生物化学笔记2

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1、第一章、生物大分子的结构与功能氨基酸和蛋白质一、组成蛋白质的20种氨基酸的分类1、非极性氨基酸包括：甘氨酸、丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸2、极性氨基酸极性中性氨基酸：色氨酸、酪氨酸、丝氨酸、半胱氨酸、蛋氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、 苏氨酸酸性氨基酸：天冬氨酸、谷氨酸碱性氨基酸：赖氨酸、精氨酸、组氨酸其中：属于芳香族氨基酸的是：色氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸属于亚氨基酸的是：脯氨酸含硫氨基酸包括：半胱氨酸、蛋氨酸注意：在识记时可以只记第一个字，如碱性氨基酸包括：赖精组二、氨基酸的理化性质1、两性解离及等电点：氨基酸分子中有游离的氨基和游离的羧基，能与酸或碱类物质结合成盐，故它是一种

2、两性电 解质。在某一PH的溶液中，氨基酸解离成阳离子和阴离子的趋势及程度相等，成为兼性离 子，呈电中性，此时溶液的PH称为该氨基酸的等电点。2、氨基酸的紫外吸收性质：芳香族氨基酸在280nm波长附近有最大的紫外吸收峰，由于大多数蛋白质含有这些氨基酸残 基，氨基酸残基数与蛋白质含量成正比，故通过对280nm波长的紫外吸光度的测量可对蛋白 质溶液进行定量分析。3、茚三酮反应氨基酸的氨基与茚三酮水合物反应可生成蓝紫色化合物，此化合物最大吸收峰在570nm 波长处。由于此吸收峰值的大小与氨基酸释放出的氨量成正比，因此可作为氨基酸定量分析 方法。三、肽两分子氨基酸可借一分子所含的氨基与另一分子所带的羧基

3、脱去1分子水缩合成最简单 的二肽。二肽中游离的氨基和羧基继续借脱水作用缩合连成多肽。10个以内氨基酸连接而成 多肽称为寡肽；39个氨基酸残基组成的促肾上腺皮质激素称为多肽；51个氨基酸残基组成的 胰岛素归为蛋白质。多肽连中的自由氨基末端称为N端，自由羧基末端称为C端，命名从N 端指向C端。人体内存在许多具有生物活性的肽，重要的有： 谷胱甘肽（GSH）:是由谷、半胱和甘氨酸组成的三肽。半胱氨酸的巯基是该化合物的主要功 能基团。GSH的巯基具有还原性，可作为体内重要的还原剂保护体内蛋白质或酶分子中巯基 免被氧化，使蛋白质或酶处于活性状态。四、蛋白质的分子结构1、蛋白质的一级结构：即蛋白质分子中氨基

4、酸的排列顺序。主要化学键：肽键，有些蛋白质还包含二硫键。2、蛋白质的高级结构：包括二级、三级、四级结构。1）蛋白质的二级结构：指蛋白质分子中某一段肽链的局部空间结构，也就是该段肽链骨架原子的相对空间位置，并不涉及氨基酸残基侧链的构象。二级结构以一级结构为基础， 多为短距离效应。可分为：a -螺旋：多肽链主链围绕中心轴呈有规律地螺旋式上升，顺时钟走向，即右手螺旋，每 隔3.6个氨基酸残基上升一圈，螺距为0.540nm。a -螺旋的每个肽键的N-H和第四个肽键 的羧基氧形成氢键，氢键的方向与螺旋长轴基本平形。P -折叠：多肽链充分伸展，各肽键平面折叠成锯齿状结构，侧链R基团交错位于锯齿状 结构上下

5、方；它们之间靠链间肽键羧基上的氧和亚氨基上的氢形成氢键维系构象稳定.P -转角：常发生于肽链进行180度回折时的转角上，常有4个氨基酸残基组成，第二个 残基常为脯氨酸。无规卷曲：无确定规律性的那段肽链。主要化学键：氢键。2）蛋白质的三级结构：指整条肽链中全部氨基酸残基相对空间位置，显示为长距离效应。 主要化学键：疏水键（最主要）、盐键、二硫键、氢键、范德华力。3）蛋白质的四级结构：对蛋白质分子的二、三级结构而言，只涉及一条多肽链卷曲而成的 蛋白质。在体内有许多蛋白质分子含有二条或多条肽链，每一条多肽链都有其完整的三级结 构，称为蛋白质的亚基，亚基与亚基之间呈特定的三维空间排布，并以非共价键相连

