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1、2021/8/61细菌病的实验室诊断方法细菌病的实验室诊断方法2021/8/62学习目标n知识目标q掌握细菌病实验室诊断的方法q理解利用各种诊断方法的进行鉴定的意义n能力目标q具备结合临床病例设计实验室诊断方案的能力2021/8/63主要内容n病料的采集、保存和运送病料的采集、保存和运送n细菌的形态学检查细菌的形态学检查n细菌的分离培养细菌的分离培养n生化试验生化试验n动物接种动物接种n血清学试验血清学试验n分子生物学技术分子生物学技术2021/8/64重点与难点n重点q细菌病实验室诊断的方法n难点q设计实验方案 2021/8/65细菌病的实验室诊断 初诊：根据流行病学、症状、病变等方面的疾病
2、特征，做出初步诊断 通过实验室诊断，确定病原是否是细菌以及病原菌的类型实验室诊断是在临床诊断的基础上进行的2021/8/66细菌病实验室诊断方法n病料的采集、保存和运送病料的采集、保存和运送n细菌的形态学检查细菌的形态学检查n细菌的分离培养细菌的分离培养n生化试验生化试验n动物接种动物接种n血清学试验血清学试验n分子生物学技术分子生物学技术2021/8/67病料的采集、保存和运送n病料采集遵循的原则q防止污染 无菌采样 适时采样 适当部位n病料采集方法（不同病料不同方法）q实质脏器 液体材料 其他病料n病料的保存和送检2021/8/68防止污染n动物剖检动物剖检n个人防护和消毒个人防护和消毒n
3、动物尸体处理动物尸体处理n废弃物处理废弃物处理2021/8/69动物剖检n剖检场所：应选择便于消毒、不渗水的解剖检场所：应选择便于消毒、不渗水的解剖地点，最好有专门的剖检场所和剖检剖地点，最好有专门的剖检场所和剖检台台。n剖检前，动物尸体应浸泡消毒。剖检前，动物尸体应浸泡消毒。2021/8/610个人防护和消毒n做好个人防护：剖检过程中，注意个做好个人防护：剖检过程中，注意个人防护。人防护。n剖检后的器械浸泡消毒后洗刷。剖检后的器械浸泡消毒后洗刷。2021/8/611动物尸体焚烧炉深埋（投入消毒药）动物尸体处理n焚烧或深埋：剖检后动物尸体和病料焚烧灭菌焚烧或深埋：剖检后动物尸体和病料焚烧灭菌或
4、消毒深埋。或消毒深埋。2021/8/612垃圾直接洗刷处理不当会引起人和动物疫病的散播动物或人的传染病废弃物处理2021/8/613无菌采样n目的 q 防止病料被污染n方法q所用器械和器皿必须灭菌q点燃酒精灯q注意无菌操作2021/8/614适时采样n细菌丰富增殖时期、病料应该新鲜：细菌丰富增殖时期、病料应该新鲜：取濒死动物或刚死亡的动物。取濒死动物或刚死亡的动物。n死亡动物采集病料夏天不宜迟于死亡动物采集病料夏天不宜迟于68h，冬天不迟于，冬天不迟于24h。2021/8/615适当部位n选择病料的部位可采用两个原则q第一原则：根据疾病的类型和表现采集病变最典型的部位q第二原则：一般采集正常无
5、菌的部位2021/8/616典型采样心包积液脑部病变2021/8/617实质脏器的采集n剖开体腔后，立即采集，置于无菌容器内。n污染或剖开过久的被检器官：先烧烙表面，然后在烧烙的深部取一块实质脏器，放在灭菌容器内。n如有细菌检验条件，可在剖检后直接做病料的触片染色和细菌的分离培养。2021/8/618液体病料的采集n脓汁、胸水一般用灭菌的棉棒或吸管吸脓汁、胸水一般用灭菌的棉棒或吸管吸取放入试管内，塞好棉塞送检。取放入试管内，塞好棉塞送检。n血液可无菌操作从静脉或心脏采血，然血液可无菌操作从静脉或心脏采血，然后加抗凝剂（每后加抗凝剂（每1ml血液加血液加3.8%枸橼酸枸橼酸钠钠0.1ml）。）。
6、n若需分离血清，则采血后放在灭菌的容若需分离血清，则采血后放在灭菌的容器中，摆成斜面，待血液凝固析出血清器中，摆成斜面，待血液凝固析出血清后，再将血清吸出，置于另一灭菌试管后，再将血清吸出，置于另一灭菌试管中送检。中送检。2021/8/619其他病料的采集 n皮肤要取有病变且带有一部分正常皮肤的部位。皮肤要取有病变且带有一部分正常皮肤的部位。n被毛或羽毛取病变明显部位，并带毛根放平皿。被毛或羽毛取病变明显部位，并带毛根放平皿。n胎儿可将流产胎儿送往实验室，也可用吸管或注射器胎儿可将流产胎儿送往实验室，也可用吸管或注射器吸取胎儿胃内容物放入试管送检。吸取胎儿胃内容物放入试管送检。n肠道及内容物需
