药物分析课件芳酸PPT课件

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1、第六章第六章 芳酸及其酯类药物的分析芳酸及其酯类药物的分析第一节第一节典型药物的分类与性质典型药物的分类与性质第二节第二节鉴别试验鉴别试验第三节第三节特殊杂质检查特殊杂质检查第四节第四节含量测定（含量测定（容量分析、光谱、色谱）容量分析、光谱、色谱）第五节第五节体内药物分析体内药物分析水杨酸类水杨酸类苯甲酸类苯甲酸类其他芳酸类其他芳酸类（根据生产工艺等产（根据生产工艺等产生的不同杂质的检查）生的不同杂质的检查）芳酸芳酸酯类酯类 第一节第一节 典型药物分类与理化性质典型药物分类与理化性质分子结构特点：分子结构特点：苯环苯环 +羧基羧基 or羧基所成的羧基所成的酯酯 共性：共性：UV吸收吸收 酸性

2、酸性 碱碱 盐盐 易水解易水解 特性：特性：具有不同取代基具有不同取代基分类：分类：大多数药物羧基与苯环相连大多数药物羧基与苯环相连 羧基为磺酸基或通过烃氧基羧基为磺酸基或通过烃氧基 与苯环相连与苯环相连水杨酸类水杨酸类苯甲酸类苯甲酸类其它芳酸及其酯类其它芳酸及其酯类芳酸芳酸及酯及酯芳酸芳酸酯类酯类一、苯甲酸类一、苯甲酸类（一）典型药物（一）典型药物苯甲酸及其钠盐苯甲酸及其钠盐（benzoic acid andSodium benzoate）消毒、防腐 丙磺舒丙磺舒（probenecid）抗痛风甲芬那酸甲芬那酸(mefenamic acid)消炎镇痛COOH(CH3CH2CH2)2NSO2CO

3、OH(Na)苯甲苯甲酸类酸类（二）主要理化性质（二）主要理化性质熔点熔点 固体固体allUV、IR 特征吸收光谱特征吸收光谱 苯环、特征官能团苯环、特征官能团鉴别鉴别 分解产物分解产物(可以利用可以利用)含量测定含量测定芳酸芳酸 中性醇中性醇 碱滴定碱滴定 芳酸酯芳酸酯 水解水解过量碱液过量碱液 酸回滴酸回滴 芳酸碱金属盐芳酸碱金属盐 易溶于水易溶于水 游离酸不溶于水游离酸不溶于水 双相滴定法双相滴定法二、水杨酸类二、水杨酸类（一）典型药物（一）典型药物水杨酸水杨酸 阿司匹林阿司匹林（salicylic acid）（aspirin）消毒防腐解热,消炎,镇痛对氨基水杨酸钠对氨基水杨酸钠（sodi

4、um aminosalicylate）抗结核双水杨酯双水杨酯 （salsalate）消炎镇痛、解热、抗风湿贝诺酯贝诺酯（benorilate）消炎、镇痛、解热COOHOHCOOHOCOCH3芳酸芳酸酯类酯类COONaOHNH2COOHOHOCOCOOOCOCH3NHCOCH3COOHOCOCH3游离羧基游离羧基阿司匹林阿司匹林酯键酯键苯环苯环COOHOCOCH3阿司匹林阿司匹林水解后才发水解后才发生三氯化铁生三氯化铁反应反应水解后生成水解后生成水杨酸水杨酸杂质杂质H直接中和法直接中和法两步滴定法两步滴定法水杨水杨酸酸(二）二）主要理化性质主要理化性质固体固体熔点（均为固体）熔点（均为固体）酸性

5、酸性水解与分解反应水解与分解反应紫外与红外特征吸收光谱紫外与红外特征吸收光谱（苯环）（苯环）（官能团）（官能团）水杨水杨酸酸酸性酸性1.pKa 36 中等强度酸或弱酸中等强度酸或弱酸 酚类、碳酸酚类、碳酸 盐酸、硫酸盐酸、硫酸 pKa6.3 水杨酸水杨酸 pKa2.95 阿司匹林阿司匹林 pKa 3.492.酸性强度影响因素酸性强度影响因素取代基取代基 卤素、硝基、羟基、羧基卤素、硝基、羟基、羧基 吸电子吸电子 酸性酸性 甲基、氨基甲基、氨基 斥电子斥电子 酸性酸性 邻位取代邻位效应（尤其羟基）邻位取代邻位效应（尤其羟基）酸性酸性 取代基取代基 电子云密度电子云密度 吸电子吸电子OOHOH易解

