磁珠纯化原理
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1、磁珠纯化原理TTA standardization office【TTA 5AB- TTAK 08- TTA 2C】磁 珠 法 纯 化 D N A 原 理磁珠法核酸纯化技术采用了纳米级磁珠微珠,这种磁珠微珠的表面标记了一种官能团,能同核酸 发生吸附反应。硅磁(Magnetic Silica Particle)就是指磁珠微珠表面包裹一层硅材料,来吸附核酸,其纯化原理类型于玻璃奶的纯化方式AMPure bead : NaCl,7% PEG8000标准的AMPure xp是用来筛选掉100bp的DNA片段,通过改变PEG8000的含量可改变至(MAX 300bp,MIN 50bp),PEG8000的
2、浓度越高越能筛选出片段小的DNAStreptavidin magnetic bead (链霉亲和素磁珠):Streptavidin(SA)链霉亲和素,magnetic磁性的,亲和素能与生物素之间存在强度最高的非共价作用(称作BAS系统)二者结合形成复合物的解离常数很小,呈不可逆反应性;而且酸、碱、 变性剂、蛋白溶解酶以及有机溶剂均不影响其结合。玻璃奶:是一种白色硅颗粒,能到50kb大小的DNA(双链,单链,线状,超螺旋),结合原理:在高盐状态下,玻璃奶周围的负电荷被打破,并允许DNA磷酸负电荷与玻璃奶特异性结合,在低盐时(H20或1X TE)溶解分离DNA100bp时,低盐状态下结合率高;pH时,结合 率高。氧化硅羟基磁珠:此种微球具有核壳结构,即超顺磁性核心以及无机氧化硅外壳,硅烷醇集团(羟基)在chaotropic (盐酸胍、异硫酸氰胍等)存在条件下,能够与溶液中的核酸通过疏水作 用、氢键作用和静电作用等发生特异性结合,而不与蛋白质和其它杂质结合氧化硅羧基磁珠:该磁珠表面修饰有羧基官能团,能够在特殊试剂(如EDC)作用下将蛋白、寡 聚核苷酸等生物配体共价偶联到磁珠表面,可应用在蛋白纯化,核酸纯化,亲和层析等领域。
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