小檗碱提取及结构鉴定开题报告

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1、天然药物化学课程实验任务书一、题目：小檗碱提取及结构鉴定二、实验任务1查阅文献资料并写出小檗碱化学研究进展的文献综述2设计实验方案并进行可行性分析（方案应包括目的意义，设计原理、流程、实验方 法、时间安排、需要的仪器与试剂）。3.对实验材料进行性状、显微和理化鉴定并将鉴定结果写入实验报告中。4完成小檗碱单体化合物的分离及结构鉴定，鉴定数据应包括熔点、旋光度、紫外图 谱。5对所得数据进行分析6完成实验报告并提交少量小檗碱样品。三、实验要求1. 实验中要求学生不完全依赖现成条件，能在教师指导下自己创造一些条件完成实 验。2. 实验方法应有一定的创新性。3实验数据准确，须注明实验条件。4要求提供的样

2、品袋上注明样品名称、熔点、旋光度、制备者姓名、日期四、实验报告内容1题目2. 实验目的3. 基本原理4实验所用试剂、仪器的型号及生产厂家5. 分离方法创新之处6. 自制或创造了那些实验条件条件7. 实验流程及操作方法8结果与分析9.结论10在所完成实验的基础上提出一个新的研究课题11.合理化建议、文献综述1题目背景黄连（Coptis chinensis Franch）为我国名贵中药材之一，享有“中药抗生素美称, 其主要功能为清热燥湿、泻火解毒。黄连抗菌能力强，对降热镇痛、抗肠道细菌感染、 急性结膜炎、口疮、急性细菌性痢疾等均有很好的疗效，在临床中有较多应用1-3。小 檗碱（berberine，

3、又称黄连素）是从中草药黄连等植物中提 取分离得到的一类异喹啉类生物碱，为黄连主要有效成分， 其含量约为4%-10%，但根据野生和栽培产地的不同，其含 量各异。图1小檗碱的季铵碱式小檗碱是黄色针状结晶体，能缓慢溶于水（1： 20），乙 醇（1： 100）,较易溶于水、热乙醇，微溶于丙酮、氯仿、 苯，几乎不溶于石油醚中。小檗碱的结构式以较稳定的季 铵碱为主，其结构式如图1。在自然界，小檗碱多以季铵盐的形式存在，其盐酸盐、氢 碘酸盐、硫酸盐、硝酸盐均难溶于水，易溶于热水，且各种盐的纯化都比较容易。小檗碱是一种常用的广谱抗菌药，具有抗细菌性感染、抗肿瘤、抗心率失常、降压 降血糖等功效，在临床上有越来越

4、广泛的应用4。2研究现状5 近十年来，已经有2 000多篇国内外文献报道了小檗碱及其衍生物在治疗肿瘤、糖 尿病、心血管疾病、高血脂、炎症、细菌和病毒感染、脑缺血性损伤、精神疾病、阿尔 茨海默病（Alzheimer disease）、骨质疏松等多方面的临床应用、药效机制以及该类化合物 的构效关系等研究结果。这些结果表小檗碱生理功能广泛，潜在的结构改造和开发应用 价值很大。下面主要从临床应用与药效机制、分子药理、体内吸收代谢、构效关系四个 方面来介绍小檗碱及其衍生物的研究进展。2.1临床应用与药效机制2.1.1抗肿瘤小檗碱具有一定的抗肿瘤作用。可通过抑制肿瘤细胞增殖，促进肿瘤细胞分化，诱 导肿瘤细

5、胞凋亡，抑制肿瘤转移等来发挥抗肿瘤作用2.1.2治疗糖尿病檀华敏等给病人口服盐酸小檗碱治疗糖尿病临床症状减轻，空腹血糖下降。陈海飞 等应用黄连素辅助治疗老年II型糖尿病44例，也取得良好疗效。张明等采用黄连素与 磺脲药联合治疗II型糖尿病，发现黄连素与二甲双胍一样，能够使患者周围组织胰岛素 受体的敏感性增强，从而降低血糖，尤其是有降低餐后血糖的效应。火焱等给38例非 糖尿病者和56例糖尿病患者应用黄连素(0. 8 g /次，每日3次)3 d后，发现II型糖尿 病患者用黄连素治疗后血糖有显著下降(Pv0. 01)。魏敬等对伴有脂肪肝的II型糖尿病 患者应用小檗碱治疗，可有效改善胰岛素抵抗，提高胰