6、离易解离酸性酸性水杨水杨酸酸水解和分解水解和分解生产和贮藏过程引入，水解产物生产和贮藏过程引入，水解产物不同的药物检查不同的杂质不同的药物检查不同的杂质紫外与紫外与红外特征吸收光谱红外特征吸收光谱具有芳环共轭体系具有芳环共轭体系，羧基，特征官能团羧基，特征官能团 max，E，Ch.P(2005)药物药物 鉴别；含量测定鉴别；含量测定用用IR鉴别鉴别芳酸及其酯类药物紫外吸收特征芳酸及其酯类药物紫外吸收特征注意：溶剂注意：溶剂?浓度浓度?max?E?其他其他芳酸芳酸三、其他芳酸类三、其他芳酸类（一）典型药物（一）典型药物氯贝丁酯氯贝丁酯（clofibrate）降血脂 布洛芬布洛芬(ibuprofe

7、n)消炎、镇痛ClCCH3CH3COOC2H5OCHCH2CHCH3CH3CH3COOH其他其他芳酸芳酸（二）主要理化性质（二）主要理化性质氯贝丁酯氯贝丁酯性状：性状：澄清油状液体澄清油状液体溶解度：溶解度：易溶于易溶于:乙醇，乙醇，丙酮，氯仿，乙醚丙酮，氯仿，乙醚几乎不溶于水几乎不溶于水化学性质：化学性质：酯键水解酯键水解含量测定：含量测定：定量过量定量过量 NaOH，热水解，热水解，剩余剩余NaOH用用HCl滴定滴定鉴别：鉴别：苯环，特殊官能苯环，特殊官能团，团，UV，IR 布洛芬布洛芬 固体固体(书中水杨酸、苯甲酸固体书中水杨酸、苯甲酸固体)易溶于易溶于:乙醇，丙酮，乙醇，丙酮，氯仿，氯

8、仿，乙醚乙醚 几乎不溶于水几乎不溶于水 在在NaOH 或或Na2CO3中易溶中易溶 羧酸羧酸 溶于中性醇后溶于中性醇后 用用 NaOH 直接滴定直接滴定 苯环，特殊官能团，苯环，特殊官能团，UV，IR芳酸芳酸鉴别鉴别 第二节第二节 鉴别试验鉴别试验理化性质理化性质 鉴别鉴别 显色反应、沉淀反应，吸收光谱显色反应、沉淀反应，吸收光谱与铁盐的反应与铁盐的反应重氮化重氮化偶合反应偶合反应氧化反应氧化反应水解反应水解反应分解产物的反应分解产物的反应紫外吸收光谱法紫外吸收光谱法红外吸收光谱法红外吸收光谱法薄层色谱法薄层色谱法高效液相色谱法高效液相色谱法芳酸芳酸鉴别鉴别 一、与铁盐的反应一、与铁盐的反应有

9、酚羟基或水解后能产生酚羟基的药物酚羟基酚羟基 中中弱酸性弱酸性性性 配位化合物配位化合物 反应灵敏反应灵敏 稀溶液即可稀溶液即可 FeCl3 试液试液 pH46 紫堇色紫堇色 强酸配位化合物分解铁盐铁盐鉴别鉴别1、水杨酸及其盐的鉴别反应、水杨酸及其盐的鉴别反应中性或弱酸性条件中性或弱酸性条件6 +4FeCl3 Fe Fe+12HCl 2 3 (水杨酸水杨酸)（2005）紫堇色配合物紫堇色配合物反应在中性或弱酸性溶液进行反应在中性或弱酸性溶液进行COOHOHCOO-O-铁盐铁盐鉴别鉴别 阿司匹林的鉴别反应阿司匹林的鉴别反应 加热水解加热水解 +H2O +CH3COOH 阿司匹林阿司匹林 水杨酸水

10、杨酸（2005）FeCl3 Fe Fe +12HCl 2 3 紫堇色紫堇色 贝诺酯贝诺酯 NaOH HCl 调弱酸性调弱酸性 FeCl3水杨酸、阿司匹林、对氨基水杨酸钠、双水杨酯、贝诺酯水杨酸、阿司匹林、对氨基水杨酸钠、双水杨酯、贝诺酯COOHOCOCH3COOHOHCOO-O-铁盐铁盐鉴别鉴别2、苯甲酸及其钠盐的鉴别、苯甲酸及其钠盐的鉴别 碱性水溶液碱性水溶液or中性水溶液中性水溶液 FeCl3 碱式苯甲酸铁盐（碱式苯甲酸铁盐（赭色沉淀赭色沉淀）7 +3FeCl3 +2OH-Fe3（）6（OH）2 7 NaCl+2Cl-赭色沉淀赭色沉淀反应碱性或中性反应碱性或中性COONaCOOCOO铁盐铁

