常用染色液的配方

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1、一、常用染色液的配制 碘-碘化钾 I2-KI 溶液 能将淀粉染成蓝紫色,蛋白质染成黄色,也是植物组织化学测定的重要试剂;配方：碘化钾 2g；蒸馏水 300ml；碘 1g 先将碘化钾溶于少量蒸馏水中,待全溶解后再加碘,振荡溶解后稀释至 300mL,保存在棕色玻璃瓶内;用时可将其稀释 2-10 倍,这样染色不致过深,效果更佳;苏丹sudan或能使木栓化、角质化的细胞壁及脂肪、挥发油、树脂等染成红色或淡红色,是著名的脂肪染色剂;配方：1 苏丹 III 或苏丹干粉；95酒精 10ml；过滤后再加入 10ml 甘油 2 先将苏丹 III 或 IV 溶解在 50ml 丙酮中,再加入 70%酒精 50ml;

2、3 苏丹 III 70%乙醇的饱和溶液;1醋酸洋红 aceto carmine 酸性染料,适用于压碎涂抹制片,能使染色体染成深红色,细胞质成浅红色;配方：洋红 1g；45醋酸 100ml 煮沸 2h 左右,并随时注意补充加入蒸馏水到原含量,然后冷却过滤,加入 4铁明矾溶液 12滴不能多加,否则会发生沉淀,放入棕色瓶中备用;改良苯芬品红染色液 Carbol fuchsine 核染色剂;配制步骤：先配成三种原液,再配成染色液;原液 A：3g 碱性品红溶于 100ml 70酒精中;原液 B：取原液 A10ml 加入到 90ml 5石炭酸水溶液中;原液 C：取原液 B 55ml,加入 6ml 冰醋酸和

3、 6ml 福尔马林 38的甲醛;原液 A 和原液 C 可长期保存,原液 B 限两周内使用 染色液：取 C 液 1020ml,加 45冰醋酸 8090ml,再加山梨醇 1,配成 1020浓度的石炭酸品红液,放置两周后使用,效果显著若立即用,则着色能力差;适用范围：适用于植物组织压片法和涂片法,染色体着色深,保存性好,使用 23 年不变质;山梨醇为助渗剂,兼有稳定染色液的作用,假如没有山梨醇也能染色,但效果较差;中性红 neutral red 溶液 用于染细胞中的液泡,可鉴定细胞死活;配方：中性红；蒸馏水 100ml 使用时再稀释 10 倍左右;曙红 Y 伊红,eosin Y 酒精溶液 常与苏木精

4、对染,能使细胞质染成浅红色,起衬染作用;配方：曙红；95酒清 100ml 也常用于 95酒精脱水时,加入少量曙红溶液,其目的是在包埋、切片、展片、镜检时便于识别材料;钌红 ruthenium red 染液 钌红是细胞胞间层专性染料,其配后不易保存,应现用现配;配方：钌红 510mg；蒸馏水 25-50ml 龙胆紫 gentian violet 为酸性染料,适用于细菌涂抹制片;配方：龙胆紫1 g；蒸馏水 100ml 苯胺兰 aniline blue 溶液 为酸性染料,对纤维素细胞壁、非染色质的结构、鞭毛等,尤其是染丝状藻类效果好;还多用于与真曙红作双重染色,对于高等植物多用于与番红作双重染色;配

5、方：苯胺兰 1 g；35或 95酒精 100ml 间苯三酚 phloroglucin 溶液用于测定木质素;配方：间苯三酚 5g；95酒精 100ml 注：此溶液呈黄褐色即失效;橘红 Gorange G 酒精溶液 为酸性染料,染细胞质,常作二重或三重染色用;配方：橘红 G 1g；95酒精 100ml 番红 safranin O 为碱性染料,适用于染木化、角化、栓化的细胞壁,对细胞核中染色质、染色体和花粉外壁等都可染成鲜艳的红色;并能与固绿、苯胺兰等作双重染色,与橘红 G、结晶紫作三重染色;配方：1 番红水溶液番红或 1 g；蒸馏水 100ml 2 番红酒精溶液番红或 1 g；50或 95酒精 1

6、00ml 3 苯胺番红酒精染色液 甲液 番红 5 g+95酒精 50ml 乙液 苯胺油 20ml+蒸馏水 450ml 将甲、乙二溶液混合后充分摇均匀,过滤后使用;固绿 fast green 又称快绿溶液;为酸性染料,能将细胞质,纤维素细胞壁染成鲜艳绿色,着色很快,故要很好的掌握着色时间;配方：1 固绿酒精液固绿 g；95酒精 100ml 2 苯胺固绿酒精液固绿 1 g；无水酒精 100ml；苯胺油 4ml 配后充分摇匀,过滤后使用;现配现用效果好;苏木精 hematoxylin 染液苏木精是植物组织制片中应用最广的染料,是苏木科植物苏木的心材提取出来的;它是很强的细胞核染料,而且可以分化出不同