6、岛素敏感性，并具有降糖和调脂 的功效。2.1.3治疗心血管疾病小檗碱有抗心律失常，舒张血管，保护心肌，抑制血管增生，抗血小板聚集等作用 从而实现对心血管疾病的治疗。2.1.4降血脂小檗碱治疗高脂血症45例，总有效率为90%，也表明小檗碱降血脂的效果较为理 想。Kong等发现，小檗碱治疗32例高胆固醇病人3个月，降低血清胆固醇29%，甘 油三酯35%，LDL胆固醇25%，并且降血脂的机制和抑制素类药物不同。2.1.5抗炎有研究表明，硫酸小檗碱可通过抑制促炎症因子的产生和减少IL-10的释放从而减 少内毒血症小鼠肺和肠损伤，提高内毒血症小鼠的生存率。2.1.6抗菌和抗毒素小檗碱可通过抑制恶性疟原虫

7、端粒酶活性治疗疟疾。杨柳萌等研究了小檗碱、己基 小檗碱(13-hexylberberine)、巴马汀(palmatine)和己基巴马汀(13-hexylpalmatine) 4 种结构 非常相似的季胺型异喹啉类生物碱对HIV-1的作用，发现小檗碱和巴马汀有较强的体外 抑制HIV-1重组逆转录酶活性，己基巴马汀有一定的抗HIV-1活性，巴马汀对各种细胞 系的细胞毒性较其他3种化合物小。另有研究表明，小檗碱衍生物HB13有抗单纯疱 疹病毒的作用。Hayashi等还发现，小檗碱能在病毒侵入宿主细胞后和病毒DNA复制前 起作用，抑制人巨细胞病毒的复制。2.1.7抗脑缺血性损伤小檗碱对缺血再灌注大鼠海马

8、有保护作用。吴俊芳等发现，在脑缺血过程中c-f0s 原癌基因呈现-过性高表达，小檗碱可降低c-fos mRNA水平，发挥抗脑缺血作用。还有 研究发现，小檗碱可通过抗血小板黏附和聚集及影响花生四烯酸代谢而发挥抗脑缺血作 用。2.1.8治疗阿尔茨海默病研究发现，小檗碱在无细胞毒性的正常剂量范围内，能调节人神经胶质瘤细胞中淀 粉样前蛋白的形成减少淀粉样蛋白-0的产生；增强神经生长因子诱导的神经细胞分化； 改善阿尔茨海默病(Alzheimer disease，AD)模型大鼠空间记忆损伤，增加白介素.1和 iNOS表达；还可作为AChE抑制剂，有望成为治疗阿尔茨海默病的药物。2.1.9治疗精神类疾病四氢

9、小檗碱能够抑制乙酰胆碱诱导的精神分裂大鼠海马CA1锥体神经元的K流； 左旋四氢小檗碱能够阻滞脑内D2受体，增强内源性抗痛功能；双羟基四氢小檗碱有D1 激动.D2阻滞双重作用，可以治疗精神分裂症。小檗碱还可通过调节脑内生物胺类物 质(如去甲肾上腺素、5.羟色胺、多巴胺等)起抗抑郁样作用，并且，小檗碱的抗抑郁作 用可能与，J.精氨酸.NO. cGMP通路有关。2.1.10防治骨质疏松小檗碱能够增加去卵巢大鼠子宫重量、股骨干骺端的骨密度和血清无机磷含量；降 低碱性磷酸酶活性和甲状旁腺素浓度，增加血清雌二醇、骨钙素、降钙素浓度，对去卵 巢大鼠骨质疏松症具有防治作用。2.1.11其他作用小檗碱可增加离体

