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1、两种洗板方法在ELISA中的应用分析 目的：探讨酶联免疫试验(ELISA)中的洗板技术，试图找到一种简单、高效、经济、实用、可靠的ELISA洗板方法。方法：对753例临床体检乙型肝炎表面抗原(HBsAg)的标本，分别用手工法和全自动洗板机法两种方法进行洗板，进行组间对比分析；将弱阳性标本选出，重新检测2次，分别用两种方法洗板，看看弱阳性是否因洗板方法不同引起。结果：753例用ELISA方法检测HBsAg试验中，用手工法洗板和用洗板机洗板，经2检验，P0.05，两种洗板方法差异无显著性；18例弱阳性标本检测中，洗板方法的不同，不是造成假阳性的根本原因。结论：两种洗板方法无差别，在ELISA实验中
2、，手工法可以代替洗板机法洗板。手工法简单、高效、实用，应可规范推广。ELISA洗板；洗板方法；弱阳性Comparison between Two Cleaningmethods on ELISAAbstract: Objective To investigate the cleaningtechnology of the ELISA. Try to find a simple higheffective and utility cleaningtroughs method. Methods To use handle method and autowashingmachine method t
3、o clean the troughs of HBsAg with ELISA in 753 healthchecking peoples, Compared between the two cleaningmethods; Meanwhile, to select weak positive samples out and test repeatedly two times, to clean the troughs with the two methods, whether does it exist difference between the two methods.whether d
4、oes it cause the fake positive by the cleaning methods. Results There is not significant difference(P0.05)to clean troughs with the two cleaningmethods in testing HBsAg with ELISA in 753 cases,The cleaningmethod isnt the real cause of the fake positive in testing 18 serum samples of weakpositive. Co
5、nclusion Washing with the two cleaningmethods, the result has not difference.the washmachine method can be substituted by the handle method. the handle method is simple, higheffective and practice.Key words: ELISA Cleaningtroughs; Cleaningmethods;Weakpositive在酶联免疫试验中，洗板是非常重要的过程。酶联免疫试验(ELISA)洗涤过程虽不是一
6、个反应过程，但却也决定着实验的成败1。ELISA就是通过洗涤来达到分离游离和结合的酶标记物的目的，通过洗涤以清除残留在微孔板中未能与固相抗原或抗体相结合的物质，以及在反应过程中的非特异性吸附于固相载体上的干扰物质。聚苯乙烯对蛋白质的吸附是普遍的，在ELISA测定的反应过程中应尽量避免非特异性吸附，洗涤时又应将这些非特异性吸附的干扰物质洗涤掉。在ELISA操作中，洗涤是非常关键的，应引起操作者的高度重视。我们对753例用ELISA方法检测乙型肝炎表面抗原(HBsAg)的洗板过程进行了检测，采用我们自创的人工洗板法和全自动洗板机洗板对比试验，现将结果报告如下。1材料和方法1.1材料1.1.1标本来
7、源及类型753例标本来源于广东省深圳市龙岗区南岭人民医院2005年12月8日至2006年1月4日的工厂体检血清标本，其中男性121例，女性653例，年龄17岁43岁,平均年龄为30岁。1.1.2乙型肝炎病毒表面抗原诊断试剂盒(酶联免疫法)由上海荣盛生物技术有限公司生产。1.1.3一个大的脸盆和一些棉质毛巾。1.1.4消毒剂健之素(含有效氯500 mg/片)。1.1.5特建一个有开关口的洗涤池。1.1.6全自动洗板机美国Multiwash。1.2方法1.2.1手工法按试剂说明书严格操作，稀释液用蒸馏水按120稀释浓缩洗液，适量置于脸盆之中。从37 水浴温箱中拿出温浴到时的反应板，到洗涤池处，放开
8、自来水约1 min，然后快速甩掉反应液，即用自来水冲洗数次，甩掉水并用干净的毛巾吸干，放入配好洗涤液的脸盆之中，浸泡5 min10 min，然后将反应板取出，甩掉洗涤液，再用自来水冲洗数次，用干净吸水的毛巾拍干(多次)反应板。加显色剂A、B后，振荡封板，放入37 水浴温箱10 min，取出，加终止液，振荡，上酶标仪读板，观察结果。按感染性医疗废物处理洗涤池的液体及用过的洗涤液：加入健之素(500 mg/片)，使其浓度达到2 500 mg/L，浸泡24 h，收集起来，交医疗废物处理公司处理。1.2.2洗板机法按试剂说明书严格操作，稀释液用蒸馏水按120稀释浓缩洗液，适量置于洗板机洗液瓶里。将反应到时的反应板取出，用洗板机洗板5次，每次浸泡1 min，取出，用干净的毛巾拍干(多次)反应板。加显色剂A、B后，振荡封板，放入37 水浴温箱10 min，取出，加终止液，振荡，上酶标仪读板，观察结果。
两种洗板方法在ELISA中的应用分析