7、颜色;配方很多,现举海登汉氏Heidenhains 苏木精染色液,又称铁矾苏木精染色液;配方：甲液媒染剂：硫酸铁铵铁明矾 2-4g；蒸馏水 100ml 必须保持新鲜,最好临用之前配制 乙液染色剂：苏木精 ；95酒精 10ml；蒸馏水 90ml 配制步骤：1 将苏木精溶于酒精中,瓶口用双层纱布包扎,使其充分氧化通常在室内放置两个月后方可使用;2 加入蒸馏水,塞紧瓶口,置冰箱中可长期保存;切片需先经甲液媒染,并充分水洗后才能以乙液染色,染色后经水稍洗再用另一瓶甲液分色至适度;铁矾苏木精染液为细胞学上染细胞核内染色质最好的染色剂,但要注意甲液与乙液在任何情况下决不能混合;亚甲基蓝染液 常用于细菌、活

8、体细胞等的染色;取亚甲基蓝,溶于 100ml 蒸馏水中即成;詹纳斯绿 BJanus green B 染液 将 绿溶于 100ml 蒸馏水,配成饱和水溶液;用时需稀释;稀释的倍数应视材料不同而异;硫堇染液 取克硫堇也称劳氏青莲或劳氏紫粉末,溶于 100ml 蒸馏水中,即可使用;使用此液时,需要用微碱性自来水封片或用 1%NaHCO3 水溶液封片,能成多色反应;18.黑色素液 水溶性黑素 10g,蒸馏水 100mL,甲醛福尔马林;可用作荚膜的背景染色;19.墨汁染色液 国产绘图墨汁 40mL,甘油 2mL,液体石炭酸 2mL;先将墨汁用多层纱布过滤,加甘油混匀后,水浴加热,再加石炭酸搅匀,冷却后备

9、用;用作荚膜的背景染色;20.吕氏 Loeffier 美蓝染色液 A 液：美蓝 methylene blue,又名甲烯蓝,95%乙醇 30mL;B 液：;混合 A 液和 B 液即成,用于细菌单染色,可长期保存;根据需要可配制成稀释美蓝液,按 110或 1100 稀释均可;21.革兰氏染色液 1 结晶紫 cristal violet 液：结晶紫乙醇饱和液结晶紫 2g 溶于 20mL95%乙醇中 20mL,1%草酸铵水溶液 80mL;将两液混匀置 24h 后过滤即成;此液不易保存,如有沉淀出现,需重新配制;2 芦戈 Lugol 氏碘液：碘 1g,KI 2g,蒸馏水 300mL;先将 KI 溶于少量

10、蒸馏水中,然后加入碘使之完全溶解,再加蒸馏水至 300mL,即成;配成后贮于棕色瓶内备用,如变为浅黄色能使用;395%乙醇：用于脱色,脱色后可选用以下 4 或 5 的其中一项复染即可;4 稀释石炭酸复红溶液：碱性复红乙醇饱液碱性复红 1g,95%乙醇 10mL,5%石炭酸 90mL10mL,加蒸馏水 90mL;5 番红溶液：番红 Osafranine O,又称沙黄 O,95%乙醇 100mL,溶解后可贮存于密闭的棕色瓶中,用时取 20mL 与 80mL 蒸馏水混匀即可;以上染色液配合使用,可区分出革兰氏染色阳性 G+或阴性 G-细菌,前者蓝紫色,后者淡红色;22.齐氏 Ziehl 石炭酸复红液

11、：碱性复红溶于 95%乙醇 10mL 中为 A 液；溶液 100mL 为 B 液;混合 A、B 液即成;23.姬姆萨 Giemsa 染液 1贮存液：称取姬姆萨粉,甘油33mL,甲醇33mL;先将姬姆萨粉研细,再逐滴加入甘油,继续研磨,最后加入甲醇,在 56放置 1-24h 后即可使用;2 应用液临用时配制：取 1mL 贮存液加磷酸缓冲液即成;也可以贮存液甲醇=14 的比例配制成染色液;24.1%瑞氏 Wrights 染色液 称取瑞氏染色粉 6g,放研钵内磨细,不断滴加甲醇共 600mL 并继续研磨使溶解;经过滤后染液须贮存一年以上才可使用,保存时间愈久,则染色色泽愈佳;二、常用试剂的配制 一显

12、微镜镜头清洁剂 将乙醚和乙醇按 73 混合,装入滴瓶备用;用于擦拭显微镜镜头上油迹和污垢等注意瓶口必须塞紧,以免挥发;二固定液 1.福尔马林-乙酸-酒精固定液 FAA,又称万能固定剂 福尔马林38甲醛5ml冰乙酸5ml70酒精90 ml,可用于固定植物的一般组织,但不适用于单细胞及丝状藻类;幼嫩材料用 50酒精代替 70酒精,可防止材料收缩；还可加入 5ml甘油丙三醇以防蒸发和材料变硬;FAA 可兼作保存剂;2.福尔马林-丙酸-酒精固定液 FPA 福尔马林 5ml丙酸 5ml70酒精 90ml,用于固定一般的植物材料,通常固定 24h,效果比FAA 好,并可长期保存;3.福尔马林-丙酸-氯仿固

