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1、蛋蛋 白白 质质 含含 量量 的的 测测 定定微量凯氏定氮法微量凯氏定氮法王冬亮王冬亮 讲师讲师8733072487330724wdliangmail.sysu.eduwdliangmail.sysu.edu二、实验原理：二、实验原理：1.氮元素：氮元素：蛋白质区别于糖和脂肪的特征，蛋白质区别于糖和脂肪的特征，绝大多数蛋白质的氮元素含量相当接近，普通绝大多数蛋白质的氮元素含量相当接近，普通恒定在恒定在1517%，平均值为，平均值为16%左右。左右。只需测定出生物样品中的含氮量，再乘以相只需测定出生物样品中的含氮量，再乘以相应的蛋白质换算系数均值为应的蛋白质换算系数均值为6.25、乳制品为、乳制
2、品为6.38，就可以计算出样品中的蛋白质含量。，就可以计算出样品中的蛋白质含量。消化消化蒸馏蒸馏吸收吸收滴定滴定 2.含氮量的测定含氮量的测定 先高温条件下强酸先高温条件下强酸(浓浓H2SO4)把样品中的蛋白把样品中的蛋白质的有机氮全部消化为质的有机氮全部消化为无机氮方式无机氮方式 再强碱高温水蒸气蒸馏再强碱高温水蒸气蒸馏出氨气出氨气 用硼酸吸收氨气用硼酸吸收氨气 用规范盐酸进展滴定用规范盐酸进展滴定反响方程式反响方程式二蒸馏、吸收二蒸馏、吸收微量凯氏定氮蒸馏安装传统安装1：电炉2：水蒸气发生器3：螺旋夹4：小玻杯及棒状玻塞5：反响室6：反响室外层7：橡皮管及螺旋夹8：冷凝管9：蒸馏液接纳瓶三
3、、试剂三、试剂(已制备已制备)1、消化液：硫酸2、催化剂：硫酸铜、硫酸钾3、碱溶液：40%氢氧化钠4、吸收液：2%硼酸5、混合指示剂：0.1%甲基红乙醇溶液：0.1%甲基蓝乙醇溶液=1：16、规范滴定液：0.2M HCL半自动凯氏定氮仪1、确保仪器运转正常、管道内部干净、确保仪器运转正常、管道内部干净、管道及其衔接口密封性好管道及其衔接口密封性好2、预备好吸收液、预备好吸收液200ml 2%硼酸硼酸+2ml 混合指示剂并做好标志混合指示剂并做好标志3、将碱溶液及去离子水桶与仪器衔接、将碱溶液及去离子水桶与仪器衔接好，放入盛装消化好样品的消化瓶，好，放入盛装消化好样品的消化瓶，放入盛装吸收液的锥
4、形瓶并保证管放入盛装吸收液的锥形瓶并保证管口插入液面下。口插入液面下。4、设置并启动程序、设置并启动程序程序设置：程序设置：步骤加碱或加水时间蒸馏时间C0（样品检测)E0（加碱）5sE04minC1（样品间清洗）E10sE12minC2（试验结束后第一次清洗）E2（加水）20sE20minC3（试验结束后第二次清洗）E3（加水）10sE34min三滴定：三滴定：至灰色或蓝紫色至灰色或蓝紫色至灰色或蓝紫色至灰色或蓝紫色终点终点至灰色或蓝紫色至灰色或蓝紫色100014.0)21(FmCVVX X：样品蛋白质含量 g/100g 或g/100mL V1、V2：测定用样、试剂空白耗费盐酸规范溶液的体积
5、mL C：盐酸规范液的摩尔浓度 mol/L 0.014：1mol/L盐酸规范液1mL相当于氮的克数 m：样质量量g或体积mL F：蛋白质换算系数6.25五、结果计算五、结果计算:作业作业实验报告的撰写：实验报告的撰写：实验标题实验标题实验原理实验原理实验结果实验结果 空白滴定的结果可以共享空白滴定的结果可以共享实验讨论实验讨论 操作中景象的出现缘由；结果的影响要素；与操作中景象的出现缘由；结果的影响要素；与商标商标 上显示的结果对比等。上显示的结果对比等。结果每个小组可以一样，但是讨论不能一样！结果每个小组可以一样，但是讨论不能一样！一消化一消化1 1、标志消化瓶、标志消化瓶2 2、将以下物质参与消化瓶：、将以下物质参与消化瓶：牛奶牛奶1ml1ml、浓硫酸、浓硫酸5ml5ml、催化剂、催化剂 K2SO4 K2SO4，CuSO4 CuSO4、玻璃珠、玻璃珠3 3、将消化瓶放入智能数控消化炉进展消化，至、将消化瓶放入智能数控消化炉进展消化，至液体变为无色或淡蓝色液体变为无色或淡蓝色250 1h250 1h左右左右350 40min350 40min左右左右450 2.5h450 2.5h左右左右察看浓硫酸刚参与察看浓硫酸刚参与牛奶中的颜色？牛奶中的颜色？作用？作用？
蛋白质含量的测定微量凯氏定氮法ppt课件
