凯氏定氮法测定蛋白质的含量

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1、凯氏定氮法测定蛋白质的含量凯氏定氮法测定蛋白质的含量 一、原理：有机含氮化合物与浓硫酸共热消化，氮转化为氨，再与硫酸结合成硫酸铵。硫酸铵与强碱反应，放出氨。将氨蒸馏到过量的标准无机溶液中，再用标准碱溶液进行滴定。根据测得的氨量，计算样品的总氮量。 二、试剂与材料： 浓硫酸、硫酸钾硫酸铜粉末，0.3g二氧化硒研细混合）、30氢氧化钠溶液、2硼酸溶液、0.01M标准盐酸、混合指示剂储存液、硼酸田氏指示剂混合液、蛋白质样品、容量瓶、吸管、凯氏烧瓶、凯氏定氮蒸馏装置、微量滴定管、电炉 浓硫酸 500ml 硫酸钾 200g 硫酸铜 200g 硼酸 50g 盐酸 200ml 甲基红 0.5g 溴甲酚绿 0

2、.5g 三、操作方法 1、样品处理：固体样品，应在105干燥至恒重。液体样品可直接吸取一定量，也可经适当稀释后，吸取一定量进行测定，使每一样品的含氮量在0.21.0mg范围内。 2、消化：取一定量样品，于50ml干燥的凯氏烧瓶内。加入300mg硫酸钾硫酸铜混合粉末，再加入3ml浓硫酸。用电炉加热，在通风厨中消化，瓶口加一小漏斗。先以文火加热，避免泡沫飞溅，不能让泡沫上升到瓶颈，待泡沫停止发生后，加强火保持瓶内液体沸腾。时常转动烧瓶使样品全部消化完全，直至消化液清澈透明。 另取凯氏瓶一个，不加样品，其它操作相同，作为空白试验，用以测定试剂中可能含有的微量含氮物质，以对样品进行校正。 3、蒸馏：将

3、微量凯氏蒸馏装置洗涤干净。将凯氏烧瓶中的消化液冷却后，全部转入100ml的容量瓶，用蒸馏水定容至刻度。 吸取20ml稀释消化液，置于蒸馏装置的反应室中，加入10ml30氢氧化钠溶液，将玻璃塞塞紧，于漏斗中加一些蒸馏水，作为水封。 取一三角瓶，加入10ml硼酸田氏指示剂混合液，置于冷凝管之下口，冷凝管口应浸没在硼酸液面之下，以保证氨的吸收。 加热水蒸汽发生器，沸腾后，夹紧夹子，凯氏蒸馏。三角瓶中的硼酸指示剂混合液，吸收蒸馏出的氨，由紫红色变为绿色。蒸馏15min，让硼酸液面离开冷凝管口，再蒸12min以冲洗冷凝管口。空白试验按同样操作进行。 4、滴定：样品和空白均蒸馏完毕后，用0.01M标准盐酸滴定，至硼酸指示剂混合液由绿色变回淡紫色，即为滴定终点。 四、计算 样品总氮量=c14100/20 式中：A：样品滴定时消耗的标准盐酸体积 B：空白滴定时消耗的盐酸体积 C：标准盐酸的当量浓度 14：氮的相对分子量 20：用于蒸馏的稀释消化液体积 100：稀释消化液的体积 样品中粗蛋白含量样品总氮量6.25