香豆素和木脂素课堂PPT

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1、木脂素和香豆素木脂素和香豆素第一节第一节 木脂素木脂素木脂素是一类由苯丙素双分子聚合而成的天然成分，组成木脂素的单体有四种：桂皮酸，偶有桂皮醛。桂皮醇。丙烯苯。烯丙苯。分类依据：按木脂素的基本碳架和缩合情况进行分类。理化性质理化性质v1物理性状物理性状 白色结晶、不挥发。白色结晶、不挥发。v2.溶解性溶解性 游离木脂素游离木脂素-亲脂性亲脂性 木脂素苷木脂素苷-水溶性增大，并易被酶或酸水解水溶性增大，并易被酶或酸水解 具酚羟基木脂素具酚羟基木脂素-可溶于碱水中。可溶于碱水中。3.显色反应显色反应1.Labat reaction:鉴定鉴定5%没食子酸溶液没食子酸溶液+浓浓H2SO4，呈，呈绿色绿

2、色（+）。）。2.Emerson reaction:酚羟基对位酚羟基对位无无取代基取代基NoImage3.Gibbs reaction:判断判断-OH对位有无取代基。对位有无取代基。Gibbs 试剂是试剂是2，6-二氯（溴）苯醌氯亚胺，二氯（溴）苯醌氯亚胺，其在弱的碱性条件下与酚其在弱的碱性条件下与酚对位活泼氢对位活泼氢缩合成缩合成兰色物。兰色物。有游离酚有游离酚-OH,且且-OH对位对位无无取代者（取代者（+）对位对位有有取代者（取代者（-）。）。多用来判断多用来判断C6C6位是否有取代基位是否有取代基存在存在。4.异羟肟酸铁反应：异羟肟酸铁反应：碱性条件碱性条件下，内酯开环，与盐酸羟胺中的

3、羟基下，内酯开环，与盐酸羟胺中的羟基缩合生成缩合生成异羟肟酸异羟肟酸，然后在，然后在酸性条件酸性条件下与三价下与三价铁盐络合而显铁盐络合而显红色红色。鉴别鉴别v 理化鉴别 常用的有亚甲二氧基官能团特征性的鉴别反应，如Labat反应和Ecgrine反应等。但由于该鉴别反应的干扰因素较多，专属性较差。v 色谱鉴别 取五味子粉末1g,加三氯甲烷20ml,加热回流30min,滤过，滤液蒸干，残渣加三氯甲烷1ml使溶解，作为供试品溶液。另取五味子对照药材1g，同法制成对照药材溶液。再取五味子甲素对照品，加三氯甲烷制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。吸取上述三种溶液各2L，分别点于同一硅胶GF25

4、4薄层板上，以石油醚（3060）-甲酸乙酯-甲酸（15：5：1）的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外灯（254nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。v 化学法 取本品粗粉约1g加水10ml，浸渍10min，时时振摇，滤过，滤液浓缩至23ml，加5倍量的乙醇，强烈振摇5min，滤过，滤液挥去乙醇，加水稀释至10ml，加活性炭少量，振摇后滤过。取滤液2ml，加氢氧化钠试液中和后，加硫酸汞试液1滴，煮沸，滤过，滤液加高锰酸钾试液1滴，紫红色即消失，并发生白色沉淀。含量测定含量测定（一）变色酸比色法（一）变色酸比色法测定具有亚甲二氧基的木脂素测定具

5、有亚甲二氧基的木脂素CH3OOH3COH3COOCH3H3COCH3OCOOH五味子酯甲五味子酯甲-五味子素五味子素总木脂素总木脂素1.TLC法法 吸附剂吸附剂 硅胶硅胶G 展开剂展开剂 三氯甲烷，苯三氯甲烷，苯2.HPLC法法 填充剂填充剂 C18 流动相流动相 乙腈乙腈-水，甲醇水，甲醇-水水 检测器检测器 UV（二）色谱法（二）色谱法单木脂素单木脂素例例 护肝片护肝片 Ch.P.（2010）【处方处方】柴胡，茵陈，板蓝根，柴胡，茵陈，板蓝根，五味子五味子，猪胆粉，绿豆，猪胆粉，绿豆 【含量测定含量测定】HPLC法法 固定相固定相 C18 流动相流动相 甲醇甲醇-水（水（63:37）检测波

6、长检测波长 250nm 对照品对照品 五味子醇甲五味子醇甲 供试液供试液 乙酸乙酯加热回流，蒸干，甲醇乙酸乙酯加热回流，蒸干，甲醇 溶解残渣溶解残渣香豆素是香豆素是邻羟桂皮酸内酯邻羟桂皮酸内酯，具芳香甜味。其结构母核为：，具芳香甜味。其结构母核为：苯骈苯骈-吡喃酮吡喃酮OHOOO12367845苯骈苯骈 -吡喃酮吡喃酮（Chromone)OHO第二节第二节 香豆素香豆素物理性质：物理性质：为白色晶体，溶于乙醇、氯仿、乙醚，不溶于水，较为白色晶体，溶于乙醇、氯仿、乙醚，不溶于水，较易溶于热水易溶于热水。显色反应：显色反应：1.异羟肟酸铁反应异羟肟酸铁反应 碱性条件下，香豆素碱性条件下，香豆素内酯

