HPLC法研究金黄膏的稳定性及其质控标准7400字

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1、HPLC法研究金黄膏的稳定性及其质控标准7400字 摘要 目的 探讨HPLC法测定金黄膏中小檗碱和巴马丁含量、稳定性与质控标准。 方法 通过色谱条件的优化，建立一种金黄膏测定方法，采用高效液相色谱法，色柱为：Apollo C18（250 mmx4.6 mm，5 μm），流动液相为乙腈-0.1%磷酸（二元梯度洗脱），检测波长346 nm，流速为1.0 mL/min，柱温为30，测定样品的精确度、准确度、稳定性、重现性及专属性特性。 结果 将金黄膏按照上述方式进行，并且根据色谱检测方式判断，盐酸小檗碱为2.04%，巴马丁为1.95%，具有较好的稳定性；盐酸小檗碱RSD为1.51%，巴马丁RS

2、D为2.03%。巴马丁平均回收率为98.8%，RSD为1.85%，盐酸小檗碱平均回收率为100.9%，RSD为2.5%。由此说明，盐酸小檗碱和巴马丁在两种不同的药物成分在24 h内稳定性相对较好，且该检测方法具有较好的重现性。 结论 HPLC测定法分析金黄膏中小檗碱和巴马丁含量及稳定性与质控标准效果理想，该方法准确、简便，重现性好，能够为制订质控标准提供依据，值得推广应用。关键词 HPLC测定法；金黄膏；小檗碱；巴马丁；稳定性；质控标准中图分类号 R914.1 文献标识码 A 文章编号 1673-7210（2016）08（c）-0133-04Abstract Objective To inve

3、stigate content and stability and quality control standard assays of berberine and golden cream palmatine by HPLC determination. Methods Through the optimization of the chromatographic conditions， a golden paste determination method established， high-performance liquid chromatography was used： Apoll

4、o C18 column （250 mmx4.6 mm， 5 μm）， liquid phase was acetonitrile-0.1% phosphoric acid （binary gradient elution）. The detection wavelength was 346 nm， velocity of flow was 1.0 mL/min. The column temperature was 30， determination of accuracy， accuracy， stability and reproducibility and specificity

5、 characteristics were detected. Results The golden cream was conducted in accordance with the above-described manner and judged in accordance with chromatographic detection mode， berberine was 2.04%， palmatine was 1.95%， with good stability； berberine hydrochloride RSD was 1.51%， palmatine RSD was 2

6、.03%. Average palmatine recovery was 98.8%， RSD was 1.85%， hydrochloric small firewood average recovery was 100.9%， RSD was 2.5%. It showed that berberine palmatine stability in two different pharmaceutical ingredient within 24 h was relatively good， and the detection method had good reproducibility

7、. Conclusion HPLC assay analysis of golden cream and palmatine content and stability and quality control standard of berberine is satisfactory， this method is accurate， simple， reproducible， and can provide the basis for the development of quality control standards， which should be widely applied.Ke

8、y words HPLC assay； Golden cream； Berberine； Palmatine； Stability； Quality control standards金黄膏出自明代陈实功编著的外科正宗1，主要由大黄、黄柏、姜黄、白芷、天花粉、天南星等组成，为我国2010年版中国药典（一部）收录的品种，具有消肿止痛、活血化瘀等功效，在疮疡肿痛、丹毒流注、跌打损伤等症中广为应用。南宁市中医医院药学部（以下简称我部;）自制的金黄膏，其制作工艺中除凡士林、冰片（研细）外，其余粉碎成细粉，过筛，混匀。取凡士林加热融化，加入上述细粉搅匀，放置，60左右加入冰片，搅匀，分装即得。金黄膏为黄

9、色软膏，气微香、味苦。中国药典2上规定了金黄膏中姜黄素的含量测定，但是临床上也有采用高效液相色谱（HPLC）测定散剂或贴膏剂中大黄成分、小檗碱或姜黄素的含量。本研究采用HPLC法测定金黄膏中小檗碱和巴马丁含量，研究其稳定性与质控标准。1 仪器与试剂1.1 仪器SSI PC2000 型高效液相色谱仪（美国科学系统公司），EZChrom Elite Client/Server 色谱工作站，AL104 电子天平（梅特勒-托利多仪器有限公司）。510二元汞，996二极管阵列检测器。使用智能药物检测仪。1.2 药品与试剂所有试剂均为AR级，水为蒸馏水，在实验前使用0.45 μm滤膜过滤。将甲醇溶液

