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1、l通过本实验学习PCR反应的基本原理与实验技术。l聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)，是一种在体外快速扩增特定基因或DNA序列的方法，故又称为基因的体外扩增法。l在待扩增的DNA片断两侧和与其两侧互补的两个寡核苷酸引物，经变性、退火和延伸若干个循环后，DNA扩增2n倍。l1.变性：在加热或碱性条件下可使DNA双螺旋的氢键断裂，形成单链DNA，称之为变性。l2.退火：是模板与引物的复性。引物是与模板某区序列互补的一小段DNA片段。l3.延伸：从结合在特定DNA模板上的引物为出发点，将四种脱氧核苷酸以碱基配对形式按53的方向沿着模板顺序合成新的DNA链。P
2、arameterConcentrationTemplatepHdNTPsGelatinPrimersMg2+oncentrationEnzymeTotal volume10 attomoles(1106 molecules)8.4（10mM Tris-Hcl）200 M(each one)100 g/ml(optional)0.5 M(each one);(0.11.0M)0.5mM 10mM1 unit25100l电泳仪电泳仪PCR仪仪移液器移液器l1、DNA模板l2、4种dNTPl3、引物1、引物2l4、Taq酶l5、琼脂糖l6、DNA相对分子质量标准物l7、吸头、50ul PCR管l10
3、PCR缓冲液(含Mg2)l4dNTP(每种1mmol)lTag酶 1U/ullDNA模板l引物1:5-GGGGAATTCATGGTGAGCAAGGGC-3l引物2:5-GACCTGCAGGCATGCAAGCTTGGC-3 l引物溶液浓度 10pmol/ull1在0.5ml RCR管内配置20ul反应体系：CK(ul)1#(ul)模板01引物10.40.4引物20.40.410 PCR Buffer22Taq酶0.50.5dNTPs0.40.4ddH2O14.315.3Total2020l要求：l1、写出本实验目的、原理；l2、实验器材及实验步骤；l3、列出实验结果示意图并分析原因。PCR结果。1、对照(无模板)；26、PCR产物（5ul样品）
实验四PCR基因扩增