10、家兔阴茎海绵体平滑肌组织中环磷酸鸟苷(cGMP)和环磷酸腺苷 (cAMP)浓度，对阴茎海绵体有即时的舒张作用，还对NO. cGMP信号通路的下游关键 酶(PDE5)具有一定的调控作用，尤其是抑制PDE5A2的mRNA表达，治疗勃起功能障 碍。2.2分子药理研究基因芯片：辛华雯等研究小檗碱对大鼠肝脏基因表达谱的影响，检测了 4 096个基 因，盐酸小檗碱组差异表达基因236个，与代谢相关的差异表达基因共32个，其中表 达上调的代谢相关基因8个，包括大鼠环核苷酸磷酸二酯酶、异柠檬酸脱氢酶3、心肌 黄酶和葡萄糖5-磷酸酶等。与DNA或RNA的相互作用:结合方式与序列选择性、结合作用力与结构选择性，

11、Saran等采用H NMR研究小檗碱与DNA的结合情况，发现小檗碱部分嵌入DNA分子 中oPilch等研究原小檗碱类似物与Topo I结合的小沟一定向配基-DNA的相互作用情况， 发现一部分药物配基嵌入到DNA双螺旋中，没有嵌入的部分配基突出到宿主DNA双 螺旋的小沟中，认为这些化合物与宿主DNA的结合是一种混合作用模式。Pal等研究了 甲氧檗因与双链DNA的结合情况,发现其与双链DNA的结合是插入到交替的GC双链 结构中。最近，Qin等 研究了小檗碱及其脱甲基衍生物与小牛胸腺DNA的相互作用， 发现部分脱甲基化能够增强原小檗碱型生物碱与DNA的结合，并且所有的生物碱都易 于与含AT丰富的DN

12、A结合。2.3体内吸收代谢Hong等研究了四氢巴马汀的两个对映异构体在血浆、脑的各个部位和各个组织中 的分布，发现两个对映体在脑的各个部位分布有明显差异，左旋体的峰浓度和生物利用 度高于右旋体，相对与血浆和其他脑区，纹状体中有最高的峰浓度。王广基等 发现 家犬静脉注射抗心律失常药7-（4-氯苄基）-7，8，13，13a-四氢小檗碱氯化物后，体内分 布迅速，但是药理效应并不与血药浓度直接相关，而与效应室浓度呈良好的相关性。冯 年平等又研究了该化合物在家兔和大鼠体内的代谢情况，发现其在家兔体内的主要转化 途径为：10. OCH脱甲基变为10 OH。2.4构效关系研究（1）抗菌：1wasa等合成了一

13、系列原小檗碱类化合物，研究其结构与抗菌活性的关 系。（2）抗疟：1wasa等对原小檗碱类化合物进行了抗疟活性研究，发现含有芳环C的 原小檗碱盐类所具有的季铵结构是抗疟活性所必须的结构。（3）抗心律失常：王瑞芳等 副以具心血管活性的四氢小檗碱类生物碱为先导物，结合某些钾通道阻滞剂的结构特 征，设计合成了 14个未见文献报道的四氢小檗碱季铵化合物。（4）阵痛：郑洪艳等观察 了原小檗碱型生物碱小檗碱、黄连碱、巴马汀、药根碱、延胡索乙素对腹腔注射0. 6% 醋酸引起炎性疼痛小鼠的扭体反应抑制率和热板致痛阈值的影响。（5）糖尿病：Bian等 合成了 14个小檗碱衍生物，研究了它们与抑肽酶细胞磺酰脲类受体

14、结合的活性。（6） 抗肿瘤：1wasa等研究发现烷基链取代在8和13位对细胞毒活性有很大影响。（7）与多 巴胺受体作用：Guo等研究了四氢原小檗碱类似物与多巴胺受体1和2结合的情况。3.提取方法63.1传统提取技术黄连中小檗碱的提取工艺，主要是溶剂提取法。此法是从中草药中提取有效成分的 常用方法，通过浸渍、渗渡、回流等方式将有效成分从药材组织内溶解，进行萃取。3.1.1酸水法提取小檗碱【原理】利用小檗碱的硫酸盐在酸性溶液中的溶解度大、而盐酸盐几乎不溶于水的 性质来实现提取分离的，是目前工业中最常用的提取小檗碱的方法之一。【工艺流程为】将黄连药材剪碎、磨烂、加人盛有1% （V/V）的硫酸水溶液中