10、作为金黄膏的对照物，由我部特制金黄膏作为此次实验的样品。小檗碱对照品（中国药品生物制品检定所，批号：110713-200911。巴马丁对照品（天津科曼斯特医药科技发展有限公司提供）。2 方法与结果2.1 色谱条件色谱柱：Apollo C18（4.6 mmx250 mm，5 μm），流动相：A相为乙腈，B相为0.1%磷酸水溶液，检测过程中采用梯度洗脱程序进行。见表1。控制流速为1.0 mL/min，检测波长为346 nm，柱温控制在30，理论板数根据盐酸小檗碱峰计算不低于20 0003。2.2 方法学考察2.2.1 对照品溶液的配制 采用精密天平称取盐酸小檗碱和巴马丁对照品，分别采用乙腈配

11、制成浓度为0.290 mg/mL以及0.221 mg/mL的溶液作为储备溶液。准确吸取50、100、250、500、800、1000 μL溶液，将其放置在10 mL的容量瓶中，加入乙腈进行稀释，经过0.45 μm微孔滤膜4。2.2.2 线性关系 分别取上述对照品溶液5 μL注入液相色谱仪中，根据设置的色谱条件测定峰面积。以各进样量对峰面积进行线性回归分析，回归方程及线性范围见表2。2.2.3 测试样品制备 精确称取1.5 g金黄膏，放置在三角瓶中，加入30 mL石油醚，温度控制在6090下进行5 min超声处理。取出后静置，取上层溶液，加入20 mL石油醚，充分震荡均匀，静置

12、，吸取上层溶液，残渣挥干溶剂。采用25 mL甲醇以及0.1%磷酸水溶液根据11比例分次转移到容量瓶中，在超声下进行30 min处理，放冷，加入提取溶剂到刻度5-6。2.2.4 精密度试验 将测试溶液连续采样5次，得到巴马丁和盐酸小檗碱的峰面积，计算相应的标准偏差（RSD）。实验结果显示：盐酸小檗碱为2.04%，巴马丁为1.95%。由此说明仪器的精密度良好。2.2.5 稳定性试验 将获得的检测样品，分别在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10 min等时间段进行测试，从而将得到的峰面积进行统计。实验结果显示，盐酸小檗碱RSD为1.51%，巴马丁RSD为2.03%。由此说明：盐酸小檗碱和巴马丁在

13、24 h内稳定性相对较好。2.2.6 重现性试验 根据实验获得的供测试溶液的方法制备5份样品，分别测定并计算其含量。实验结果显示，巴马丁RSD为3.87%，盐酸小檗碱RSD含量为1.17%。由此看出两种成分含量采用HPCL方法检测重现性较好。2.2.7 专属性试验 除去黄柏，根据我部自拟处方称取金黄膏其余药物组成，制备金黄膏，采用同样的方法进行测定，实验结果显示：该方法测定盐酸小檗碱和巴马丁成分时有较好的专属性。2.2.8 加样回收率试验 精密称取6份1.5 g药膏，分别加入5 mg巴马丁和5 mg小檗碱，同上脱脂方法进行操作，然后采用50 mL浓度为0.1%的甲醇溶液转移到50 mL容量瓶中

14、，采用超声进行30 min处理，取出，放冷，然后加入提取溶液到相应的刻度，过膜，获得20 μL进样，结果显示：巴马丁平均回收率为98.8%，RSD为1.85%，盐酸小檗碱平均回收率为100.9%，RSD为2.5%。3 讨论金黄膏是临床上常用的中成药，该药物主要由大黄、黄柏、姜黄、白芷、天花粉及天南星等组成，多用于跌打损伤等。传统的方法虽然能满足临床治疗需要，但是患者治疗时由于不同的病症导致临床治疗针对性较差。我部生产的金黄膏使用传统的工艺，具有较好的疗效及较高的质量。金黄膏具有消肿止痛、活血化瘀的功效，是我部研发用于治疗跌打损伤、软组织损伤、骨折肿痛、红肿热痛等安全的外用中药制剂7。而患