7、选择病变最明显的部分，将其中内容肠道及内容物需选择病变最明显的部分，将其中内容物去掉，用灭菌水轻轻冲洗后放平皿内。物去掉，用灭菌水轻轻冲洗后放平皿内。2021/8/620细菌性病料的保存和送检n低温保存n尽快送检n做好记录q畜主姓名、动物种类、地址、发病情况、欲检部位及检验项目、采集时间等2021/8/621细菌的形态学检查n方法q光学显微镜检查q电子显微镜检查n意义q观察病料中有无细菌以及细菌的形态、数量、分布、结构、种类等，进行初步判断2021/8/622细菌的分离培养n方法：用分区划线法在合适培养基上培养n意义q看培养基中有无细菌生长推断是否为细菌病q依据菌落的特征判断细菌种类q用菌落中
8、的细菌进一步作形态学鉴定q可进一步作生化鉴定、血清学鉴定及动物试验q可进一步作药敏试验2021/8/623分离培养n通常选用适合目标菌生长的平板培养基对细菌进行分离培养。q不同细菌的菌落大小、形态、色泽、表面特征、边缘状态、隆起度、透明度等特征不同。有的细菌在鲜血琼脂平板上形成溶血环。n 也可采用选择培养基或鉴别培养基，以起到抑制杂菌或快速鉴别的效果。q比如肠道杆菌科可选择麦康凯琼脂、伊红美蓝琼脂。2021/8/624分区划线法2021/8/625不同细菌的菌落大小、形态、色泽、表面特征、边缘状态、不同细菌的菌落大小、形态、色泽、表面特征、边缘状态、隆起度、透明度等特征不同隆起度、透明度等特征
9、不同不同细菌的菌落2021/8/626溶血环有的细菌在鲜血培养基上有有的细菌在鲜血培养基上有-溶血现象溶血现象2021/8/627伊红美蓝培养基、麦康凯培养基上大肠杆菌菌落2021/8/628细菌的生化试验n进行生化试验的细菌必须是纯培养物。n检验时，根据可疑细菌的生化特性选择特定的一组生化试验，将结果与标准进行对比，以确定病原菌的种类。q例：不同种沙门氏菌的生化鉴定2021/8/629鸡白痢沙门氏菌鸡伤寒沙门氏菌鼠伤寒沙门氏菌不同种沙门氏菌的生化鉴定2021/8/630n意义意义q将待检细菌液接种到动物体内，观察动物发病情况，进一步确认可疑细菌的致病作用和类型。n接种对象q本动物q试验动物n
10、接种途径动物接种2021/8/631灌口肌肉注射腹腔注射皮下注射脑内接种静脉注射常用的动物接种途径2021/8/632血清学试验n临床诊断中，可用于细菌的血清分型、快速诊断或大群检疫。q用已知抗体检测动物体内的病原菌q用已知的病原菌抗原检测动物血清中的抗体例：鸡白痢的检疫2021/8/6331、加一滴抗原2、加一滴鸡的全血3、将抗原和血液混匀4、静置2min,观察结果鸡白痢检疫全血平板凝集试验2021/8/634鸡白痢检疫结果2021/8/635分子生物学方法n分子生物学技术对病原菌的快速诊断和不能人工培养的细菌的探索发挥巨大的作用。q PCR技术、核酸分子杂交技术等。2021/8/636大肠
11、杆菌病实验室诊断方案病料中细菌的形态学检查病料中细菌的形态学检查病料中细菌的分离培养病料中细菌的分离培养1818小时后小时后动物致病性试验动物致病性试验涂片革兰氏染色涂片革兰氏染色生化试验生化试验H2SH2S试验试验糖发酵试验糖发酵试验MRMR试验试验1010日龄小鸡，皮日龄小鸡，皮下注射下注射0.2ml/0.2ml/只只病料病料纯培养纯培养2021/8/637大肠杆菌病实验室诊断结果 n剖检（采集病料）n纤维素渗出物的涂片染色n分离培养（麦康凯或伊红美蓝琼脂平板）n培养物涂片革兰氏染色n生化试验n动物接种试验2021/8/638大肠杆菌病纤维渗出物中的细菌2021/8/639伊红美蓝培养基、麦康凯培养基上大肠杆菌菌落2021/8/640大肠杆菌培养物涂片革兰氏染色2021/8/641大肠杆菌生化特性2021/8/642谢谢！谢谢！
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