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1、双料225mlO. 85%生理盐水 目的：稀释1： 10单料单料大肠杆菌检测使用试剂：0.85%生理盐水，乳糖胆盐发酵培 养基、伊红美蓝培养基、乳糖发酵 培养基、革兰氏染液、纯净水。试剂配置：0.85%生理盐水:0.85g的氯化钠溶 于100ml纯净水。配置好后，取225ml 于锥形瓶中，用棉塞和报纸将锥形瓶口 封好。乳糖胆盐发酵培养基:按照称药品 的瓶上的说明进行配置。有单双料之 分。例如:说明上为称取3.6g溶于100ml 水，此为单料；称取7.2g溶于100ml 水，此为双料。单双料配置好后，吸取 10ml装于带有小导管的试管中，3个试 管一组，单料2组，双料1组。伊红美蓝培养基:（其配
2、好后状态与 平板计数琼脂一致）按照称药品的瓶上 的说明进行配置。乳糖发酵培养基:按照称药品的瓶上的说明进行配置。配置好后，吸取3ml于有小导管的小试管中。注：乳糖胆盐发酵培养基、伊红美蓝培养基、乳糖发酵培养基，都要经过煮沸、高压灭菌1 21摄氏度后方能使用。检验步骤：步骤一：如右图添加合适样品进入培养基， 置于362C环境下培养24小时， 如果小导管中未出现气泡，可以判 定大肠杆菌为阴性；如果发现气 泡，执行第二步骤-伊红美蓝琼脂 平板。步骤二:伊红美蓝琼脂平板将伊红美蓝琼脂煮沸使其呈液状，倒入培养皿1中（步骤一种有一个管产气就做一个，几个管产气就做几个）。用接种环从步骤一中产气的试管里取一环
3、，再伊红美蓝琼脂冷凝后的光滑表面以Z字形涂划（不能划破伊红美蓝琼脂表面，划法如图2）区域，在酒精灯上烧后冷却了从区域处拉过去（图中粗实线）涂划区域，同法涂划区域。而后置于362C环境下培养24小时，不产生菌落报告大肠杆菌为阴性；产生菌落同时继续步骤三-复发酵（乳糖发酵培养基）和步骤四-革兰氏染色。步骤三：复发酵一一从伊红美蓝琼脂上用接种环将菌接种到乳糖发酵培养基中，置于362C环境下培养24小时，不产气，大肠杆菌为阴性。产气，结合革兰氏染色来确定结果。步骤四：革兰氏染色载玻片一 1滴生理盐水一伊红美蓝琼脂上将菌接种到盐水中一涂匀一酒精灯上烤十一革兰氏染液1、2、3、4依次滴上（每一种染液第一滴，一分钟后用水冲掉烤十再滴第二种染液）一滴上一滴香柏油一用显微镜观察菌颜色。步骤五：步骤三、步骤四综合确定结果三产气+四为红=阳性（标记为1），三不产气+四为紫=阴性（标记为0）。查表确定大肠杆菌的MPN。
大肠杆菌检测