7、内酯可开环，可开环，与盐酸羟肟与盐酸羟肟缩合缩合成异羟肟酸，然后在酸性条件下与三价成异羟肟酸，然后在酸性条件下与三价铁离子络合呈红色。铁离子络合呈红色。2.三氯化铁反应三氯化铁反应 含有酚羟基的香豆素可与三氯化铁含有酚羟基的香豆素可与三氯化铁试剂产生颜色反应。试剂产生颜色反应。理化性质理化性质v3.Gibbs3.Gibbs反应反应 2 2，6-6-二氯（溴）苯醌氯亚胺，在弱二氯（溴）苯醌氯亚胺，在弱碱性条件下可与酚羟基对位的活泼氢缩合成蓝色碱性条件下可与酚羟基对位的活泼氢缩合成蓝色化合物。化合物。v4.Emerson4.Emerson反应反应 氨基安替比林和铁氰化钾，可与氨基安替比林和铁氰化钾

8、，可与酚羟基对位活泼氢生成红色缩合物。酚羟基对位活泼氢生成红色缩合物。v3 3、4 4都要求香豆素分子中必须有游离的酚羟基，都要求香豆素分子中必须有游离的酚羟基，且酚羟基对位没有取代基时才呈阳性反应。且酚羟基对位没有取代基时才呈阳性反应。v荧光特征 香豆素类化合物多为无色或淡黄色结晶，有紫外吸收，且在紫外光下多显蓝色或紫色荧光，在碱性溶液中荧光增强。v光谱特征 未取代的香豆素在274nm和311nm处呈现两个吸收峰。母核上引入取代基，其吸收峰发生相应的位移。含酚羟基的香豆素，在碱性溶液吸收峰红移，且吸收强度增强。鉴别鉴别v 化学反应法 利用异羟肟酸铁反应、三氯化铁试剂反应、重氮化反应、Gibb

9、s反应等可对香豆素类成风进行鉴别。v 荧光法 羟基香豆素大多能产生荧光，利用此性质可进行鉴别。可直接观察提取溶液的荧光，也可观察薄层荧光斑点。v 薄层色谱法v 白芷的薄层定性分析白芷的薄层定性分析v 取白芷粉末取白芷粉末0.5g，加乙醚，加乙醚10ml，浸泡，浸泡1h，时时振摇，滤，时时振摇，滤过，滤液挥干乙醚，残渣加醋酸乙酯过，滤液挥干乙醚，残渣加醋酸乙酯1ml使溶解，作为供使溶解，作为供试品溶液。另取欧前胡素、异欧前胡素对照品，加醋酸乙试品溶液。另取欧前胡素、异欧前胡素对照品，加醋酸乙酯制成每酯制成每1ml含含1mg的混合液，作为对照品溶液。的混合液，作为对照品溶液。v 吸取上述两种溶液各

10、吸取上述两种溶液各4l，分别点于同一以羧甲基纤维素，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以石油醚（薄层板上，以石油醚（3060）-乙乙醚（醚（3：2）为展开剂，在）为展开剂，在25以下展开，取出，晾干，置以下展开，取出，晾干，置紫外灯（紫外灯（365nm）下检视。供试品色谱中，在与对照品色）下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相对应的位置上，显相同颜色的斑点。谱相对应的位置上，显相同颜色的斑点。含量测定含量测定v分光光度法 利用香豆素类成分的显色反应进行比色测定。举例：补骨脂素注射液的含量测定，可在样品中加入重氮化试剂，生成紫色偶氮染料，于580nm处测定含量

11、。利用香豆素类成分都具有紫外吸收，样品较纯时，也可进行分光光度法测定。举例：消痔液中补骨脂素的测定，检测波长246nm。v 说明：中药制剂成分复杂，可先用薄层色谱分离，在紫外灯下荧光定位，找出香豆素成分，将其吸附层刮下，用适宜溶剂洗脱，再加入重氮化试剂，进行比色测定。如健腰丸中补骨脂素、异补骨脂素的测定。但应同时进行空白试验及净化回收率实验。v 荧光光度法 羟基香豆素成分大多能产生强烈荧光大多能产生强烈荧光，用荧光光度计进行荧光测定有较高的灵敏度及选择性。当干扰成分较多时，可先用色谱法净化。可先用色谱法净化。v 薄层扫描法 样品经薄层分离后，于荧光灯下定位，利用香豆素类成分利用香豆素类成分具有

12、紫外吸收或能产生荧光的特性具有紫外吸收或能产生荧光的特性，不经显色，直接进行荧光扫描测定。举例：复方制剂中补骨脂素，异补骨脂素，白瑞香素，欧前胡素等。v 气相色谱法气相色谱法 某些相对分子质量小，具有挥发性某些相对分子质量小，具有挥发性的香豆素类成分。可用气相色谱法测定（如蛇床子素，香柑内素，花椒毒素，花椒毒酚等）常用检测器：SE-30石英毛细管柱，氢火焰离子化检测器。高效液相色谱法高效液相色谱法v 高效液相色谱法 由于香豆素类成分含有芳香环及其他共轭结构芳香环及其他共轭结构，用高效液相色谱法测定，紫外检测器检测，有较高灵敏度。常用固定相：十八烷基硅烷键和硅胶 常用流动相：不同比例的甲醇-水 举例：补骨脂素，欧前胡素，蛇床子素，白花前胡甲素。