橄榄油紫外分光光度检测法

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1、COI/T20/Doc. n o .1 9 / R e v .32 0 1 0油脂紫外分光光度检测法刖言紫外吸光度的检测能反应油脂的品质，加工过程会引起油脂吸光度的变化。由于油脂中的某些 厂1%成分存在共轭双键和三键结构，所以会在特定波长下有紫外吸收。吸收度用E 1cm表示（1 g油脂溶 解于100 mL溶剂，比色皿光径为1 cm ）。一般情况下也用K （消光系数）表示。1. 范围本标准规定了动植物油脂紫外吸光度测定的方法。2. 原理将油脂溶解在所需溶剂中，以此溶剂为参比液，测定样品在特定波长下的吸光度。记录分光光度计的读数并计算样品的吸光度。3. 仪器3.1分光光度计，可读取220 nm36

2、0 nm波长。3.2 1 cm光径石英比色皿。3.3 25 mL容量瓶。4. 试剂4.1分析纯异辛烷（2,2,4-三甲基戊烷），以蒸馏水为参比溶液，在220 nm处的透光率不低于60%， 在250 nm 处不低于95%。或者用分析纯环己烷，以蒸馏水为参比溶液，在220 nm处的透光率不低于40%，在250 nm处 不低于95%。或者用其它能完全溶解油脂的溶剂。5. 测定步骤5.1待测样品必须完全混匀并且无悬浮物。若油脂在室温下是液态的，则需在30C左右用滤纸过滤。 固体脂肪在高于溶点温度10C以内均质化并用滤纸过滤。5.2精确称量0.25 g样品，置于25 mL容量瓶内，用溶剂（异辛烷或环己烷

3、）溶解样品，并稀释 至刻度。该溶液必须清澈，如有乳光或浑浊现象必须立即用滤纸过滤。5.3将待测溶液倒入石英比色皿，用溶剂做参比，使用分光光度计测定在232 nm276 nm波长 范围的吸光度，吸光度必须在0.10.8之间，否则应适当加大样品浓度或进行稀释重新测定。5.4如果吸光度测定之前油脂需要过氧化铝柱，则按以下步骤处理：30 g碱性氧化铝用己烷溶成悬 浮状，装层析柱。待氧化铝压实之后将多余的己烷吸出，使液面高于氧化铝约1 cm。溶解10 g油 脂于100 mL己烷，按5.1均质化并过滤，然后倒入层析柱。收集洗脱液，在低于25C下真空减压 浓缩至无溶剂。然后立即按5.2步骤处理得到的油脂样品

4、。5.5如溶剂使用异辛烷则最大吸收波长为268 nm，如使用环己烷则最大吸收波长为270 nm。6.结果计算6.1记录相应波长下的吸光度，按下式计算：式中：、：波长入下的吸光度（以浓度1 g/100 mL，1 cm比色皿波长入测得吸光度表示）；E*波长入下测得的试样吸光度；C：试样溶液中样品的浓度，单位为g/100 mL；S：比色皿光径，单位为cm。结果应保留两位小数点。6.2橄榄油的吸光度测定方法与欧盟规定的官方方法一致，涉及到用异辛烷做溶液检测232 nm和 270 nm波长下的吸光度，并且需测定吸光度的变异值（AK），按下式检测：Km是波长m下的吸光度，最大吸收波长在270 nm附近。注

5、：如溶液用异辛烷则最大吸收波长为268 nm和232 nm，如溶液用环己烷，则最大吸收波长为 270 nm和 232 nm。附录I分光光度计的校正A.2.仪器必须六个月校验一次，包括波长响应值和响应值的准确性。A.2.1.波长校验可以用汞灯或使用合适的滤光片进行。A.2.2.光电管和光电倍增管响应值的校验按以下步骤进行：称 0.2000 g分析纯铭酸钾溶于0.05 mol/L的氢氧化钾溶液中，定溶至1000 mL。取上述溶液25 mL于500 mL容量瓶中，用0.05 mol/L的氢氧化钾溶液稀释至刻度。用0.05 mol/L的氢氧化钾溶液作为参比溶液，1cm光径比色 皿，测定此溶液在275