15、， 加热煮沸约5min后，静置浸泡过夜后渗流、抽滤，渗镜液加食盐饱和，用稀盐酸调ph 至1-2,静置后抽滤即析出盐酸黄连素粗品。将粗品加热水至刚好溶解，用石灰水调ph 至8.5-9，趁热滤除杂质，用浓盐酸溶液调ph至2,继续冷却至室温以下即有盐酸小粟 碱结晶析出，用冰水洗涤、抽滤，得到黄色盐酸小菜碱结晶，并在50-60C下烘干。3.1.2石灰乳发提取小檗碱石灰乳法也是当前工业生产上常用的方法之一，有渗辘和浸渍两种提取工艺，其流 程为将黄连粉碎成粉状，加1/10 (w/w)量的生石灰，再加冷水浸泡静置数小时，抽滤、 加人滤液量2%(w/w)的食盐水，静置沉淀，待沉淀完全后过滤，即得盐酸小檗碱粗

16、品。将粗品加热水至刚好溶解煮沸、冷却、滤除杂质，用浓盐酸溶液调ph至2,继续冷 却至室温以下即有盐酸小檗碱结晶析出。晶体用冰水洗涤、抽滤，在50-60C下干燥即 得纯度较高的盐酸小檗碱川。稀硫酸法和石灰乳浸渍法是目前比较成熟的工艺，但工艺中均存在提取时间长、成 本高、产品纯度低、产率低、溶剂消耗多、易造成环境污染等问题。3.1.3乙醇回流提取法通常用加热回流提取，有直接回流工艺和索氏提取两种。称取黄连粉放人250mL 圆底烧瓶中用100mL乙醇作为溶剂，热水浴加热回流30min,放置浸泡1h,将提取液 抽滤，滤渣重复上述处理过程两次，合并滤液，减压蒸出乙醇直到为红棕色糖浆状，在 红糖浆状物中加

17、人1% (V/V)的醋酸(约30-40mL)加热溶解，抽滤除去不溶物，然后 于溶液中滴加浓盐酸至溶液浑浊，静置冷却，即有黄色针状的结晶析出，抽滤，先后用 冰水和丙酮洗涤滤饼，然后将滤饼加热水至刚好溶解，煮沸、冷却、滤除杂质，继续冷 却至室温以下即有盐酸黄连素结晶析出，抽滤、干燥即得产品。选择不同的提取条件， 小檗碱提取率有显著差异，最优提取工艺是50% (V/V)的乙醇溶液、8倍体积、85C 回流提取次，每次2h。索氏提取法是直接提取回流工艺的改进，它可以提高产品的收率， 减少溶剂的消耗，但索氏提取一般只适用于微型实验。乙醇法提取小檗碱不但从时间、产品纯度、提取率上优于稀硫酸法、石灰乳法，乙

18、醇还可以回收再用，因此，乙醇回流提取工艺是一种从黄连中提取小檗碱较为理想的工 艺方法。3.2新提取技术3.2.1微波法提取小檗碱微波提取技术是近年来以传统溶剂浸提法原理为基础发展起来的新型萃取技术，该 技术具有选择性高、耗时少、能耗低、排污量少等优点，可克服传统提取方法的缺陷， 与超临界流体萃取、高速逆流液相色谱等技术相比，其适用面更广，且设备投资低，是 目前国内外天然产物提取的研究热点。微波处理具有升温快、加热均匀等优势，但其提取技术的研究仍处于初级阶段，在 提取过程中的参数如药材的物理性质及粉碎度、基础物化参数的收集，特殊专用微波辅 助提取设备的研究开发等都有待探索。3.2.2微波一索氏联

19、合工艺综合微波技术与索氏提取工艺的优点，郭锦棠等，用微波一索氏联合工艺提取了黄 连中的小檗碱。选用不同粒度的黄连药材，加人一定量的蒸馏水，混合均匀，在变频微 波炉中，以不同水平的微波功率、提取时间进行微波照射，每份样品待其冷却后，重复 照射次。微波预处理后，在索氏提取器中以不同水平的提取溶剂用量与提取时间进行提 取，将提取液静置过夜，取上清液加盐酸调ph至2,然后加入18% （w/w）的食盐水， 将生成的沉淀静置一段时间后过滤，水洗后在60-80C干燥，得到盐酸小檗碱粗品，计 算收率。通过正交实验优选，最佳提取条件为微波功率520W （80%功率档），辐照时间 1.5min （2次），基质含水

