人血栓前体蛋白6031

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1、人血栓前体蛋白（TpP）ELISA 试剂盒检测说明书 最近更新时间：2014-09-26 详细介绍：人血栓前体蛋白（TpP）ELISA 试剂盒检测说明书 本试剂仅供研究使用 标本：血清或血浆 试验原理：人血栓前体蛋白（TpP）ELISA 试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验（ELISA）.已知 TpP 浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。先将 TpP 和生物素标记的抗体同时温育。洗涤后，加入亲和素标记过的 HRP。再经过温育和洗涤，去除未结合的酶结合物，然后加入底物 A、B，和酶结合物同时作用。产生颜色。颜色的深浅和样品中 TpP的浓度呈比例关系。试剂盒内容及其配制 人血栓前体

2、蛋白（TpP）ELISA 试剂盒成份（2-8 保存）96孔配置 48 孔配置 配制 96/48 人份酶标板 1 块板（96T）半块板（48T）即用型 塑料膜板盖 1 块 半块 即用型 标准品：40ug/ml 1 瓶（0.6ml）1 瓶（0.3ml）按说明书进行稀稀 空白对照 1 瓶（1.0ml）1 瓶（0.5ml）即用型 标准品稀释缓冲液 1 瓶（5ml）1 瓶（2.5ml）即用型 生物素标记的抗 TpP 抗体 1 瓶（6ml）1 瓶（3.0ml）即用型 亲和链酶素-HRP 1 瓶（10ml）1 瓶（5.0ml）即用型 洗涤缓冲液 1 瓶（20ml）1 瓶（10ml）按说明书进行稀释 底物 A

3、 1 瓶（6.0ml）1 瓶（3.0ml）即用型 底物 B 1 瓶（6.0ml）1 瓶（3.0ml）即用型 终止液 1 瓶（6.0ml）1 瓶（3.0ml）即用型 自备材料 1 蒸馏水。2 加样器：5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。3 人血栓前体蛋白（TpP）ELISA 试剂盒振荡器及磁力搅拌器等。安全性 1 避免直接接触终止液和底物 A、B。一旦接触到这些液体，请尽快用水冲洗。2 实验中不要吃喝、抽烟或使用化妆品。3 不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。操作注意事项 1 试剂应按标签说明书储存，使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃，不可保存。2 实

4、验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。3 不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。4 使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物 A、B 液时，避免使用带金属部分的加样器。5 使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。6 洗涤酶标板时应充分拍干，不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。7 底物 A 应挥发，避免长时间打开盖子。底物 B 对光敏感，避免长时间暴露于光下。避免用手接触，有毒。实验完成后应立即读取 OD 值。8 人血栓前体蛋白（TpP）ELISA 试剂盒加入试剂的顺序应一致，以保证所有反应板孔温育的时间一样。9

5、按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。样品收集、处理及保存方法 1、血清-操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管。收集血液后，1000g 离心 10 分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。2、血浆-EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000g离心 30 分钟去除颗粒。3、细胞上清液-1000g 离心 10 分钟去除颗粒和聚合物。4、保存-如果样品不立即使用，应将其分成小部分-70 保存，避免反复冷冻。尽可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量颗粒，检测前先离心或过滤。不要在 37 或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。试剂的准备 1

6、标准品：标准品的系列稀释应在实验时准备，不能储存。稀释前将标准品振荡混匀。稀释比例按下表中进行：40 ug/ml（6 号标准品）原倍浓度不用稀释直接加入 50ul。20 ug/ml（5 号标准品）100ul 的原倍标准品加入 100ul 的标准品稀释液 10 ug/ml（4 号标准品）100ul 的 5 号标准品加入 100ul 的标准品稀释液 5.0 ug/ml（3 号标准品）100ul 的 4 号标准品加入 100ul 的标准品稀释液 2.5 ug/ml（2 号标准品）100ul 的 3 号标准品加入 100ul 的标准品稀释液 1.25 ug/ml（1 号标准品）100ul 的 2 号标

7、准品加入 100ul的标准品稀释液 0 ug/ml（空白对照）原始浓度不用稀释直接加入 50ul。2 洗涤缓冲液（50）的稀释：蒸馏水 50 倍稀释。操作步骤 1 使用前，将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫，以免加样时加入大量的气泡，产生加样上的误差。2 根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定，能使用复孔的尽量做复孔。3 人血栓前体蛋白（TpP）ELISA 试剂盒加入稀释好后的标准品 50ul 于反应孔、加入待测样品 50ul 于反应孔内。立即加入 50ul 的生物素标记的抗体。盖上膜板，轻轻振荡混匀，37 温育 1 小时。4 甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡 30 秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作 3 次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。5 每孔加入 80ul 的亲和链酶素-HRP，轻轻振荡混匀，37温育 30 分钟。6 甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡 30 秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作 3 次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。7 每孔加入底物 A、B 各 50ul，轻轻振荡混匀，37 温育10 分钟。避免光照。8 取出酶标板，迅速加入 50ul 终止液，加入终止液后应立即测定结果。9 在 450nm 波长处测定各孔的 OD 值。