VEGF基因在骨缺损模型家兔骨修复中的表达动态分析

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1、VEGF基因在骨缺损模型家兔骨修复中的表达动态分析 目的动态分析骨缺损修复过程中血管内皮生长因子(VEGF)基因表达量与骨缺损修复时间的关系.方法取新西兰家兔30只，于右侧桡骨钻出直径为20mm的骨组织,制作骨缺损模型，钻取自体髂骨骨颗粒，并移植于右侧桡骨骨缺损区域.分别于术后3d、1周、2周、4周、6周、8周时处死动物取材，行逆转录聚合酶链反应（RTPCR），观察并分析骨缺损修复过程中VEGF基因表达量.结果术后第3日、1周、2周、4周、6周、8周时骨缺损区域VEGF基因的相对表达量分别为2.08， 1.00，0.88，3.40，1.71，1.17.结论VEGF基因在骨缺损修复过程中发挥重要

2、作用，它的表达量在术后3d及第4周时出现高峰.血管内皮生长因子；骨缺损；聚合酶链反应Dynamic quantification analysis of expression of VEGF gene in repairing ofbone defect of rabbit modelABSTRACT:OBJECTIVETo study the relationship between expression of vascular endothelial growth factor(VEGF) and time of reparing of bone defect.METHODS20mm st

3、andard bone defect modal was processed in the right middle radial shaft of rabbit in 30 New Zealand rabbits. The spongy bone was transplanted from ilium to repair right radius defect for 3 days, 1, 2, 4, 6, 8 weeks after operation.RESULTSThe experimintal group was 2.08 after 3 days,1.00 after 1 week

4、 and 0.88 after 2 weeks,3.40 after 4 weeks, 1.71 after 6 weeks, 1.17 after 8 weeks.CONCLUSIONThe VEGF gene pays an important role in reparing of bone defect, and its expression is high peak in 3d and 4 weeks after operation.Key words:vascular endothelial growth factor;bone defect;pdymerase chain rea

5、ction骨组织的愈合是骨折或骨缺损的修复过程，分为组织修复期、原始骨痂形成期、成熟骨板期及塑形期.骨折的愈合有多种生长因子参与，其中血管内皮生长因子(vascularendothelial grouth factor, VEGF)基因在骨的生长和发育、再生及修复等生理病理过程中起重要作用.本研究通过制作家兔骨缺损模型，对VEGF基因在骨修复中的表达进行了动态分析，探讨了骨缺损修复过程中VEGF基因表达量与修复时间的关系.1材料与方法1.1动物模型的制作实验动物取家兔(新西兰)30只，体重为2.02.5kg，由延边大学医学部实验动物科提供，雌雄不限.在无菌状态下用骨磨钻于家兔右侧桡骨处钻出直径

6、为20mm的骨组织,制作骨缺损模型,于髂骨钻取直径为1.02.0mm的骨颗粒，将其移植于右侧桡骨骨缺损区.术后肌肉注射给予0.1g/kg头孢唑啉钠,连续4d.分别于手术后3d、1周、2周、4周、6周及8周时处死动物,每次5只，剖取骨缺损区移植物标本,迅速置入液氮中，取出,研磨，用Trazol法提取mRNA构建扩增，备用.1.2方法PCR相关试剂为大连TAKARA公司产品.采用Real Time PCR法检测各组的基因相对表达量，将兔子骨Total RNA（大连大学提供）作为管家基因（GAPDH）的RNA标准品,以体外转录构建的RNA作为目的基因（VEGF）的RNA标准品，将家兔骨Total RNA(500ng)反转录获得的cDNA用EASY Dilution按10倍梯度稀释作为模板，进行Real Time PCR反应，绘制管家基因的标准曲线.将体外构建的VEGF目的基因RNA标准品反转录获得的cDNA用EASY Dilution按10倍梯度稀释作为模板.取1.1项下扩增样品进行PCR检测,分别与管家基因及目的基因标准曲线相比较，进行相对表达量分析.