HPLCA工作站操作手册

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1、HPLC- 1100型高效液相色谱仪-化学工作站操作步骤二极管阵列检测器（DAD）开机关机开机1. 开PC机，进入 Window N.T 4.0桌面。2. 开 LC 各部件。接通电源后，各部件 LED 指示灯显绿色。待通讯自检成功，在线脱 气机的右上角黄灯灭，而四元泵、柱温箱和检测器的右上角黄灯亮。点击start -Programs| Chemstation |instrument2 online | 图标, 进入 online 工作站的 Method & Run Control 界面。3. 系统初始化（目的：排气泡）（1）打开LC仪的Purge阀，调大流量至5 ml/min，分别以100%

2、A （H0）和 100% B溶剂（如MeOH）冲洗A、B通道至无气泡。（2）调低流量及调节B溶剂百分比至所需值后，关闭Purge阀。1 系统平衡（目的：稳定色谱柱、柱温箱温度、及 DAD 灯能量等）。（1）调出方法。由Method菜单一点击Load Method选中所需方法, OK。（以 5倍以上死体积的流动相冲洗平衡色谱柱，约需 30 min）（2）适当时刻（进样前10分钟）点击System onl ,以保证温度及灯能量稳定。（3）打开 online signal 窗口,测基线。待基线平稳后即可进样。5 填写样品信息。由Run control菜单，点击sample information ,

3、输入对样品的描述。6 运行方法或进样。对自动进样器，点Run methodi ；对手动进样，则先将手动进样阀搬至Load位置，再将吸好样品的平头针注射器插入阀的进样孔推针进样，并快 速将进样阀由Load位置顺时针搬至inject位置，然后再取下注射器洗净备用，并用 干净的溶剂清洗进样口。7 由进样阀注入定量环中的样品，在 inject 位置被高压系统的淋洗液带入分离柱分 离，化学工作站控制自动检测信号、收集并分析处理数据。样品分析完毕，屏幕即 根据Method所设定的积分参数及报告格式，自动积分并显示结果。选print打印结 果；点击close则回到主画面。重复5、6步骤进行多个样品分析。关机

4、1. 样品分析完毕后，先关检测器的UV /VIS灯，登记仪器运行时间及使用情况。2. 用较强的溶剂如：100%的（MeOH）甲醇或（CAN）乙腈以1 ml/min的流量，冲洗柱 子 2030 分钟，注射器洗净放好。3. 关闭各程序窗口，关闭显示屏仪器各部件图标，关计算机，然后关仪器各部件电源。4. 废液拿走，妥善处理或回收再用，注意保护环境，切勿乱倒。二 、建立方法步骤一）优化仪器参数，建立分离方法1.进入工作站的 Method & Run Control 界面。单击 Method，选 Edit Entire Method。2 在 Edit Method Instrument2 对话框，从方法

5、所包含的下列 4 项，通过点中前面的空白格 选欲编缉项。Method InformationInstrument/AcquisitionData analysisRun Time checklist （注：未选中的项表示不被编缉，使用原方法参数设置）3. 在弹出的 Method Information Instrument2 对话框 ，填写对方法描述信息。4. 进入仪器参数设置（ 1） 在弹出的 Setup pump 对话框，输入泵操作参数 。在 control 栏, 输入流量 Flow , *stop time, *post time在solvents栏,输入溶剂A如（H2O）的、溶剂B女口

6、 （MeOH）的 %。在 pressure limits 栏 的 Max 和 Min 右边，输入压力高限和低限(可设为正常操作压力土 20 bar，或设Max为柱子最高承受压力的1/2 )在 time table 栏, 输入梯度洗脱时间表。( 也可通过单击任一图标，即可进入该模块参数设置。如 溶剂的设置：点输液泵图标，选Setup pump，在Solvents栏中输入A、B、C、D溶剂名称；点溶 剂瓶图标，在Solvent Bottles Filling中输入A、B、C、D各溶剂的实际体积数，点OK 确定并退出。 )* stop time 泵停止采集数据时间，但泵仍在运行。* post tim

7、e 由采样结束，至下一次采样时间。(2) 在柱温箱参数设置界面，选Not controlled点OK.( 3) 检测器 DAD 参数设置在Signals栏,输入AE 5个可选通道的样品检测波长Sample和带宽BW及参比波长Refrence和带宽BW。在Spectrum栏,Range-输入光谱波长采集范围Store -输入存储方式Step-输入采谱步长在 time 栏, 输入与泵相同的参数在 Required lamp选所需的灯 UV or VIS在 Peak width 输响应时间(一般选 0.1)在 Outbalance 选 prerun在 Slit 输入可选狭缝值 如：1,2,4,8 1

8、6 nm在 time table 输时间表。 所有参数设好后，点 OK。5. 输入运行时间表(Run Time checklist)选择方法中要执行的项目。(方法中虽然规定了仪器采集、数据分析参数，但是否执行，服从该表规定)6. 保存方法。由 Method 选 Save method as ，输文件名。7. 用单个样品或标准混合样运行、查看、和修改方法，直至方法满足所需分离要求。(1) 、选择监控信号。由View选online signal，在Edit signal plot窗口，单击选所要监控的信号。(2) 、 填写样品信息。由 Run control 菜单，选 Sample informa

9、tion ，填写样品信息。(3) 、运行方法。基线稳定后，点 Run Method 。4)、观察采集的图谱结果，看是否满意，若满意，保存方法；否则 ，改变仪器参数或实验条件，再进样观察，直至方法满足所需分离要求 。5)、点 Save method 保存方法。二) 、数据处理(包括优化图谱、优化积分参数、建立校正表 、设报告格式4项)1、 配制系列混合标准液样品(浓度范围应包括未知样的)，逐一进样运行方法。收集 保存数据。然后进入 Data Analysis 界面。2、调用低浓标样数据，优化图谱显示及图谱加注。由Filel菜单f点load signal f选中数据文件，点OK。 由graphic