13、定液卡诺固定液 配方一：无水酒精 3 份冰乙酸 1 份;配方二：无水酒精 6 份冰乙酸 1 份氯仿 3 份;是研究植物细胞分裂和染色的优良固定液,材料固定后,用 95和 85的酒精浸洗,清洗 2-3次,也可转入 70酒精中保存备用;4.甘油-酒精软化剂 甘油 1 份50或 70酒精 1 份,适用于木材的软化,将木质化根、茎等材料排除空气后浸入软化液中,时间至少一周或更长一些,也可将材料保存于其中备用;5.铬酸-乙酸固定液 根据固定对象的不同,可分强、中、弱 3 种不同的配方：弱液配方：10铬酸 ml10乙酸 ml蒸馏水;中液配方：10铬酸 7 ml+10乙酸 10 ml蒸馏水 83 ml;强液

14、配方：10铬酸 10 ml+10乙酸 30 ml蒸馏水 60 m1;弱液用于固定较柔嫩的材料,例如藻类、真菌类、苔药植物和蕨类的原叶体等,固定时间较短,一般为数小时,最长可固定 12-24 h,但藻类和蕨类的原叶体可缩短到几分钟到 1h;中液用作固定根尖、茎尖、小的子房和胚珠等,固定时间 12-24 h 或更长;强液适用于木质的根、茎和坚韧的叶子、成熟的子房等;为了易于渗透,可在中液和强液中另加入 2的麦芽糖或尿素;固定时间 12-24 h 或更长;三离析液 1.铬酸-硝酸离析液 铬酸为三氧化铬的水溶液：1 10 ml 铬酸；2 10 ml 浓硝酸;将上述两液等量混合均匀后再使用;适于对导管、

15、管胞、纤维等木质化的组织进行解离时使用;2.盐酸-酒精固定离析液 将浓盐酸、95酒精等量混合备用,一般用于离析根尖细胞;四解离液 常用于根尖等细胞的涂片,它能使细胞壁中层果胶质溶解,而使细胞分开;1盐酸酒精 配方:95%酒精 1 份,浓盐酸 1 份;二者混合即成;2盐酸溶液 11 molL 盐酸 配方：浓盐酸比重 用蒸馏水定容 1 000ml 2L 盐酸 配方：浓盐酸比重 用蒸馏水定容 1 000m1 盐酸水解时间对染色效果影响很大,水解时间短,易着色但较难压片；水解时间长,染色慢而色淡；超过 20min 或水解温度过高,往往染色极淡,或染不上色;各种材料最合适的时间有差别,一般来说,大染色体

16、材料水解时间可较长,小染色体材料宜短;改用L 盐酸于 60恒温下水解 1015min,对各种类型材料都能获得细胞分离和染色合适的较好效果;五预处理液 用于根尖压片的前处理,能使细胞有丝分裂染色体缩短;1 8-羟基奎林水溶液 称取 8-羟基奎林溶于 1 000ml 蒸馏水中;2对二氯代苯饱和水溶液 将对二氯代苯加入蒸馏水中搅拌至不再溶解为止,即成饱和水溶液;六各级酒精的配制 由于无水乙醇价格较高,故常用 95的酒精配制;配制方法很简便,用 95的酒精加上一定量的蒸馏水即可;可按下列公式推算：原酒精浓度值 95最终酒精浓度值100所需加水量 最终酒精浓度 95酒精用量蒸馏水量 85 85ml 10

17、ml 70 70ml 25ml 50 50ml 45ml 30 30ml 65ml 七其他试剂 1.生理盐水 取 NaCl 溶于 100mL 蒸馏水中;用于两栖类动物;2.1%硝酸银溶液 称取 1 克硝酸银,溶于 100 毫升蒸馏水中即可;3.碘酒 取碘 2g 和 KI,先加入少量的 75%乙醇搅拌,待溶解后再用 75%乙醇稀释至 100mL 4.树胶封固剂 将固体的加拿大树胶块,溶解于二甲苯或正丁醇中,浓度要适当注意绝对不能混入水或酒精,是玻片标本好的封固剂;也可用人工合成的中性树胶代替;5.明胶粘贴剂 明胶 1-2 g石碳酸苯酚 2g蒸馏水 100ml甘油 15ml;配法：先将蒸馏水加温至 30-40,慢慢加入明胶,待全部溶解后,再加入 2g 苯酚和 15ml 甘油,搅拌至全溶为止,然后用纱布过滤,滤液贮于瓶中备用;6.标本消毒剂 用于腊叶标本消毒,常用1%升汞酒精溶液 95酒精 1 000ml+4 g 升汞,浸泡标本2min;升汞有剧毒,不要弄到手上,消毒后注意洗手;