11、盐鉴别鉴别3、丙磺舒的反应、丙磺舒的反应丙磺舒丙磺舒 NaOH试液试液 钠盐钠盐 FeCl3 米黄色沉淀米黄色沉淀COOH(CH3CH2CH2)2NSO23Fe水杨酸水杨酸阿司匹林阿司匹林紫堇色紫堇色配合物配合物贝诺酯贝诺酯苯甲酸及其钠盐苯甲酸及其钠盐赭色沉淀赭色沉淀丙磺舒丙磺舒米黄色沉淀米黄色沉淀Fe 3+，不同条件，不同条件重氮重氮鉴别鉴别具有芳伯氨基或潜在芳伯氨基的药物具有芳伯氨基或潜在芳伯氨基的药物 含芳伯氨基含芳伯氨基 供试供试 重氮化重氮化偶合反应偶合反应 水解水解 芳伯氨基芳伯氨基（贝诺酯）酸性酸性溶液溶液亚硝亚硝酸钠酸钠重氮盐重氮盐橙黄橙黄色色猩红猩红色沉淀色沉淀碱性碱性 萘酚

12、萘酚(临用现配）临用现配）二、重氮化偶合反应二、重氮化偶合反应芳香第一胺类鉴别反应芳香第一胺类鉴别反应芳酸芳酸鉴别鉴别三、氧化反应三、氧化反应甲芬那酸甲芬那酸Ch.P(2005Ch.P(2005版）版）【鉴别鉴别】(1)(1)取本品约取本品约5mg5mg，加硫酸，加硫酸2ml2ml使溶解，加使溶解，加0.5%0.5%重铬酸钾溶液，即显重铬酸钾溶液，即显深蓝色深蓝色，随即变为，随即变为棕绿色棕绿色。(2)(2)取本品约取本品约25mg25mg，加，加氯仿氯仿15ml15ml溶解后，置紫外光灯溶解后，置紫外光灯(254nm)(254nm)下检视，显强烈绿色荧光。下检视，显强烈绿色荧光。（(JP13

13、)(JP13)法，甲芬那酸溶于硫酸后，加热，则溶液呈法，甲芬那酸溶于硫酸后，加热，则溶液呈黄色，并产生绿色荧光。）黄色，并产生绿色荧光。）芳酸芳酸鉴别鉴别四、水解反应四、水解反应RCOOR+H2O RCOOH+ROH 性质性质 鉴别鉴别 RCOOR+H2O NaOH RCOOH+ROHRCOOH+NaOH RCOONa+H2O过量碱，水解完全过量碱，水解完全芳酸芳酸水解水解1、阿司匹林（水杨酸乙酯）、阿司匹林（水杨酸乙酯）（2005）水杨酸钠水杨酸钠 水杨酸水杨酸（白色）（白色）mp 156161阿司匹林阿司匹林 醋酸钠醋酸钠 CH3COOH（醋酸臭味）（醋酸臭味）乙醇、硫酸乙醇、硫酸 H+C

14、H3COOC2H5（乙酸乙酯香味乙酸乙酯香味）Na2CO3 试液试液 过量过量稀硫酸稀硫酸H2SO4芳酸芳酸水解水解2、双水杨酯水解、双水杨酯水解双水杨酯双水杨酯 完全水解完全水解 白色白色 溶解溶解COOHOHOCOCOOHOHNaOH煮沸煮沸稀稀HCl醋酸胺醋酸胺芳酸芳酸分解分解五、分解产物的反应五、分解产物的反应1.苯甲酸盐的鉴别苯甲酸盐的鉴别H2SO4 (不炭化)2.含硫药物分解后鉴别含硫药物分解后鉴别 丙磺舒丙磺舒脱羧脱羧分解，分解，NaOH，熔融，熔融 Na2SO3硝酸硝酸氧化氧化 Na2SO42-Pb 2+Ba2+沉淀沉淀 苯甲酸(试管内壁白色升华物)COOH(CH3CH2CH2

15、)2NSO2芳酸芳酸鉴别鉴别 六、紫外吸收光谱法六、紫外吸收光谱法定性定性 较差较差通常利用通常利用UV吸收光谱的特点与特征与其他方法配合吸收光谱的特点与特征与其他方法配合（一）利用（一）利用UV特征吸收法特征吸收法【Ch.P（2005）】max，A，E11cm，（溶剂，酸、碱条件）（溶剂，酸、碱条件）1、丙磺舒、丙磺舒 2、甲芬那酸、甲芬那酸 3、二氟尼柳、二氟尼柳4、贝诺酯、贝诺酯 5、布洛芬、布洛芬 6、氯贝丁酯、氯贝丁酯 绝大多数：绝大多数：max E 布洛芬布洛芬 max,min,shA峰位，峰形峰位，峰形鉴别鉴别芳酸芳酸鉴别鉴别甲芬那酸甲芬那酸【Ch.P（2005）】取本品，加取本

16、品，加1mol/L盐酸溶液甲盐酸溶液甲醇（醇（1：99）混和液，制成每）混和液，制成每1ml中含中含20ug的溶液，照的溶液，照UVVis法测定，在法测定，在279nm与与350nm的波长处有最大吸收，的波长处有最大吸收，其其A分别为分别为0.690.74，与，与0.560.60。芳酸芳酸鉴别鉴别（二）利用双波长吸收度（二）利用双波长吸收度比比法法对氨基水杨酸钠对氨基水杨酸钠取对氨基水杨酸钠取对氨基水杨酸钠250mg，加，加1mol/L氢氧氢氧化钠溶液化钠溶液3ml，溶解后转移至，溶解后转移至 500ml量瓶中，用量瓶中，用水稀释至刻度，混匀。精密吸取水稀释至刻度，混匀。精密吸取5ml溶液置于

