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1、实验十一实验十一 柱色谱柱色谱 亚甲基蓝与荧光黄的分离亚甲基蓝与荧光黄的分离厦门大学化学化工学院厦门大学化学化工学院基础化学实验二基础化学实验二1 1、掌握色谱法的原理及其应用、掌握色谱法的原理及其应用2 2、掌握柱色谱的实验操作技能、掌握柱色谱的实验操作技能一一 实验目的实验目的二二 实验原理实验原理 色谱法亦称色层法、层析法等，是分离、纯化和鉴定有机色谱法亦称色层法、层析法等，是分离、纯化和鉴定有机化合物的重要方法之一。化合物的重要方法之一。色谱法的基本原理是利用混合物各组分在某一物质中的吸色谱法的基本原理是利用混合物各组分在某一物质中的吸附或溶解性能（即分配）的不同，或其他亲和作用性能的
2、差异，附或溶解性能（即分配）的不同，或其他亲和作用性能的差异，混合物的溶液流经该种物质，进行反复的吸附或分配等作用，混合物的溶液流经该种物质，进行反复的吸附或分配等作用，从而将各组分分开。从而将各组分分开。由于不同化合物吸附能由于不同化合物吸附能力不同，因而在洗脱时以不力不同，因而在洗脱时以不同的速度沿柱向下流动，吸同的速度沿柱向下流动，吸附能力弱的组分随溶剂首先附能力弱的组分随溶剂首先流出。在连续洗脱过程中，流出。在连续洗脱过程中，不同组分或不同色带就能分不同组分或不同色带就能分别收集，从而达到分离纯化别收集，从而达到分离纯化的目的。的目的。柱色谱柱色谱柱色谱柱色谱1 1 吸附剂吸附剂 常用
3、的吸附剂：常用的吸附剂：氧化铝，硅胶，氧化镁，碳酸钙，活性炭氧化铝，硅胶，氧化镁，碳酸钙，活性炭或纤维素粉。或纤维素粉。选择吸附剂的首要条件：选择吸附剂的首要条件：不与被分离物或展开剂发生化学不与被分离物或展开剂发生化学反应。反应。吸附能力与以下几点有关：吸附能力与以下几点有关：（1 1）吸附剂颗粒大小（）吸附剂颗粒大小（100100150150目）目）（2 2）吸附剂含水量（）吸附剂含水量（6 61010，IIIIIIIIII级）级）柱色谱柱色谱2 2 溶剂溶剂 通常根据被分离物中各组分的极性、溶解度和吸附通常根据被分离物中各组分的极性、溶解度和吸附活性等来考虑。先将带分离的样品溶于尽量少的
4、非极性活性等来考虑。先将带分离的样品溶于尽量少的非极性溶剂中，从柱顶流入柱中，依次增大溶剂的极性，将不溶剂中，从柱顶流入柱中，依次增大溶剂的极性，将不同化合物依次洗脱（同化合物依次洗脱（梯度洗脱梯度洗脱）。）。石油醚石油醚 环己烷环己烷 四氯化碳四氯化碳 甲苯甲苯 苯苯 二氯甲烷二氯甲烷 氯氯仿仿 乙醚乙醚 乙酸乙酯乙酸乙酯 丙酮丙酮 乙醇乙醇 甲醇甲醇 水水 乙酸乙酸常用洗脱剂的极性：常用洗脱剂的极性：1 1、取一支色谱柱，在柱子的收缩部塞一小团脱脂棉花，注、取一支色谱柱，在柱子的收缩部塞一小团脱脂棉花，注 意松紧要适度。然后在棉花上铺一层粗硅胶或石英砂。意松紧要适度。然后在棉花上铺一层粗硅
5、胶或石英砂。2 2、将色谱柱垂直固定在铁架台上，往柱内加适量、将色谱柱垂直固定在铁架台上，往柱内加适量70%70%乙醇乙醇 溶液，打开活塞，溶液，打开活塞，赶走气泡！赶走气泡！3 3、再向柱中倒入适量、再向柱中倒入适量70%70%乙醇溶液，打开活塞，控制滴速乙醇溶液，打开活塞，控制滴速 为为1 1滴秒，用小锥型瓶承接，同时通过漏斗滴秒，用小锥型瓶承接，同时通过漏斗慢慢慢慢装入装入5g Al5g Al2 2O O3 3，使其逐渐沉入底部。使其逐渐沉入底部。三三 实验步骤及注意事项实验步骤及注意事项4 4、加完吸附剂后，在吸附剂上再盖一张直径大小合适的小滤、加完吸附剂后，在吸附剂上再盖一张直径大小
6、合适的小滤纸。纸。5 5、当溶剂的液面刚好流至滤纸面时关闭二通活塞，立即用移、当溶剂的液面刚好流至滤纸面时关闭二通活塞，立即用移液管加入液管加入1 1mL亚甲基蓝和荧光黄的乙醇混合液，尽量避免待分亚甲基蓝和荧光黄的乙醇混合液，尽量避免待分离混合液粘附在柱的内壁上。离混合液粘附在柱的内壁上。6 6、打开二通活塞，等柱内的溶剂恰好流到滤纸面时，关闭二、打开二通活塞，等柱内的溶剂恰好流到滤纸面时，关闭二通活塞，向柱内加入通活塞，向柱内加入70%70%乙醇，打开二通活塞进行洗脱。乙醇，打开二通活塞进行洗脱。三、实验步骤及注意事项三、实验步骤及注意事项7 7、用锥形瓶收集蓝色的亚甲基蓝溶液。、用锥形瓶收
7、集蓝色的亚甲基蓝溶液。【洗脱时切勿使溶剂洗脱时切勿使溶剂流干流干】8 8、当蓝色溶液收集完后，等柱内的、当蓝色溶液收集完后，等柱内的70%70%乙醇溶液恰好流到滤纸乙醇溶液恰好流到滤纸面时，关闭二通活塞，加入适量面时，关闭二通活塞，加入适量2%2%氨水作为洗脱剂。打开二通氨水作为洗脱剂。打开二通活塞收集黄绿色的荧光黄溶液，直到其完全被洗出。活塞收集黄绿色的荧光黄溶液，直到其完全被洗出。三、实验步骤及注意事项三、实验步骤及注意事项三三 实验步骤及注意事项实验步骤及注意事项9 9、用量筒分别量取所分离出来的亚甲基蓝和荧光黄溶液的体、用量筒分别量取所分离出来的亚甲基蓝和荧光黄溶液的体积积 后，倒入指定的回收瓶中。后，倒入指定的回收瓶中。1010、分离结束后，应先让溶剂尽量流干，然后倒置，用吸耳球、分离结束后，应先让溶剂尽量流干，然后倒置，用吸耳球从活塞口向管内挤压空气，将吸附剂从柱顶挤压出。从活塞口向管内挤压空气，将吸附剂从柱顶挤压出。使用过的使用过的吸附剂倒入垃圾桶里，切勿倒入水槽，以免堵塞水槽。吸附剂倒入垃圾桶里，切勿倒入水槽，以免堵塞水槽。
实验十一亚甲基蓝与荧光黄的分离