20、量20mL，粒度为中粒，溶剂用量lOOmL，提取时间4h。实验表明微波一索氏联合工艺比单用索氏提取得到的小檗碱收率明显要高与仅用 索氏提取方法比较，微波预处理一索氏联合工艺具有提取效率高、工艺简单等特点。3.2.3超声波法提取小檗碱利用超声波提取中药材中的有效成分，是中药提取工艺的一次革新。与传统工艺相 比，超声波萃取具有如下突出特点：（1）萃取过程无需高温，不破坏药材成分；（2）常 压萃取，安全性好，操作简单易行；（3）萃取效率高；（4）具有广谱性。适用性广，绝 大多数的中药材各类成分均可超声萃取；（5）超声波萃取对溶剂和目标萃取物的性质如 极性关系不大；（6）药材原料处理量大。因此，利用超

21、声萃取中药中有效成分的综合经 济效益显著。3.2.4酶法提取小檗碱酶解技术用于天然产物有效成分提取的研究始于20世纪50年代，由于植物细胞壁 主要是由纤维素组成，纤维素酶可以破坏植物细胞壁，使植物组织分解、加速有效成分 的释放，促进植物有效成分的浸出。酶法提取小檗碱与传统乙醇浸提法进行比较，结果 表明，酶法提取工艺比传统乙醇浸提法的产量提高了 49%。酶法作用条件温和，可明显提高收率，但其技术上尚存在一定的局限性：（1）酶的 最佳温度及最佳ph值往往在一个小范围内，为达到最佳的活性条件对实验设备有较高 要求；（2）用酶法可能在提取过程中改变中药中某些成分，从而影响产物的纯度及产率。 因此，酶法

22、提取工艺有待进一步研究。3.2.5超临界提取这是近年才发展的一种提取分离技术，它有别于前述的提取法，是一种提取介质不 是水或乙醇的特殊技术刘。机制为：以具有优越传质能力及高溶剂化性能的超临界流体 （SCF）为介质，当SCF与药材接触时，将能溶于SCF的成分从药材中夹带出，从而 实现有效成分的提取分离。超临界提取法具有无溶剂残留、操作温度低、有效成分高度浓缩、收率高、药理效 果好且毒性降低等特点，但其操作压力大、费用高，目前离大规模应用尚有时日。综上所述，不论是传统工艺还是用其他新技术处理提取黄连中的小粟碱，主要都是 根据其易溶于热溶剂而微溶于冷溶剂的性质。在实际生产应用中，可根据回流时间与次

23、数、投料比例、检测设备条件、ph值、提取温度和时间等，采用正交优选设计、均匀设 计、回归设计等，选择不同方法进行提取，或以多种提取方法联合运用，最大可能保 留活性成分，提高有效组分的提取效率。正在发展和日臻完善的提取新技术，极大地提 高了有效成分的提取率和纯度，降低了能耗，简化了提取工艺，具有广泛的应用前景。二、实验目的和意义1. 实验研究目的：（1）掌握小檗碱的提取方法及结构鉴定（2）了解小檗碱的药理作用和应用价值（3）掌握小檗碱的纯度检测及结构鉴定2. 实验意义通过设计实验培养学生的自我创新能力，激发学生自我探索能力，让学生养成勤动 脑，勤动手，勤查资料的好习惯。通过实际操作提高学生的动手

24、能力以及分析问题，解决问题的能力，加强对相关知 识的理解，拓展学生的思维和对专业领域的再认识。3题目理论研究价值随着临床药理学的不断深入研究,陆续发现小檗碱还有抗心律失常、改善充血性心力 衰竭、扩张冠状动脉、降血糖、降血脂、抗血小板凝集、利胆、抗肿瘤等药理作用被广 泛地应用于心律失常、心力衰竭、糖尿病、高脂血症、高血压、抗血栓形成、治疗慢性 胆囊炎、神经衰弱、防治癌症等的治疗。因此,提取黄连小檗碱对于临床研究和治疗有着 重要的意义。三、主要内容与实施方案1主要内容：小檗碱的提取及结构鉴定2-实验原理：黄连主含小檗碱，含量为5.20%-7.69%,还含黄连碱，甲基黄连碱、 掌叶防己碱等，由于它们