17、内溶液置于内含含 pH7磷酸盐缓冲液磷酸盐缓冲液12.5ml的的250ml量瓶中，用量瓶中，用水稀释至刻度，混匀，即为水稀释至刻度，混匀，即为供试品溶液供试品溶液。另配。另配制相同浓度缓冲溶液的制相同浓度缓冲溶液的空白对照液空白对照液。于。于2652nm和和2992nm波长处测定吸收度波长处测定吸收度A265和和A299，规定，规定A265/A299的比值应在的比值应在1.501.56之间。之间。芳酸芳酸鉴别鉴别七、红外分光光度法七、红外分光光度法中国药典有机原料药多采用中国药典有机原料药多采用IR 分子振动、转动能级跃迁分子振动、转动能级跃迁 专属性强专属性强Ch.P(2005版版)水杨酸药

18、物有水杨酸药物有IR作为鉴别作为鉴别苯甲酸药物苯甲酸药物都有都有IR作为鉴别作为鉴别其他芳酸类药物其他芳酸类药物都有都有IR作为鉴别作为鉴别Ch.P(2005)均采用标准图谱对照法均采用标准图谱对照法药品红外光谱集药品红外光谱集八、薄层色谱法八、薄层色谱法九、高效液相色谱法九、高效液相色谱法 HPLC 如果药物含量测定项采用的是如果药物含量测定项采用的是HPLC方方法，可以直接用含量测定的色谱图直接鉴法，可以直接用含量测定的色谱图直接鉴别。别。保留时间保留时间（供试品主峰）（供试品主峰）保留时间保留时间（对照品主峰）（对照品主峰）芳酸芳酸酯类酯类 第三节第三节 特殊杂质检查特殊杂质检查阿司匹林

19、中特殊杂质的检查阿司匹林中特殊杂质的检查对氨基水杨酸钠中特殊杂质的检查对氨基水杨酸钠中特殊杂质的检查二氟尼柳中有关杂质的检查二氟尼柳中有关杂质的检查甲芬那酸中特殊杂质的检查甲芬那酸中特殊杂质的检查氯贝丁酯的特殊杂质检查氯贝丁酯的特殊杂质检查一、阿司匹林中的特殊杂质检查一、阿司匹林中的特殊杂质检查合成工艺合成工艺特殊杂质特殊杂质检查项目检查项目 溶液的澄清度溶液的澄清度 水杨酸水杨酸 易炭化物易炭化物COOHOCOCH3阿司阿司匹林匹林（一）合成工艺（一）合成工艺 CO2 H+水杨酸水杨酸 羧基化羧基化苯酚钠苯酚钠 乙酰化乙酰化 (CH3CO)2O +CH3COOHONaCOONaONaCOOH

20、OHCOOHOCOCH3阿司匹林阿司匹林阿司匹阿司匹林杂质林杂质（二）检查（二）检查1、溶液的澄清度、溶液的澄清度2、水杨酸、水杨酸:限量限量3、易炭化物、易炭化物:检查低分子有机杂质检查低分子有机杂质炭化炭化浓浓H2SO4与对照液比色与对照液比色 限量检查限量检查(CoCl2+K2Cr2O7+CuSO4)阿司匹阿司匹林杂质林杂质1、溶液的澄清度、溶液的澄清度:检查碳酸钠试液中不溶物检查碳酸钠试液中不溶物 控制杂质的量控制杂质的量特殊杂质特殊杂质 苯酚苯酚 醋酸苯酯醋酸苯酯 水杨酸苯酯水杨酸苯酯 乙酰水杨酸苯酯乙酰水杨酸苯酯 （+(CH3CO)2O）(+)(+)不溶于不溶于Na2CO3试液试液

21、溶液澄清度溶液澄清度阿司匹林溶解阿司匹林溶解OHOCOCH3OHCOOOCOCH3COO副反应产物副反应产物水杨酸脱羧水杨酸脱羧OHOHOHCOOHOHOCOCH3COOH阿司匹阿司匹林杂质林杂质2、水杨酸、水杨酸:水杨酸水杨酸阿司匹林阿司匹林 生产过程中生产过程中乙酰化乙酰化不完全不完全 贮藏过程中水解贮藏过程中水解 对人体有毒对人体有毒 酚羟基酚羟基 O 醌性有色物质醌性有色物质(淡黄、红棕、淡黄、红棕、深棕深棕）Aspirin 成品变色成品变色COOHOHCOOHOCOCH3阿司阿司匹林匹林水杨酸水杨酸 O O +或或COOHOHCOOHOHHOCOOHOOHOOHCOOHCOOHOOC

