1ml置于 10ml顶空样品瓶
2、中，同时精密加 1ml内标溶液（ 0.25% 的正丙醇水溶液），迅速密封，即得。 样品制备 精密吸取 1ml充分混匀的血样转移至 10ml顶空样品瓶中， 同时精密加 1ml内标溶液（ 0.25%的正丙醇水溶液），迅速密封， 即得。 色谱条件 （略） 顶空分析条件 平衡温度为 50 ，平衡时间为 10分钟（快速搅拌下）， 阀、输送管及定量管温度为 80 ，加压为 13.8kPa，加压时间、充 样时间和压力平衡时间均为 0.15分钟，定量管为 1.0ml。 1 现代色谱技术 超高效液相色谱 （ UPLC， Ultra Performance Liquid Chromatography） 主要特点
3、固定相 双（三乙氧基硅）乙烷在硅胶中形成桥式乙基基团 颗粒粒度小，仅为 1.7m 耐压，颗粒度分布范围很窄 装柱 检测器 响应快 样品池 10mm的光程（与普通 HPLC相同）而体积只有 500nL （普通 HPLC的 20分之一） 优点 更高的分析速度，更好分离效果和更高的灵敏度，速度、灵敏 度及分离度，分别是 HPLC的 9倍、 1.7倍及 3倍 1 现代色谱技术 超临界流体色谱 （ SFC, supercritical fluid chromatography） 以超临界流体（低黏度、高密度以及较高的扩散 系数）作为流动相。 对 GC及 HPLC的检测器均可兼容使用 适用于分析 GC难以
4、处理的高沸点、不挥发性样品 分离速度较 HPLC，分离效果更好。 应用实例 超临界流体色谱法测定怀牛膝制剂中齐墩果酸的含量 1 现代色谱技术 色谱联用技术 多维色谱 如：二维薄层色谱等 气相色谱 -质谱联用技术 气相色谱 -红外光谱联用技术 液相色谱 -质谱联用技术 2 高效毛细管电泳 (HPCE,high performance capillary electrophoresis) 电泳 : 在电解质溶液中，位于电场中的带电离 子在电场力的作用下，以不同的速度向其所带 电荷相反的电极方向迁移的现象。 由于不同离子所带电荷及性质的不同，迁移速 率不同，可实现分离。 1937年 Tiselius
5、 (瑞典 ) 利用 自由溶液电泳 将人 血清提取的蛋白质混合液分离出白蛋白和 、 、 球蛋白 1981年 Jorgenson 和 Luckas 发展了 高效毛细 管电泳分离分析技术 (使用 75m内径石英毛细管 和采用了高达数千伏的电压 )， 2 高效毛细管电泳 各种电性离子在毛细管柱中的迁移速度为： + = 电渗流 + +ef 阳离子运动方向与电渗流一致 - = 电渗流 - -ef 阴离子运动方向与电渗流相反 0 = 电渗流 中性粒子运动方向与电渗流一致 可一次完成阳离子、阴离子、中性粒子的分离 分离原理 电场作用下，毛 细管柱中出现： 电泳现象和电渗 流现象 。 2 高效毛细管电泳 仪器装
6、置 电压： 0 30KV。 分离柱不涂敷任何 固定液， 紫外或激光诱导荧 光检测器 可检测到： 10-19 10-21mol/L 2 高效毛细管电泳 主要特点 优点 高分辨率：理论塔板数高达数百万块，甚至 数千万块。 高灵敏度：可检测出低至 10-21mol/L浓度的物 质。 高分析速度：可在 3分钟内分离 30种阴离子； 1.7分钟分离 19种阳离子 ;4分钟可分离 10种蛋 白质 . 试样用量少：仅需几 nL（ 10-9L）的试样 仪器简单，操作成本低：分析一个试样仅需 几毫升流动液 2 高效毛细管电泳 常见的毛细管电泳模式 毛细管区带电泳 (CZE) 毛细管胶束电动色谱 (MECC) （
7、胶束作为假固定相的电动色谱） 毛细管凝胶电泳 (CGE) （凝胶作为支持物，起分子筛的作用） 毛细管等电聚焦电泳 (CIEF) （用于蛋白质、多肽等两性物质的分离） 毛细管等速电泳 (CITP) 2 高效毛细管电泳 应用 离子分析 药物分析 手性化合物分析 氨基酸分析 核酸分析及 DNA测序 HPCE在 中药制剂分析中的应用 生物碱的测定、动物类药材的鉴别、指纹图谱 高效毛细管电泳法测定心舒口服液中腺苷、芦丁和 阿魏酸的含量 对照品溶液 （略） 供试品溶液的配制 取心舒口服液 10 mL，加热浓缩至约 1 mL， 加 60 %甲醇定容 10 mL， 冰箱放置过夜 ， 经 0. 45 mm 滤膜
8、滤过备用。 电泳条件 以熔融石英毛细管 ( 50 mm 66 . 5 cm， 有效分 离长度 58 cm) 为分离通道 ， 以 105 mmol/L硼砂液为运行缓冲 液 ， 压力进样 50 mpa， 6 s， 毛细管柱温度为 20 ， 运行电 压为 0 30 min : 24 kV， 30 60 min : 28 kV， 检测波长为 210 nm， 毛细管柱使用前以 0.1 mol/L 氢氧化钠溶液、注射 用水和运行缓冲液依次冲洗 5 ,5 ,8 min， 每次电泳后以运行 缓冲液冲洗 8 min 。在此条件下 ，同时测定 腺苷、芦丁和阿 魏酸的 含量 。 （隋印等 . 中国医院药学杂志 .