15、者一旦出现跌打损伤，若不尽早进行治疗，会不利于预后，导致损伤出现溃烂、坏死的现象。在跌打损伤的治疗过程中，一般使用硫酸镁湿敷的方式进行处理，具有一定的临床疗效，但是效果没有预期的理想，会导致患者出现静脉血管硬化、结节性变化等一系列副作用8。金黄膏在治疗药物导致跌打损伤中能够起到很好效果。跌打损伤中镇痛药物的使用会导致出现炎症，其主要发病原因是由于消肿药物的化学效果较强，与患者的血液敏感程度以及体质的差异有关9。丙泊酚也叫依托泊酚，是一种新型的苯巴比妥类的消肿药物，发挥时间短，消肿效果较强，优点在于见效快、安全可靠，不会对患者的造血功能、血液循环、呼吸系统以及心脏等器官功能造成积蓄的影响，并且不

16、会通过肝脏进行分解，对人体的伤害小、药效快并且患者苏醒的时间也较短，不会导致患者出现释放现象，能够在伤口消肿中应用。但是丙泊酚在注射后有10%20%的患者感受到疼痛，即使是静脉速注也会感受到疼痛，这主要与水溶液呈酸性有一定的联系，目前主要将邴太芬作为溶剂，将pH值减弱到5.5，可以缓解注射带来的疼痛10。在手部的静脉或慢注时患者感受到疼痛的发生率较高，也有相关学说认为静脉壁中的上皮细胞在接触到丙泊酚后会出现一定的反应是导致患者感受到疼痛的重要原因。丙甲醚又称为肽芬甲醚，一种高效的消肿型药物，其优势在于见效快、药效发挥时间短、患者苏醒时间快，并且应用过程中出现的副作用较少，一般在引导消肿、辅助和

17、维持消肿中应用的较多11。但是在上述跌打损伤的止痛药剂应用过程中有可能使患者出现炎症。有相关文献指出12，金黄膏在早期跌打损伤中能够起到很好的消肿止痛作用，金黄膏中的黄柏具有清热解毒、消肿祛湿的作用；大黄具有泻火凉血、祛瘀解毒的功效。大黄中的蒽醌类成分以及黄柏中的小檗碱等多种成分都具有消肿化瘀的功效，并且能够减轻伤口的溢液以及促进药品的渗透13。金黄膏中的姜黄及白芷成分能够消除患者的淤积、畅通脉络、疏导患者体内阻滞的气血，辅助药物消炎。天南星、天花粉、姜黄等成分具有消肿止痛、活血祛瘀的功效；厚朴、陈皮、苍术等成分能够起到调理患者气血的作用，其中厚朴中含有大量的β-桉叶醇，具有抑制细菌

18、增殖的功效，能够减轻患者的血管肿胀。甘草具有清热解毒、调养气血的功效，能作为辅助成分使用，并且甘草中的甘草次酸具有消炎、抗过敏的效果。黄芩中含有大量的活性矿物质，能够起到强健固本、消除疲劳的效果14。冰片则具有清热散毒、明目退翳的药效。金黄膏将天南星、陈皮、姜黄、白芷、甘草、甘松、大黄、黄芩、黄柏、苍术、厚朴、天花粉、冰片加入制作，能够达到祛火化瘀、止痛消肿的作用。同时将药品做成膏样，能够加强药物对皮肤的渗透性，同时起到呵护皮肤、保护痂皮、有效预防伤口开裂，能够起到很好的止疼效果15。金黄膏在治疗跌打损伤中起到了见效快、药效高、操作简单以及不良反应较少，其应用价值大于硫酸镁，能够起到清热解毒、

19、祛瘀消肿的作用16。关节炎症是一种由于β-溶血性链球菌感染而导致患者的皮肤以及皮下组织、淋巴结及周围结构发炎的一种常见疾病，其特征在于患者发炎部位的皮肤会呈现红肿，并感觉到发热、疼痛，全身无力等相关症状，在身体的各个部位都会出现关节炎症，一般在手臂、腿部、头皮以及腹部等部位17。关节炎症的发病原因主要是由于真皮细胞出现病变而产生水肿，真皮中有脓性白细胞浸润，可在皮下组织中出现。关节炎症若不尽早进行处理会引起患者的淋巴结感染，导致淋巴堵塞，使得患者的血液循环受到影响而产生象皮腿的现象，严重情况可能导致患者出现链球菌中毒性休克综合征，需要对此尽快的处理。临床中一般使用擦拭硫酸镁的方式进行