22、OOHOOHOCOOHHOCOOHOO+COOHO-阿司阿司匹林匹林检查检查：Aspirin 无酚羟基无酚羟基+Fe3+原理原理 Salicylic acid +Fe3+紫堇色紫堇色检查方法检查方法：（原料药原料药）本品本品0.1g 乙醇乙醇1ml 新制稀硫酸铁新制稀硫酸铁胺溶液胺溶液 与对照液比较与对照液比较,不得更深不得更深(对照对照,0.1g水水杨酸杨酸1000ml 取取1ml）%1.0%1001.010001.0游离水杨酸的限量%100供试品量杂质最大允许量杂质限量制剂中游离水杨酸的检查：阿司匹林片：0.3%；阿司匹林肠溶片：1.5%；阿司匹林栓：阿司匹林栓：1.0%HPLC 阿司匹林

23、肠溶胶囊：3.0%（HPLC）阿司匹林泡腾片：3.0%（HPLC）一般制剂不再检查原料药物项下的有关杂质一般制剂不再检查原料药物项下的有关杂质,但但Aspirin制剂过程易水解为水杨酸制剂过程易水解为水杨酸芳酸芳酸酯类酯类二、对氨基水杨酸钠中特殊杂质的检查二、对氨基水杨酸钠中特殊杂质的检查（一）（一）合成工艺与合成工艺与间氨基酚间氨基酚杂质的产生杂质的产生:原料原料 对氨基水杨酸钠脱羧对氨基水杨酸钠脱羧 CO2 O H2O 毒性毒性 二苯醌型化合物二苯醌型化合物 使药物变色使药物变色 限量控制限量控制 3,5,3,5四羟基联苯醌四羟基联苯醌（红棕色）（红棕色）NH2OHCOONaNH2OHOH

24、HONH2H2NOOOHHOOOHOOH O对氨对氨基水基水检查方法检查方法(二二)双相滴定法与原理双相滴定法与原理:中国药典中国药典利用对氨基水杨酸钠不溶于乙醚利用对氨基水杨酸钠不溶于乙醚间氨基酚易溶于乙醚间氨基酚易溶于乙醚 提取杂质后提取杂质后 用用HCl滴定滴定 一相一相 脱水乙醚提取脱水乙醚提取加入适量水加入适量水HCl滴定液滴定液（0.02mol/L），甲基橙指示剂），甲基橙指示剂生成盐酸盐生成盐酸盐 溶于溶于 水。水。空白校正，消耗的空白校正，消耗的HCl滴定液的体积滴定液的体积一相一相低于限量低于限量对氨基水杨酸钠中间氨基酚的限量检查对氨基水杨酸钠中间氨基酚的限量检查(三三)HP

25、LC法：法：美国药典（美国药典（29）USP（29）色谱条件色谱条件：十八烷基硅烷键合硅胶十八烷基硅烷键合硅胶 C18，10 m 色谱柱：色谱柱：250mm 4.6mm 流动相：流动相：NaH2PO4(0.05mol/L):Na2HPO4(0.05mol/L):CH3OH (含氢氧化四丁基铵含氢氧化四丁基铵1.9g)425 :425 :150 检测波长：检测波长：254nm 流速：流速：1.5ml/min对氨基酚间氨间氨基酚基酚色谱条件色谱条件贮备液配制：贮备液配制：对照、供试、内标溶液对照、供试、内标溶液流动相作溶剂流动相作溶剂 内标内标:磺胺溶液磺胺溶液(5g/ml)对照品溶液制备：对照品

26、溶液制备：内标内标+间氨基酚间氨基酚(12 g/ml)供试品溶液制备：供试品溶液制备：内标内标+对氨基水杨酸钠对氨基水杨酸钠(6.9mg/ml)系统适用性试验：系统适用性试验：n=6，RSD7%，R2.5，间氨基酚间氨基酚/内标内标=R=A间间/A内内测定方法：测定方法：20 l 进样进样计算：计算：讨论：讨论：反相离子对色谱反相离子对色谱 IPC分析有机离子分析有机离子芳酸芳酸四、甲芬那酸中特殊杂质的检查四、甲芬那酸中特殊杂质的检查（一）合成工艺（一）合成工艺以以 邻氯苯甲酸邻氯苯甲酸 2,3-二甲基苯胺二甲基苯胺Cu 催化缩合催化缩合甲芬那酸甲芬那酸甲芬甲芬那酸那酸（二）检查（二）检查“铜

27、盐铜盐”、“有关物质有关物质”1、“铜铜”检查法检查法供试品溶液、对照品溶液比较，供试品溶液、对照品溶液比较，铜含量限量为铜含量限量为0.001%原子吸收分光光度法原子吸收分光光度法（2005）】铜空心阴极灯为辐射光源，空气乙炔焰下，测铜空心阴极灯为辐射光源，空气乙炔焰下，测定定A 百万分之十百万分之十氯贝丁酯氯贝丁酯对氯酚对氯酚2、有关物质、有关物质高效液相色谱法高效液相色谱法(HPLC)色谱条件色谱条件：色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶 流动相：磷酸二氢流动相：磷酸二氢胺胺：乙腈：四氢呋喃：乙腈：四氢呋喃(40：46：14)检测波长：检测波长：254nm 测定法测定

