《皮肌炎患者外周血CD4+T细胞中TGFβ1mRNA表达及意义》由会员分享，可在线阅读，更多相关《皮肌炎患者外周血CD4+T细胞中TGFβ1mRNA表达及意义（3页珍藏版）》请在装配图网上搜索。
1、皮肌炎患者外周血CD4+T细胞中TGF1mRNA表达及意义 目的： 检测活动期皮肌炎(dermatomyositis，DM)患者外周血CD4+T细胞中转化生长因子1（transforming growth factor1，TGF1）以及血清磷酸肌酸激酶（CK）含量。初步探讨CD4+T细胞TGF1在皮肌炎发病机制中的作用。方法： 收集12例活动期皮肌炎患者和12例健康对照者外周血，采用免疫磁珠分离法获得CD4+T细胞，通过RTPCR方法检测出各组TGF1表达水平。观察CD4+T细胞中TGF1表达与CK含量的相关性。结果： 活动期皮肌炎患者外周血CD4+T细胞中TGF1相对表达量为0.7510.1
2、07，显著高于健康对照0.4380.170P皮肌炎 CD4 T细胞 1 毕业AbstractObjective: To investigate the expression of transforming growth factor1 (TGF1)mRNA in CD4+ T cells of peripheral blood from the dermatomyositis (DM)patients in active stage, and explore the association with serum creatinkinase levels. Methods： CD4+T cell
3、s from peripheral blood were isolated by microbeads，and TGF1 mRNA was measured by reverse transcriptase polymerase chain reaction (RTPCR).Results： The expression of TGF1 was significantly higher in CD4+ T cells from the dermatomyositispatients than those from healthy control group (0.7510.107 vs 0.4
4、380.170，P毕业 Key wordsdermatomyositis；CD4+ T cells；TGF1 毕业皮肌炎(dermatomyositis，DM)是一组亚急性或慢性起病、免疫介导的自身免疫性疾病, 主要表现为对称性的肢体近端无力、肌肉疼痛、肌酶明显升高，同时伴有以眶周为中心的紫红色水肿性斑、Gottron氏征等特征性皮肤损害。组织病理学特点为肌组织内炎细胞浸润与肌纤维坏死1。其病因及发病机制目前尚不完全清楚, 但近年来在皮肌炎患者受累皮肤和肌肉活检中发现大量活化的CD4+T细胞浸润，CD4+/CD8+比值为2.52。转化生长因子1（transforming growth fact
5、or1，TGF1）是人体多种组织细胞的生长调控因子，对细胞外间质表达、基质降解、细胞增殖分化和细胞凋亡功能等有明确的作用。并且，TGF1还具有较强的免疫调节作用。本研究通过检测皮肌炎患者外周血CD4+T细胞TGF1 mRNA的表达，同时与患者血清CK含量进行相关性分析,探讨其在皮肌炎发病机制中的作用。 毕业1对象与方法 毕业1.1研究对象 毕业12例活动期皮肌炎患者选自2007年6月2008年2月江苏大学附属医院风湿科、皮肤科门诊及住院患者，其中男5例，女7例，年龄4065岁，平均51.6岁。病程2个月3年，平均2.15年。诊断依据为1975年Bohan的诊断标准3,剔除合并肿瘤及重叠综合征患
6、者。以临床表现、补体降低、肌酶、血沉升高以及肌电图改变综合判断疾病的活动性。检测前,患者至少3个月内未接受糖皮质激素、免疫抑制剂或具有免疫调节作用的药物治疗。选用单位体检正常者为健康对照组，其中男5例，女7例，年龄4166岁，平均51.2岁。 毕业1.2主要试剂与仪器毕业Trizol试剂(Invitrogen公司)；反转录试剂盒(Toyobo公司)；水平电泳槽(BioRad公司)；凝胶电泳图像分析仪(Syngene公司)；免疫磁珠(Miltenyi公司)。 毕业 1.3细胞分离毕业收集患者和健康对照者静脉血10 ml，肝素抗凝，通过淋巴细胞分离液分离外周血单个核细胞，再采用免疫磁珠分离出CD4
7、+T细胞，细胞纯度大于92%。 毕业 1.4RTPCR 毕业 按常规方法提取总RNA，严格按照反转录试剂盒说明书将总RNA反转录为cDNA后-20贮存备用。根据基因库中公布的基因序列，通过Primer Premier 5.0 软件设计PCR特异性引物，聚合酶链反应引物由上海生物工程有限公司合成，引物序列为：actin上游引物5CACGAAACTACCTTCAACTCC3，下游引物5CATACTCCTGCTTGCTGATC3，扩增产物262 bp；TGF1上游引物5GCTCCTGTGACAGCAGGGAT3，下游引物5 GGCAGAAGTTGGCATGGTAG3，扩增产物303 bp。PCR扩增
8、条件：94预变性5 min，94变性30 s，56（actin）或54（ TGF1 ）退火，72 45 s，共30个循环，72延伸7 min。 毕业1.5PCR产物分析及半定量计算 毕业PCR扩增产物在1.2%琼脂糖凝胶上电泳，计算CD4+T细胞TGF1和actin条带密度比值（TGF1/actin）作为TGF1的相对表达强度。 毕业 1.6统计学分析 毕业所有数据采用SPSS11.0软件进行统计分析。计量资料以均数标准差表示，两组间比较采用t检验，以P2结果 毕业 2.1活动性皮肌炎患者CD4+T细胞TGF1 mRNA表达水平检测结果 毕业健康对照（n=12）和皮肌炎患者（n=12）CD4+T细胞TGF1的相对表达强度分别为0.4380.170和0.7510.107，经检验t=5.38，P2.2活动期皮肌炎患者CD4+T细胞TGF1 mRNA表达水平与血清CK含量相关性分析毕业活动期皮肌炎患者CD4+T细胞与血清CK含量的相关系数为r=0.67，P
皮肌炎患者外周血CD4+T细胞中TGFβ1mRNA表达及意义