9、2005, 25(3):232-234） 3 原子吸收光谱 （ AAS,atom absorption spectrometry） 工作原理 1） 各种元素的原子结构和外层电子排布不同， 基态 第一激发态 : 跃迁吸收能量不同 具有特征性 2）各种元素的基态 第一激发态 最易发生，吸收最强，最灵敏线。特征谱线 (共振线 )。 3）利用待测元素的原子蒸气中基态原子与共振 线吸收之间的关系来定量分析。 3 原子吸收光谱 工作原理 3 原子吸收光谱 原子吸收光谱仪 锐线光源 空心阴 极灯 3 原子吸收光谱 原子吸收光谱仪 原子化系统 将试样中离子转变成原子蒸气。 原子化方法 火焰法 无火焰法 电热高
10、温石墨管，激光 冷原子化法 单色器（ 色散元件（棱镜、光栅），凹凸镜、狭缝等） 检测系统（ 光电池、光电倍增管、光敏晶体管 ） 3 原子吸收光谱 优缺点 优点 ：原子化程度高，试样用量少（ 1 100 L），可测固体及粘稠试样，灵敏 度高，检测限 10-12 g/L。 缺点 ：精密度差，测定速度慢，操作不 够简便，装置复杂。 4 中药指纹图谱 从整体上评价中药的内在质量 中药指纹图谱建立的原则 尽可能多的覆盖全貌 特征明显，专属性强，重现性好 方便操作与应用 4 中药指纹图谱 中药（化学）指纹图谱鉴别 标准图谱的建立 中药材的选择 选用经品种鉴定的 正品优质地道药材 ，确定图谱的特征参数。 另
11、收集 多产地 ，具充分代表性，符合药用规格的样品，对图 谱特征的重现性进行考查。随之收集一些 易混淆 或曾出现的 伪品 ，以所确定的特征若能加以区别和辨认，则更为理想。 实验样品的制备 可根据药材所含成分选定，尽可能考虑对不同成分的 兼容性 ， 通常用不同极性的溶剂 2 3种，制成供试品，供一组图谱综 合鉴定应用。 注意取样代表性与均匀性 。 4 中药指纹图谱 中药指纹图谱鉴别 标准图谱的建立 检测方法 现代光谱（红外光谱，紫外光谱） 色谱（气相色谱、薄层色谱、高效液相色谱、 毛细管电泳） 其它（ X光衍射） 4 中药指纹图谱 中药指纹图谱鉴别 指纹图谱的解析 研究指纹图谱中特征信号的归属 各
12、指纹图谱的相关性研究 直观比较 相对指数、重叠率、八强峰等量化数据 计算机辅助中药指纹图谱相似度计算软件 4 中药指纹图谱 酸醇提取液中紫外吸收成分 的 HPLC 分析（ =254 nm） 二甲亚砜提取液中可见吸收成 分的 HPLC 分析（ =451 nm） 体外培育牛黄与天然牛黄指纹图谱的比较研究 (丁岗等 . 中国天然药物 , 2004,2(5)309-312） 5 其他技术 用生物检定法来评价中药质量 例 1：用生化指标评价中药质量与药效相关性更 为密切，以 淀粉酶活力 比较测定鸡内金、 鸽内金、鹌鹑内金的比活力，提出了量化 数据。 例 2：利用大蒜提取物中大蒜辣素和大蒜新素具 有 抗菌作用 这一特点，用生物检定方法进 行检测，结果与气相色谱法测定结果一致。 5 其他技术 DNA分子遗传标记技术 DNA分子 -遗传信息的直接载体， 物种鉴别更为准确可靠 90年代， PCR (Polymorase Chain Reaction)技术，快速而灵敏地检 测 DNA多态性 近年来，基于 PCR的 RFLP、 RAPD、 SSR、 AFLP等检测 DNA多态性 的 分子标记技术（ DNA指纹技术）。 应用 ： 在药材鉴定方面 中药材地胆草与白花地胆草混淆品， 西红花及其混淆品和伪品川红花、莲须、玉米须、黄花菜 乌梢蛇及其混淆品、金钱白花蛇及其伪晶 牛鞭、驴鞭与梅鞭
中药制剂分析中新方法与新技术整理