28、法：供试品、对照品溶液进行比较供试品、对照品溶液进行比较氯贝氯贝丁酯丁酯Clofibrate 2-甲基甲基-2-（4-氯苯氧基）丙酸乙酯氯苯氧基）丙酸乙酯 化学名化学名 异名异名：安妥明、氯苯丁酯：安妥明、氯苯丁酯五、氯贝丁酯中特殊杂质的检查五、氯贝丁酯中特殊杂质的检查ClCCH3CH3COOC2H5O氯贝氯贝丁酯丁酯（一）（一）合成工艺合成工艺 缩合缩合,水解水解 CH3COCH3，CHCl3，NaOH （对氯酚）（对氯酚）（毒性大，毒性大，GC）分解分解 酸化酸化 酯化酯化 HCl C2H5OH，H2SO4 对氯苯氧异丁酸（对氯苯氧异丁酸（检查酸度检查酸度）ClOClOHCH3CH3COO

29、NaCH3CClClOCH3CH3CH3COOHCClClOClCH3CH3COOC2H5ClCH3CO氯贝丁酯氯贝丁酯杂质杂质（二）对氯酚的检查方法（二）对氯酚的检查方法由于由于对氯酚的毒性大对氯酚的毒性大，限量要求极低限量要求极低1、气相色谱法（、气相色谱法（GC）色谱条件色谱条件：SE30(甲基硅橡胶甲基硅橡胶)固定液固定液;涂布浓度涂布浓度 5%;柱温柱温160;载气载气 N2；检测器：；检测器：FID对照品溶液对照品溶液：0.0025%(限量限量)对氯酚的氯仿溶液对氯酚的氯仿溶液供试品溶液供试品溶液：10g氯贝丁酯氯贝丁酯NaOH液提取液提取酸酸化化CHCl3提提 供试供试测定法测定

30、法：取同样量供试品与对照品进样，取同样量供试品与对照品进样，供试品峰面积对照品峰面积供试品峰面积对照品峰面积限量限量：0.0025%氯贝丁酯氯贝丁酯对氯酚对氯酚2、高效液相色谱法、高效液相色谱法(HPLC)色谱条件色谱条件：色谱柱色谱柱:(4mm30cm,5um)填料填料:氰基丙基硅烷化硅胶氰基丙基硅烷化硅胶流动相流动相:己烷己烷:异丙醇异丙醇:冰醋酸冰醋酸(1970:30:1)检测波长：检测波长：275nm 内标溶液内标溶液：4乙氧基酚乙氧基酚 1 30000（流动相）（流动相）供试品溶液供试品溶液：4.0g内标内标4ml 20ml 对照品溶液对照品溶液：0.12mg 对氯酚对氯酚内标内标4

31、ml 20ml 测定法测定法：供试品、对照品溶液分别进样供试品、对照品溶液分别进样20ul用用A样品样品/A内标内标的比值的比值Q进行比较进行比较限量限量：供试品中的对氯酚的供试品中的对氯酚的Q不得大于对照品的不得大于对照品的Q(0.12mg/4.0g)100%=0.003%流动相流动相流动相流动相氯贝氯贝丁酯丁酯（三）挥发性杂质的检查方法（三）挥发性杂质的检查方法GC 检查挥发性杂质检查挥发性杂质色谱条件色谱条件：同对氯酚检查方法的条件：同对氯酚检查方法的条件供试品溶液供试品溶液：碱洗后预留的样品：碱洗后预留的样品预试溶液预试溶液：氯贝丁酯氯仿溶液：氯贝丁酯氯仿溶液(10mg/ml)测定方法

32、测定方法：氯贝丁酯氯仿溶液预试液进样：氯贝丁酯氯仿溶液预试液进样 寻找合寻找合适的测定条件（衰减、进样量）适的测定条件（衰减、进样量）供试品进样供试品进样 采样时间为采样时间为主成分峰保留主成分峰保留时间的时间的2倍。倍。如有杂质峰，各杂质峰面积的总和，不得大于如有杂质峰，各杂质峰面积的总和，不得大于总峰面积的总峰面积的0.5%。芳酸芳酸及酯及酯第四节第四节 含量测定含量测定酸碱滴定法酸碱滴定法亚硝酸钠滴定法亚硝酸钠滴定法双相滴定法双相滴定法紫外分光光度法紫外分光光度法高效液相色谱法高效液相色谱法一、酸碱滴定法一、酸碱滴定法直接滴定法直接滴定法水解后剩余滴定法水解后剩余滴定法两步滴定法两步滴定