6、nm处的吸光度，应该为0.2000.005。方法精密度2009年，来自13个国家的21个拥有IOC认证的实验室参加了这次由执行秘书处实施的合作检测。 共检测了五个样品：A:特级初榨橄榄油B:二次离心橄榄油C:精炼油橄榄果渣油D:初榨橄榄油+菜籽油+高油酸葵花籽油E:初榨橄榄油+精炼大豆油测试结果见下表（A.1-A.6）表A.1 232 nm处的紫外吸收（异辛烷为溶液）项目ABCDE实验室数量2122222222可接受数量2018182117均值1.762.103.813.852.82重复性标准偏差Sr0.02590.01260.01550.03590.0193重复性变异系数CV（r），%1.4

7、70.600.410.930.69重复性限r0.0730.0350.0430.1010.054再现性标准偏差SR0.07730.06920.1740.21080.0694再现性变异系数CV（R），%4.383.294.585.482.46再现性限R0.2160.1940.4880.5900.194表A.2 232nm处的紫外吸收（环己烷为溶液）项目ABCDE实验室数量2121212121可接受数量1820202121均值1.762.123.833.862.79重复性标准偏差Sr0.02500.02160.04230.04050.0322重复性变异系数CV（r），%1.421.021.111.0

8、51.19重复性限r0.0700.0600.1190.1130.093再现性标准偏差SrR0.04930.07300.15130.13780.0996再现性变异系数CV（R），%2.813.443.953.573.57再现性限R0.1380.2040.4240.3860.279表A.3 268 nm处的紫外吸收（异辛烷为溶液）项目ABCDE实验室数量2122222222可接受数量2018201720均值0.120.431.140.450.60重复性标准偏差Sr0.00490.00500.01550.00660.0066重复性变异系数CV（r），%3.961.171.361.461.10重复性限

9、r0.0140.0140.0430.0180.019再现性标准偏差Sr R0.00990.01590.02960.01340.0335再现性变异系数CV（R），%8.003.752.592.985.56再现性限R0.0280.0450.0830.0380.094表A.4 270 nm处的紫外吸收（环己烷为溶液）项目ABCDE实验室数量2121212121可接受数量2019202017均值0.130.431.120.450.59重复性标准偏差Sr0.00520.00830.01030.01180.0064重复性变异系数CV（r），%4.021.930.922.631.08重复性限r0.0140.

10、0230.02890.0330.018再现性标准偏差SrR0.01090.01570.02650.01440.0148再现性变异系数CV（R），%8.513.662.373.202.52再现性限R0.0310.0440.0740.0400.042表A.5 2704 nm处的紫外吸收变异值AK （环己烷为溶液）项目ABCDE实验室数量2021212121可接受数量1920192018均值-0.0020.0020.0850.0350.047重复性标准偏差Sr0.00060.00050.00090.00100.0014重复性变异系数CV28.9021.611.092.862.90（r），%重复性限r

11、0.00160.00150.00260.00280.0038再现性标准偏差SR0.00290.00130.00430.00260.0038再现性变异系数CV（R），%147.5151.975.067.588.13再现性限R0.00800.00360.01210.00680.0106表A.6 2684 nm处的紫外吸收变异值AK （异辛烷为溶液）项目ABCDE实验室数量2121222222可接受数量2118212020均值-0.0020.0000.0820.0310.042重复性标准偏差Sr0.00090.00050.00190.00140.0007重复性变异系数CV（r），%36.44121.

12、082.274.381.65重复性限r0.00250.00140.00520.00380.0020再现性标准偏差SrR0.00360.00100.00820.00390.0045再现性变异系数CV（R），%148.18234.7710.0012.6310.63再现性限R0.01010.00270.02290.01100.0126参考文献ISO 5725-1: 1994 Accuracy (trueness and precision) of measurement methods and results Part 1: General principles and definitionsISO

13、 5725-2: 1994 Accuracy (trueness and precision) of measurement methods and results Part 2: Basic method for the determination of the repeatability and reproducibility of a standard measurement methodISO 5725-5: 1994 Accuracy (trueness and precision) of measurement methods and results Part 5: Alternative methods for the determination of the precision of a standard measurement methodISO 5725-6: 1994 Accuracy (trueness and precision) of measurement methods and results Part 6: Use in practice of accuracy values