10、l菜单f点Signal Options f选Full(LC)/ Outscal(GC),点OK,或点击色谱控制图标及图谱优化图 标；再由graphic菜单f点New Annotation加标注。3、优化积分参数。由 Integration菜单f 点 Auto integrate,若不满意积分结果，再点 Integration Event, 设置适当的 Area Reject 及 Height Reject 等积分参数，和使用开关积分器 Integrator ON/OFF (以去掉对不感兴趣的峰的积分)，点击积分图标，若满意 则点击存储积分事件到方法图标，再由File f点Save Met ho

11、d，保存方法。4、建立校正表建1级校正表(1) 由 Calibration 菜单点 Signal Details，选定所信息。点 Add to Method 点 OK。(2) 由Calibration菜单，点Calibration Setting.输入标题、浓度单位、校正曲线类 型、原点处理、Rt.窗口等，点OK。(3) 由 Calibrationf 选 New Calibration Tablef 在 Level 输 1,点 OK。(4) (在弹出的 Calibration Table 中，输入化合物名称、浓度，选择参比峰 内标及内标号。建多级校正表(5) 调第二浓度标样，建2级校正表。由F

12、ile f load signal调第2浓度标样 数据文件，由Calibrationf选Add Level 2,输入该标样含量于校正表中。(6) 由File f load signal调第3浓度标样数据文件，由CalibratiOnf选AddLevel 3，输入该标样含量于校正表中。如此，可建立4、5、6等多级校 正表。(7) 再由Filef Save Met hod,或点击保存图标，保存方法。再校正 Recalibrate(当校正曲线点如2浓度点发生偏移，需要对相应浓度点做再校正时进行)(1) 由 Methodf load Method(2) 输入样品信息，进一针相应浓度标样，运行方法，收集

13、数据。(3) 调信号文件。由 函 f点load signal f选中数据文件，点0K(4) 由Calibrationf选Recalibrate输入再校正Level 2f再选再校方式(Avg. or Replace) ， 点 OK5、设定报告形式(1) 由 Report fSpecify report 设定报告界面。(2) 在Destination选输出目的地(一般选屏幕Screen，需要时再选Printer 打印;若以File输出，应注文件类型)(2) 在 Quantitative Results Calculate 输所选定量计算方式(ESTD & ISTD 等六种可选方式)(3) 在 St

14、yle 栏输入报告方式、类型(共有 Shot、 Detail、 performance及 performance Noise 等 16 种报告格式)。三 附录) 溶剂的预处理和使用注意事项不干净的溶剂或在溶剂瓶中长菌的溶剂，会阻塞溶剂过滤器，降低泵的性能 请遵从下列建议，以提高泵性能、延长溶剂过滤器的寿命：& 使用无菌溶剂瓶，避免溶剂长菌。& 用滤膜过滤溶剂，去除微生物。& 每二天更换或过滤溶剂。& 避免溶剂瓶直接日照。d 各种脱液应分别过滤，注意有机相和水相应使用不同的滤膜。皿避免使用下列对不锈钢有腐蚀性的溶剂：皿卤化物碱金属溶液和相应的酸溶液皿高浓度的无机酸例如：硝酸和硫酸皿 能够形成卤素

15、自由基或酸的卤化物试剂及其混合物皿含有过氧化物的色谱级醚必须用氧化铝干燥剂过滤吸收氧化物皿 在有机溶剂中的有机酸溶液皿含有强络合剂的溶液皿四氯化碳和异丙醇或THF混合物此外，使用流动相时，千万注意溶剂的互溶性，避免形成乳化液滴毁坏柱子！，可使用异 丙醇作为过渡溶剂，实验室至少应备有一瓶色谱纯的异丙醇，以作过渡溶剂或用以清洗备件。二）常用溶剂的紫外吸收SolventUV Cutoff (nm)AAcetonitrile乙腈190AWater水190ACyclohexane环己烷195AHexane正己烷200AMethanol甲醇210AEthanol乙醇210ADiethyl Ether 乙醚

16、220ADichloromethane二氯甲烷220AChloroform三氯甲烷240ACarbon Tetrachloride四氯化碳265ATetrahydrofuran四氢氟喃280 (210)AToluene甲苯280此处给的是常用溶剂的截止波长，（即该溶剂在此处的吸收=1AU ）采集色谱数椐时，样品波长应至少大于所用溶剂的截止波 20nm 以上。三）色谱柱的保护 使用前应过滤所有的溶剂，除非是PHLC纯级溶剂。对样品进行预处理，去除杂质和强保留组份。用洗脱强度大的溶剂经常冲洗柱子。 注意柱子的pH值使用范围，流动相pH值范围在37，若超出此范围须使用预柱。仪器使用完毕要冲洗整个系统，移走系统中缓冲液。不要高压冲洗柱子。避免高温使用柱子，应60C。 保存柱子前，要彻底冲洗柱子，并把柱子保存在适当的溶剂中，柱子两端密封。 避免不适当的破坏柱子，如猛击、跌落或过份拧紧接头。北京大学化学学院，应化系新能源与新材料实验室Made by S.F.Chen in 02/7/5HPLC- 1100型高效液相色谱仪化学工作站操作规程 二极管阵列检测器（ DAD）北大化学学院应化新能源与新材料实验室