33、法酸碱酸碱滴定滴定 （一）直接滴定法（一）直接滴定法 游离羧基游离羧基 具有酸性具有酸性 可用碱直接滴定可用碱直接滴定 pKa 3.49 +NaOH +H2O 阿司匹林阿司匹林1 :1COOHOCOCH3COONaOCOCH3直接酸碱直接酸碱滴定滴定中国药典阿司匹林的含量测定中国药典阿司匹林的含量测定 本品本品0.4g，精密称定，加，精密称定，加中性乙醇中性乙醇 20ml溶解，加酚酞指示液溶解，加酚酞指示液3滴，用滴，用NaOH滴定液（滴定液（0.1mol/L）滴定，每）滴定，每1ml的的NaOH滴定液（滴定液（0.1mol/L）相当）相当于于18.02mg阿司匹林阿司匹林(C9H8O4)。对

34、酚酞指示液呈中性对酚酞指示液呈中性问题：问题：1.如何配制中性乙醇如何配制中性乙醇?（NaOH，KOH）2.为什么称中性乙醇为什么称中性乙醇?（对酚酞）（对酚酞）3.为什么加中性乙醇为什么加中性乙醇?（水中水解、溶解度）（水中水解、溶解度）4.为什么选酚酞作为指示剂为什么选酚酞作为指示剂?（产物弱酸强碱（产物弱酸强碱终点偏碱。酚酞终点偏碱。酚酞 810（无红）（无红）5.为什么滴定在不断搅拌下稍快进行为什么滴定在不断搅拌下稍快进行?（碱浓，水解）（碱浓，水解）应用应用双水杨酯，阿司匹林、水杨酸双水杨酯，阿司匹林、水杨酸 水杨酸类水杨酸类苯甲酸，丙磺舒、甲芬那酸苯甲酸，丙磺舒、甲芬那酸 芳酸类芳

35、酸类布洛芬布洛芬 其他芳酸其他芳酸阿司匹林阿司匹林滴定滴定酸碱直接酸碱直接滴定滴定（二）水解后剩余滴定法（二）水解后剩余滴定法酯类药物的一般含量测定方法酯类药物的一般含量测定方法阿司匹林含量测定阿司匹林含量测定过量的碱水解过量的碱水解用酸回滴剩余的碱用酸回滴剩余的碱 水解水解 +2NaOH +CH3COONa 1 ：22NaOH（剩余剩余）+H2SO4 Na2SO4 +2H2O 2 :1滴定度滴定度：1ml NaOH滴定液滴定液（）（）相当于相当于0.25mmol Aspirin 1ml H2SO4滴定液滴定液（）（）=45.04mg 酸碱酸碱滴定滴定COOHOCOCH3COONaOH剩余剩余

36、滴定滴定USP采用本法测定采用本法测定Aspirin原料药的含量原料药的含量V0：空白试验消耗：空白试验消耗H2SO4体积体积 V ：回滴消耗：回滴消耗H2SO4体积体积 F：硫酸滴定液浓度校正因数：硫酸滴定液浓度校正因数 T：滴定度：滴定度 W：称样量：称样量（mg）%100%WFTV）含量（%100)%0WFTVV（）含量（三）两步滴定法（三）两步滴定法制剂测定制剂测定1、阿司匹林片含量测定阿司匹林片含量测定 少量枸橼酸或酒石酸作为稳定剂少量枸橼酸或酒石酸作为稳定剂 阿司匹林片阿司匹林片 制备制备,贮藏贮藏水解水解水杨酸水杨酸+醋酸醋酸 为了消除干扰为了消除干扰 先中和共存酸先中和共存酸第

37、一步滴定第一步滴定 两步滴定法两步滴定法 碱性水解碱性水解 剩余滴定法测含量剩余滴定法测含量第二步滴定第二步滴定酸碱酸碱滴定滴定阿司匹林阿司匹林含量测定含量测定（1）中和）中和（第一步滴定）（第一步滴定）RCOOH+NaOHRCOONa+H2O +NaOH +H2O 中性乙醇溶解中性乙醇溶解 NaOH(0.1mol/L)滴定至酚酞溶液显滴定至酚酞溶液显粉红色粉红色 中和存在的游离酸，阿司匹林也同时成为钠盐中和存在的游离酸，阿司匹林也同时成为钠盐COOHOCOCH3COONaOCOCH3中和中和阿司匹林阿司匹林含量测定含量测定（2）水解与测定）水解与测定（第二步滴定）（第二步滴定）+NaOH +

38、CH3COONa 2NaOH+H2SO4 Na2SO4 +2H2O中和后的中和后的 供试品溶液供试品溶液+定量过量定量过量的的NaOH滴定液滴定液H2SO4标准溶液标准溶液(0.05mol/L)与阿司匹林的摩尔比为与阿司匹林的摩尔比为0.5：1 T=0.05（1/0.5）180.1618.02(mg/1ml)片剂含量计算公式片剂含量计算公式：(空白校准空白校准)COONaOCOCH3COONaOH水解水解测定测定100)(%)0标示量含量占标示量WWTFVV2、氯贝丁酯的含量测定、氯贝丁酯的含量测定芳酸芳酸二、亚硝酸钠滴定法二、亚硝酸钠滴定法芳伯氨基芳伯氨基对氨基水杨酸钠对氨基水杨酸钠 NaN