20、治疗，但是在临床应用中会反复出现、不能够有效退肿，是导致关节炎症复发的主要原因，其中最关键的是关节炎症复发可能使得病菌炎症转化为慢性炎症以及亚急性炎症18。在中医对关节炎症的看法是患者体内的火毒旺盛、风热、湿邪侵袭，在长期热毒堆积的影响下在皮肤中出现了反应，而造成患者的气血凝滞、经脉阻塞等。因此在关节炎症的治疗过程中，需要患者保持正常的生活饮食以及起居习惯，对于高热患者需要做好降温处理，若持续高烧需要服用退烧药物治疗。金黄膏具有消肿化瘀、活气固本的功效，其中金黄膏中的黄柏具有清热燥湿、解毒祛湿的功效；大黄具有清热活血、祛瘀解毒的功效，金黄膏中的多种成分都具有消肿化瘀的功效，并且能够减轻皮肤红肿

21、的程度以及延长药效持续的时间。苍术具有消肿化瘀的药效，天南星能够对患者皮肤炎症起到消炎、消肿、镇痛止痛、化瘀消炎的作用，姜黄能够祛热解毒，消除患者体内的邪火。金黄膏具有清热解毒、活血化瘀、消肿止痛等药效，辅料甘草、黄芩、冰片具有消除皮肤炎症以及预防关节开裂的作用，具有较高的渗透性。金黄膏药效较高、药物发挥时间较快，且价格相对廉价，药物安全性也比较高，并且具有消肿化瘀、解毒止痛、降温消炎、促进关节愈合的疗效，并且其辅助成分能够很好地延长药品持续时间，利于患者的预后。在金黄膏治疗关节炎症的过程中，将金黄膏科学地涂抹在炎症出现的疼痛部位，并以纱布包裹，避免药膏沾到衣服等，能够消除关节炎症，同时还要注

22、意清洁，预防各种细菌侵入导致的病毒感染，例如脚气、皮疹、皮癣等病毒的感染，是控制关节炎症的重要措施。有相关文献指出19，使用金黄膏在治疗关节炎症的有效率能够达到86.0%，710 d内即可见效，证实了金黄膏外在治疗关节炎症的临床应用效果比较理想，具有药效高、治愈时间短、消炎止痛的优势，能够缩短患者的病程，值得在关节炎症治疗中推广使用。颈椎病是一种常见的关节炎并发症状，主要的临床表现为颈椎的边缘皮肤出现水肿、充血、隆起以及肿胀疼痛等，水肿是其主要特征，并且红肿周围的肿胀时间过长会导致颈椎淤血，一旦出现颈椎病的现象，严重影响了患者的预后情况，对患者的生活质量造成了影响，并且使得颈椎愈合的时间增长。

23、现代一些学者认为，颈椎病的产生机制是源自手术过程，患者的颈椎周围的组织受到创伤，使得组织周围静脉淋巴循环受到影响、周围血管血液阻滞导致血管堵塞而产生的。中医学中对于颈椎病出现的原因认为是颈椎周围的经脉受阻、气血不畅、湿热淤积导致的。金黄膏在这方面具有较好的临床应用效果，其制成的成分大多具有消肿化瘀的功效，其中大黄、白芷、黄柏等具有活血化瘀的功效；姜黄、甘草具有清热解毒的药效，厚朴、陈皮、天花粉等药物具有平喘、降气、下气消积等功效。天南星能够起到消炎、消肿、镇痛止痛、化瘀消炎的作用。金黄膏能够有效缓解颈椎病的症状，减轻患者的疼痛，清热解毒、祛湿消肿、活络经脉，能够在颈椎病的治疗中起到很好的治疗效

24、果20。文章主要应用HPLC测定法分析金黄膏的稳定性与质量，HPLC是一种有效的色谱检查方式，将液体作为流动物，并应用高压输液系统，将金黄膏制成溶剂后通过流动泵装入试剂后对其稳定性进行检测，是我国目前一种有效的分析技术。综上所述，我部运用传统的工艺，通过各种实验观察都得到了较好的临床疗效，并且在本次HPLC测定法中测得金黄膏中相应的成份含量，具有较好的稳定性。其制作成份都具有一定的活血化瘀、消炎消肿的效果，并且通过各种研究都取得了一定的临床疗效，值得推广使用。参考文献1 王银荣，王巧凡.金黄膏贴敷和神灯照射治疗痛风性关节炎20例疗效观察J.海南医学，2012，23（12）：76-77.2 张宵宵，黄香妹，王庆来，等.如意金黄膏联合盐酸氨基葡萄糖治疗膝骨性关节炎疗效观察J.中国基层医药，2012，19（1）：3-4.