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1、pH 值对小麦叶绿素含量的影响一：实验目的测定不同pH条件下培养的小麦幼苗叶绿素含量，熟悉在未经 分离的叶绿体色素溶液中测定叶绿素a和叶绿素b的方法及其计算。 二：实验原理低pH值能降低小麦叶叶绿素含量，高pH值对叶绿素含量无显 著影响。叶绿素a与叶绿素b是高等植物叶绿体色素的重要组分，约占 到叶绿体色素总量的75%左右。叶绿素在光合作用中起到吸收光能、 传递光能的作用（少量的叶绿素a还具有光能转换的作用），因此叶绿 素的含量与植物的光合速率密切相关，在一定范围内，光合速率随叶 绿素含量的增加而升高。另外，叶绿素的含量是植物生长状态的一个 反映，一些环境因素如干旱、盐渍、低温、大气污染、元素缺
2、乏都可 以影响叶绿素的含量与组成，并因之影响植物的光合速率。因此叶绿 素含量a与叶绿素b含量的测定对植物的光合生理与逆境生理具有重 要意义。叶绿素提取液中同时含有叶绿素a和叶绿素b，二者的吸收光 谱虽有不同，但又存在着明显的重叠，在不分离叶绿素a和叶绿素 b的情况下同时测定叶绿素a和叶绿素b的浓度，可分别测定在 663nm和645nm （分别是叶绿素a和叶绿素b在红光区的吸收峰）的 光吸收，然后根据Lamber t-Beer定律，计算出提取液中叶绿素a和 叶绿素b的浓度。A663=82.04Ca+9.27Cb1）A645=16.75Ca+45.60Cb （2）“II1Too60070QA /
3、nm叶 M 承 祖pii t绿累b处乙酣jW诫中的吸收比in公式中Ca为叶绿素a的浓度，Cb为叶绿素b浓度（单位为 g/L）, 82.04和9.27分别是叶绿素a和叶绿素b在663nm下的比吸 收系数（浓度为lg/L，光路宽度为lcm时的吸光度值）；16.75和 45.60分别是叶绿素a和叶绿素b在645nm下的比吸收系数。即混合 液在某一波长下的光吸收等于各组分在此波长下的光吸收之和。将上式整理，可以得到下式：Ca=0.0127A663-0.00269A645（3）Cb=0.0229A645-0.00468A663（4）将叶绿素的浓度改为mg/L，则上式变为:Ca=12.7A663-2.69
4、A645（5）Cb=22.9A645-4.68A6636）CT=Ca+Cb=8.02A663+20.21A645 （7）CT为叶绿素的总浓度三、实验材料：-小麦叶片四、实验仪器及试剂：高级型分光光度计；电子天平；剪刀；打孔器；研钵；移液管；漏斗；量筒；培养皿；滤纸；丙酮；石英砂；CaCO3；小麦种子，缓冲液，小花盆五、实验步骤（一）培养不同pH条件下生长的小麦1、先将小麦种子进行预处理，在培养皿中浸泡两天2、将浸泡后的小麦种子平均播种到10个小盆中（内装有一定厚度的石英砂）3、分别用pH值311浓度0. 05 mol/ L的缓冲溶液灌溉至石英砂湿润,重复3 次,置培养箱中培养4、播后第7天加入
5、培养液，并调节pH值；以后每星期冲洗沙 基1次,更换培养液,调节pH值5、培养一段时间后，取小麦的叶片进行叶绿素含量的测定（二）叶绿素a和叶绿素b含量的测定1、提取叶绿素选取有代表性的小麦叶片数张，于天平上称05g, 剪碎后置于研体中，加入5ml纯丙酮，少许CaCO3和石英砂。 仔细研磨成匀浆，用滤斗过滤到10m l量筒中，注意在研钵中 加入少量80%丙酮将研钵洗净，一并转入研钵中过滤到量筒 内，并定容至10ml。将量筒内的提取液混匀，用移液管小心 抽取5ml转入25ml量筒中，再加入80%丙酮定容至25ml (最终 植物材料与提取液的比例为W： V = 0.5： 50 = 1： 100,叶色
6、 深的植物材料比例要稀释到1： 200)。2、测量光吸收 利用722分光光度计，分别测定叶绿素提取液在645nm和663nm下的吸光度。3、计算 将测得的数值代入到公式(5)(6)(7)中，计算出叶绿素a、叶绿素b和总叶绿素的浓度。最后要计算出单位 叶片鲜重中叶绿素的含量：叶绿素a含量(mg/g鲜重)=CaX50ml(总体积数)X 1ml/1000ml/L 4-0.5g=0.1Ca叶绿素b含量(mg/g鲜重)=01Cb 总叶绿素含量(mg/g鲜重)=0.1CT注明：小组成员：蔡静(00911107) 陈荟(00911108) 朱晨晨(00911132) 朱靖叶(00911133)徐幼晴（00905128）
pH值对小麦叶叶绿素含量的影响