39、O2，重氮化反应（HCl存在）中国药典中国药典：亚硝酸钠滴定法亚硝酸钠滴定法永停法指示终点永停法指示终点 测对氨基水杨酸钠及制剂含量测对氨基水杨酸钠及制剂含量COONaOHNH2芳酸芳酸三、双相滴定法三、双相滴定法应用应用：芳酸类药物的碱金属盐：芳酸类药物的碱金属盐易溶于水易溶于水 碱性碱性HCl滴定滴定为什么加有机相？为什么加有机相？目的目的:(1)母体药物酸性较强母体药物酸性较强,因而其共轭碱的碱因而其共轭碱的碱 性较弱性较弱,使滴定使滴定终点的突越不明显终点的突越不明显。(2)滴定过程中生成的酸一般不溶于水，滴定过程中生成的酸一般不溶于水，不利于终点不利于终点的正确判断。的正确判断。芳酸

40、芳酸含量含量双相滴定法双相滴定法 +HCl +NaCl 水相水相 有机相有机相（乙醚）（乙醚）使水相中的苯甲酸浓度使水相中的苯甲酸浓度，反应完全；，反应完全；降低苯甲酸的离解，终点突跃明显降低苯甲酸的离解，终点突跃明显 具体操作见讲义：分液漏斗、甲基橙、乙醚具体操作见讲义：分液漏斗、甲基橙、乙醚COONaCOOHCOOH苯甲酸苯甲酸水中水中溶解度低溶解度低芳酸芳酸四、紫外分光光度法四、紫外分光光度法（一）直接紫外分光光度法（一）直接紫外分光光度法丙磺舒丙磺舒溶解稀释后溶解稀释后1cm吸收池，溶剂做吸收池，溶剂做空白空白 max=249nm测定测定 计算计算 ，用用吸收系数法吸收系数法计算含量：

41、计算含量：%100)()(%11%11rExEcmcm）含量（%100)(%100)(/A%11%11xxLcmcmxrCEAxrELC）含量（xEcm)(%11芳酸芳酸含量含量（二）离子交换紫外分光光度法（二）离子交换紫外分光光度法 离子交换树脂去除杂质后离子交换树脂去除杂质后收集洗脱液收集洗脱液定容定容UV 对照品比较对照品比较 D：稀释倍数：稀释倍数W纯纯CxDsusuAACCssuCAAu)/(C%100WDCu含量（）芳酸芳酸含量含量（三）柱分配色谱紫外分光光度法（三）柱分配色谱紫外分光光度法USP（29）测定阿司匹林胶囊的含量测定阿司匹林胶囊的含量柱分配色谱紫外分光光度法柱分配色谱

42、紫外分光光度法测定阿司匹林测定阿司匹林含量含量也可以测定水杨酸也可以测定水杨酸杂质限量杂质限量操作较繁琐操作较繁琐芳酸芳酸五、高效液相色谱法五、高效液相色谱法应用应用：中国药典（中国药典（2005版）：版）：阿司匹林栓剂，阿司匹林肠溶阿司匹林栓剂，阿司匹林肠溶胶囊，阿司匹林泡腾片。胶囊，阿司匹林泡腾片。USP（29）：）：对氨基水杨酸钠及其片剂对氨基水杨酸钠及其片剂 阿司匹林片剂阿司匹林片剂;长效与缓释片剂长效与缓释片剂;缓释胶囊缓释胶囊 丙磺舒原料丙磺舒原料 甲芬那酸、布洛芬及其制剂甲芬那酸、布洛芬及其制剂例例：（一）阿司匹林栓剂的含量测定（一）阿司匹林栓剂的含量测定 色谱条件、系统适用性试

43、验、内标法定量色谱条件、系统适用性试验、内标法定量 （二）丙磺舒原料的含量测定（二）丙磺舒原料的含量测定 具体见讲义具体见讲义芳酸芳酸第五节第五节 体内药物分析体内药物分析 当当人们认识到有治疗作用的药物也会成人们认识到有治疗作用的药物也会成为杀人凶手时。人们才开始对药物体外的为杀人凶手时。人们才开始对药物体外的毒性感兴趣。毒性感兴趣。人们对药物毒性的认识和控制过程人们对药物毒性的认识和控制过程体外毒性（毒理、药理）体外毒性（毒理、药理）体内药物及体内药物及代谢物产生的毒性代谢物产生的毒性剂量的大小不同剂量的大小不同治疗药物的浓度监测治疗药物的浓度监测血药浓度的血药浓度的测定测定体内药物分析体内药物分析HPLC