25、有相似结构，常统称为黄连生物碱。小檗碱异名为黄连素，在 水或稀乙醇中结晶所得小檗碱为黄色针状结晶。游离小檗碱微溶于冷水，易溶于热水， 几乎不溶于冷乙醇、氯仿和乙醚。小檗碱和大分子有机酸生成的盐在水中的溶解度都很 小。小檗碱有季铵式、醛式、醇式，3种能互变的结构式，以季铵式最稳定。小檗碱的 盐都是季铵盐，于硫酸小檗碱的水溶液中加入计算量的氢氧化钡，生成棕红色强碱性游 离小檗碱，易溶于水，难溶于乙醚，称为季铵式小檗碱。如果于水溶性的季铵式小檗碱 水溶液中加入过量的碱，则生成游离小檗碱的沉淀，称为醇式小檗碱。如果用过量的氢 氧化钠处理小檗碱盐类则能生成溶于乙醚的游离小檗碱，能与羟胺反应生成衍生物，说

26、 明分子中有活性醛基，称为醛式小檗碱。小檗碱的提取方法主要有溶剂法（包括水或水 有机溶剂法、醇一酸水一有机溶剂法、碱化有机溶剂法）、离子交换树脂法、沉淀法 等，通过生物碱特有的沉淀反应和显色反应对其进行鉴别。3待解决问题：药品与试剂的合适用量；采用的实验装置及实验仪器等；实验 中出现意外状况的补救措施。4预期结果：熔点140-150 C,纯度在80%以上。5实验方法：乙醇法加热回流提取小檗碱。根据小檗碱易溶于热乙醇，难溶于冷 乙醇的性质，以热乙醇为溶剂将小檗碱提出，然后再转化为盐酸盐析出。该法与稀硫酸法 及石灰乳法相比,具有可回收反复使用、不腐蚀设备、无毒、对环境无污染、提取产量高 的特点。刘

27、圣等用正交实验法考察黄连中小檗碱最佳提取工艺:溶剂6倍量80 %乙醇，乙醇中硫酸加入量为0. 25 %，提取时间为1. 5h/次，提取次数为3次，以该工艺制备的盐酸小檗碱精制品含量在90 %以上,适合工 业化生产。张来新等对硫酸法、石灰 水法、乙醇法进行了比较试验研究， 结果表明:乙醇法提取黄连素不但从 时间、产品纯度、提取率上均优于硫 酸法、石灰水法，乙醇还可以回收再 利用,其回收率可达90 %。6. 实验流程：滤液滴加浓盐酸至溶液浑浊为止，冷却，抽滤结晶.水洗涤两次,在用丙酮洗涤一次小菓碱7. 实验7.1称取一定量的含有小檗碱的植物组织粉末，放入250 ml圆底烧瓶中用100 ml乙醇 作

28、提取溶媒，热水浴加热回流30 min。7.2上述溶液放置浸泡1 h，抽滤，滤渣重复上述处理两次，合并3次，得到滤液。减压 蒸出乙醇直到为棕红色糖浆状为止7.3在棕红色糖浆状物中加入1%醋酸（约3040 ml）加热使溶解，抽滤以除去不溶物。 7.4然后于溶液中滴加浓盐酸至溶液浑浊为止，放置用冰水冷却，即有盐酸小檗碱析出。7.5抽滤，结晶用水洗涤两次，再用丙酮洗涤一次，干燥、烘干，即得到初品小檗碱。8. 产品鉴定8.1定性鉴定： 8.1.1熔点测定用熔点测定仪测定所得产品的熔点观察熔距的大小，熔距越小，纯度越高（mp为 145C ）8.1.2显色反应浓硝酸实验：取1支已加入酸性小檗碱的试管，加入2

29、滴浓硝酸，显樱红色。丙酮加成反应：在盐酸小檗碱水溶液中，加入氢氧化钠使呈碱性，然后滴加丙酮数 滴，即可生成黄色结晶性小檗碱丙酮加成物。8.1.3 3.纸色谱法供试品：实验所得的精制盐酸小檗碱乙醇溶液对照品：盐酸小檗碱标准品乙醇溶液展开剂：正丁醇：冰醋酸：水=4:1:1或7： 1:2氯仿：乙醇：（0.1mol/L）盐酸=1:1:1显色剂：紫外灯线观察荧光或自然光下观察黄色斑点8.1.4薄层色谱法制板：之前准备点样、展开、显色：取自制的盐酸小檗碱乙醇样品溶液和盐酸小檗碱乙醇对照品溶 液，分别用毛细管点在薄层板上，重复点样35次。用甲醇-丙酮-乙酸4： 5： 1 （或氯 仿-氨-甲醇30:1:8）为