6、接。这 种蛋白质分子中各个亚基的空间排布及亚基接触部位的布局和相互作用，为四级结构。由一 条肽链形成的蛋白质没有四级结构。主要化学键：疏水键、氢键、离子键五、蛋白质结构与功能关系1、蛋白质一级结构是空间构象和特定生物学功能的基础。一级结构相似的多肽或蛋白质， 其空间构象以及功能也相似。尿素或盐酸胍可破坏次级键。P -巯基乙醇可破坏二硫键2、蛋白质空间结构是蛋白质特有性质和功能的结构基础。肌红蛋白：只有三级结构的单链蛋白质，易与氧气结合，氧解离曲线呈直角双曲线。血红蛋白：具有4个亚基组成的四级结构，可结合4分子氧。成人由两条a -肽链（141 个氨基酸残基）和两条8 -肽链（146个氨基酸残基）

7、组成。在氧分压较低时，与氧气结合较 难，氧解离曲线呈S状曲线。因为：第一个亚基与氧气结合以后，促进第二及第三个亚基与 氧气的结合，当前三个亚基与氧气结合后，又大大促进第四个亚基与氧气结合，称正协同效 应。结合氧后由紧张态变为松弛态。六、蛋白质的理化性质1、蛋白质的两性电离：蛋白质两端的氨基和羧基及侧链中的某些基团，在一定的溶液PH 条件下可解离成带负电荷或正电荷的基团。2、蛋白质的沉淀：在适当条件下，蛋白质从溶液中析出的现象。包括：a. 丙酮沉淀，破坏水化层。也可用乙醇。b. 盐析，将硫酸铵、硫酸钠或氯化钠等加入蛋白质溶液，破坏在水溶液中的稳定因素电 荷而沉淀。3、蛋白质变性：在某些物理和化学

8、因素作用下，其特定的空间构象被破坏，从而导致其理 化性质的改变和生物活性的丧失。主要为二硫键和非共价键的破坏，不涉及一级结构的改变。 变性后，其溶解度降低，粘度增加，结晶能力消失，生物活性丧失，易被蛋白酶水解。常见 的导致变性的因素有：加热、乙醇等有机溶剂、强酸、强碱、重金属离子及生物碱试剂、超 声波、紫外线、震荡等。4、蛋白质的紫外吸收：由于蛋白质分子中含有共轭双键的酪氨酸和色氨酸，因此在280nm 处有特征性吸收峰，可用蛋白质定量测定。5、蛋白质的呈色反应a. 茚三酮反应：经水解后产生的氨基酸可发生此反应，详见二、3b. 双缩脲反应:蛋白质和多肽分子中肽键在稀碱溶液中与硫酸酮共热，呈现紫色

9、或红色。 氨基酸不出现此反应。蛋白质水解加强，氨基酸浓度升高，双缩脲呈色深度下降，可检测蛋 白质水解程度。七、蛋白质的分离和纯化1、沉淀，见六、22、电泳：蛋白质在高于或低于其等电点的溶液中是带电的，在电场中能向电场的正极或负 极移动。根据支撑物不同，有薄膜电泳、凝胶电泳等。3、透析：利用透析袋把大分子蛋白质与小分子化合物分开的方法。4、层析：a.离子交换层析，利用蛋白质的两性游离性质，在某一特定PH时，各蛋白质的 电荷量及性质不同，故可以通过离子交换层析得以分离。如阴离子交换层析，含负电量小的 蛋白质首先被洗脱下来。b.分子筛，又称凝胶过滤。小分子蛋白质进入孔内，滞留时间长， 大分子蛋白质不

10、能时入孔内而径直流出。5、超速离心：既可以用来分离纯化蛋白质也可以用作测定蛋白质的分子量。不同蛋白质其 密度与形态各不相同而分开。八、多肽链中氨基酸序列分析a.分析纯化蛋白质的氨基酸残基组成（蛋白质水解为个别氨基酸，测各氨基酸的量及在蛋白质中的百分组成），测定肽链头、 尾的氨基酸残基二硝基氟苯法（DNP法），头端，尾端羧肽酶A、B、C法等，丹酰氯法I水解肽链，分别分析胰凝乳蛋白酶（糜蛋白酶）法：水解芳香族氨基酸的羧基侧肽键胰蛋白酶法：水解赖氨酸、精氨酸的羧基侧肽键漠化脯法：水解蛋氨酸羧基侧的肽键IEdman降解法测定各肽段的氨基酸顺序（氨基末端氨基酸的游离a-氨基与异硫氰酸苯酯反应形成衍生物，用层析法鉴定氨基酸种 类）