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1、实验二实验二 革兰氏染色及细菌特革兰氏染色及细菌特殊结构观察殊结构观察 一、实验目的一、实验目的学习细菌的革兰氏染色原理和方法了解细菌的特殊形态结构：芽孢、荚膜、鞭毛二、实验原理二、实验原理单染色法：单染色法：只能观察微生物的大小、形状、只能观察微生物的大小、形状、和细胞排列状况，但不能鉴别微生物以及和细胞排列状况，但不能鉴别微生物以及它的特殊构造等。它的特殊构造等。复染色法：复染色法：用两种或两种以上染色液进行用两种或两种以上染色液进行染色，有协助鉴别微生物的作用，故也称染色，有协助鉴别微生物的作用，故也称鉴别染色法。常用的有：鉴别染色法。常用的有：革兰氏染色法革兰氏染色法、抗酸染色法、芽孢
2、染色法、抗酸染色法、芽孢染色法、鞭毛染色法等。鞭毛染色法等。革兰氏染色革兰氏染色丹麦创立，用于细菌分类学研究细菌细胞壁的结构G肽聚糖层较薄，交联度低，含较多脂质，故用乙醇等有机溶剂脱色时融解了类脂质，增加了细胞的通透性，使初染的结晶紫和碘的复合物易于渗出，经沙黄复染呈红色。G细胞壁结构致密，用脱色剂处理后，肽聚糖层孔径缩小，通透性降低，故细菌仍保留初染时的紫色。细菌的特殊形态结构芽孢：休眠体，不利环境下产生，耐受各种极端环境。荚膜：多糖，包裹在菌体外围，保护菌体鞭毛：运动，菌落形态。三、实验材料三、实验材料大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌（24h培养物）革兰氏染色液一套四、实验步骤四、实
3、验步骤革兰氏染色枯草杆菌的芽孢观察观看鞭毛、荚膜的示范片绘图、写实验报告革兰氏（革兰氏（Gram）染色法）染色法1.涂片涂片2.初染：初染：在做好的涂面上滴加草酸在做好的涂面上滴加草酸铵结晶紫染液，染铵结晶紫染液，染1分钟，倾去分钟，倾去染液，流水冲洗至无紫色。染液，流水冲洗至无紫色。3.媒染：媒染：先用新配的路哥氏碘液冲先用新配的路哥氏碘液冲去残水，而后用其覆盖涂面去残水，而后用其覆盖涂面1分分钟，后水洗。钟，后水洗。4.脱色：脱色：除去残水后，滴加除去残水后，滴加95%酒酒精进行脱色约精进行脱色约1520秒，后立即秒，后立即用流水冲洗。用流水冲洗。5.复染：复染：滴加番红染色液，染滴加番红染色液，染35分钟，水洗后用吸水纸吸干。分钟，水洗后用吸水纸吸干。6.镜检：镜检：观察染色结果并绘图。观察染色结果并绘图。枯草杆菌芽孢的观察细菌鞭毛的观察细菌荚膜的观察荚膜五、实验结果记录所观察到的三种菌革兰氏染色结果的差别记录枯草杆菌Gram染色结果，并判断是阳性还是阴性六、问题与讨论要得到正确的革兰氏染色结果必须注意哪些操作？哪一步是关键？Why?内容回顾原理细菌革兰氏染色的原理方法细菌革兰氏染色的方法简要介绍了芽孢染色、荚膜染色、鞭毛染色的方法本次实验课结束请确保油镜头擦拭干净！请第二排同学留下值日下周再见！
实验二革兰氏染色及细菌特殊结构观察
