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1、实验七：革兰阳性球菌的鉴定（一）金黄色葡萄球菌的鉴定细菌学检验的一般程序一、直接涂片检查二、培养及鉴定一、直接涂片检查1.将待检标本直接涂片染色。2.将待检标本离心后涂片染色。3.染色根据需要可分：革兰染色、抗酸染色、墨汁染色，乳酸酚棉兰染色等。二、常规培养及鉴定1.接种：待检标本根据需要接种到相应培养基上。35培养1824h。（有的标本需要肉汤增菌后再接种。）（5%10%CO2）2.分离：挑去目的菌（致病菌）接种血平板和其他选择培养基上，35培养1824h。3.观察菌落形态特征：大小、湿润度、色素、形状（圆形？光滑？凸起？）、溶血状况及气味等。4.观察细菌镜下特征：革兰染色后油镜下观察。染色
2、性、形态、排列、大小及某些特殊结构。5.生化反应：根据不同科、属、种的细菌的生化反应特征以无菌操作接种恰当的培养基，以鉴别和鉴定细菌。35培养1824h，观察结果。6.药敏试验：以CLSI文件为指南选择恰当的抗菌药物，采用K-B法和MIC法检测该细菌对各种抗菌药物的敏感性，35培养1824h。7.做出检验结论，发出报告。临床常见病原性革兰阳性球菌可分为：葡萄球菌属；链球菌属和肠球菌属。它们分别属于微球菌科和链球菌科。微球菌科与链球菌科的鉴别特征 微球菌科 链球菌科菌落大小 中等 小色素 多有 多无营养要求 不高 高排列方式 葡萄/四联/八叠 链/成双/四联溶血性 +/-+/-触酶 +-一、目的
3、和要求1.掌握金黄色葡萄球菌的菌落特征和油镜下经革兰染色后染色特征及菌体形态。2.掌握鉴定金黄色葡萄球菌常用的生化反应及鉴定的思路。二、器材与试剂1.菌种：号某株待鉴定葡萄球菌，号金黄色葡萄球菌标准菌株ATCC25923。2.培养基 DAN酶平板及葡萄球菌属O/F培养基、蕈糖、甘露醇、麦芽糖、蔗糖、尿素、鸟氨酸脱羧酶 微量生化反应管。3.试剂 革兰染液、3%过氧化氢、新鲜EDTA抗凝的人血浆、1mol/L盐酸。4.其他 生理盐水、接种环、接种针、酒精灯、载玻片等。三、操作步骤1.观察并描述血平板上待测菌的菌落特征：金黄色葡萄球菌在血平板上形成圆形、光滑、半透明、轻微凸起、边缘整齐，绝大多数菌株
4、有奶油样黄色素、直径23mm大小且有透明溶血的菌落。2.革兰染色：（染色性与形态）革兰阳性球菌，G+c，直径0.51.5 m，呈单个、成双或葡萄串状排列。在液体培养基中或脓汁中成短链状排列。3.生化反应：无菌操作做以下试验：1）触酶：+2）血浆凝固酶试验：玻片法+，试管法+。3）其他生化反应：无菌操作接种以下培养基35培养1824h，记录结果。a.葡萄球菌属O/F培养基：Fb.DNA酶：+c.蕈糖+，甘露醇+，麦芽糖+，蔗糖+,尿素+。d.鸟氨酸脱羧酶-，木糖-，4.综上：该细菌鉴定为：金黄色葡萄球菌。鉴定金黄色葡萄球菌的思路1.定微球菌科的试验：革兰染色为阳性球菌，G+c；触酶试验，+。2.
5、定葡萄球菌属的试验:O/F（F）3.定金黄色葡萄球菌种的试验：血浆凝固酶（玻片法+，试管法+），DNA酶试验+，蕈糖+，甘露醇+，麦芽糖+，蔗糖+，尿素酶试验 d，鸟氨酸脱羧酶试验-，木糖-。葡萄球菌与革兰阴性杆菌葡萄球菌与革兰阴性杆菌O/F培养基培养基Hugh-Leifson培养基配方：培养基配方：蛋白胨蛋白胨 2g氯化钠氯化钠 5g磷酸氢二钾磷酸氢二钾 0.3g琼脂琼脂 4g葡萄糖葡萄糖 10g0.2%溴麝香草酚蓝溶液溴麝香草酚蓝溶液 12ml蒸馏水蒸馏水 1000mlpH7.2写实验报告要求1.描述菌落特征。2.描述油镜下经革兰染色后菌体形态及染色特征。3.记录生化反应结果。4.得出结论：该细菌鉴定为金黄色葡萄球菌。
微生物实验课件：实验七 革兰阳性球菌的鉴定（一）—金黄色葡萄球菌的鉴定
