CR扩增实验PPT课件

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1、实验原理实验原理 PCR原理原理 DNA体内外扩增条件对比体内外扩增条件对比模板模板原料原料酶酶能量能量引物引物DNA体内体内扩增扩增基因组基因组4种种dNTP解旋酶解旋酶DNA/RNA聚聚合酶合酶连接酶连接酶ATP提供提供3端端羟基的羟基的RNA片段片段DNA的的PCR扩增扩增目的基因目的基因或或DNA片片段段4种种dNTPTaq酶（耐热酶（耐热DNA聚合酶）聚合酶）热能热能上下游引上下游引物（单链物（单链DNA）其他其他体内体内环境环境缓冲缓冲液、液、Mg2+标准的标准的PCR反应体系反应体系1234522557294时间时间（min）温度温度（）适温延伸适温延伸3 3高温变性高温变性1

2、1低温退火低温退火2 2重复重复13步步2530轮轮目的目的DNADNA片段片段扩增扩增100万倍以上万倍以上单链单链与引与引物复物复性性DNA DNA 变性变性形成形成二条二条单链单链子链子链延伸延伸DNADNA加倍加倍模板模板DNA95PCR的基本原理vPCR反应条件vPCR过程vPCR的特点50引物1引物2DNA引物72Taq酶Taq酶PCR的基本原理vPCR反应条件vPCR过程vPCR的特点72第1轮结束95第2轮开始PCR的基本原理vPCR反应条件vPCR过程vPCR的特点955072TaqTaqTaqTaqPCR的基本原理vPCR反应条件vPCR过程vPCR的特点72第2轮结束PCR的基本原理vPCR反应条件vPCR过程vPCR的特点模板DNA第1轮扩增第2轮扩增第3轮扩增第4轮扩增第5轮扩增第6轮扩增 Total Volume