30、展开剂，展开完毕，先观察荧光斑点，再喷改良碘化铋钾试剂显 色。见图28.2结构鉴定 8.2.1紫外光谱分析紫外检测波长：263nm供试品溶液的配制：称取小檗碱片细粉Xmg精密称定，加入到100ml容量瓶中。加沸水 适量使其溶解，放冷，用水稀释至刻度，摇匀，过滤，弃去初滤液约8ml，精密量取续 滤液5ml，置50ml量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，即得供试品溶液。对照品溶液的配制：取小檗碱对照品50mg于100ml容量瓶中，加沸水适量使其溶解，放 冷，用水稀释至刻度，摇匀，过滤，弃去初滤液约8ml，精密量取续滤液5ml，置50ml量 瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，即得对照品溶液。准确度/回收率试验：

31、取小檗碱片细粉9份，精密称定，每份约为50mg,加入到100ml容 量瓶中。1-3号容量瓶中加入小檗碱对照品30mg左右；4-6号容量瓶中加入小檗碱对照 品50mg左右；7-9号容量瓶中加入小檗碱70mg左右。按照供试品溶液配制方法配制成 溶液，分别测其紫外吸收峰。紫外吸收光谱见图38.2.1柱层析法分析柱层析法的分离原理：是根据物质在固定相上的吸附力不同而使各组 分分离。一般情况下极性较大的物质易被氧化铝吸附，极性较弱的物 质不易被氧化铝吸附。当采用溶剂洗脱时，发生一系列吸附一解吸一 再吸附f再解吸的过程，吸附力较强的组分，移动的距离小，后出柱； 吸附力较弱的组分，移动的距离大，先出柱。采用

32、的固定相：氧化铝步骤：1）取一根直径约1.5cm，长约40cm带玻璃活塞的色谱柱，（若没有滤芯的话，在柱子的下端填一层松紧合适平整的脱脂棉，添的稍微稀松些），将其垂直 地固定在铁架台上。2）柱内先加入3ml体积的乙醇，打开活塞，放出柱内乙醇，然后 再加入乙醇至距色谱柱的下端的棉花1-2cm处，关闭活塞。3）取中性氧化铝（100200目）约15g于烧杯中，加入一定体积的乙醇调成浆状，顺时 针搅拌，赶尽气泡。4）然后经玻璃漏斗将浆状氧化铝徐徐注入柱中，当氧化铝到达柱底时，打开活塞，让 洗脱剂缓缓流出，使氧化铝沉降均匀，当柱内液面接近氧化铝柱最上层时，关闭活塞。5）按照柱子的内径，剪一张合适的滤纸，

33、再轻轻盖上，不要破坏最上层，加上3颗玻 璃珠。6）称取约200mg盐酸小檗碱粗提取物，放入烧杯，加少量乙醇（溶解即可）于水浴上 加热溶解7）小心倒入柱子中，勿使氧化铝柱面受到振动，之后开启活塞，当液体表面下降接触 到氧化铝柱最上层面时，关闭活塞。8）再用非常少量乙醇淋洗柱内壁，将沾于管壁周围的样品液轻轻洗入柱面上，至洗净 后关闭活塞，准备进行洗脱。9）用滴管吸取乙醇，由管壁轻轻加入柱内，开启活塞，控制流速20-30滴/min。10）不断加入乙醇，保持色谱柱内乙醇高度不低于最上层滤纸界面2-3cm高度。*ll11）待氧化铝柱上呈现不同颜色的色带时，继续冲洗，使其彼此分离，并收集开始流出 的鲜黄色

34、带，此段为盐酸小檗碱，其余色带为其他成分。13,3 fl- 710.013.316.7图1对鼎品L盐酸小累璀图3小檗碱的紫外分析图谱四、进度计划第一天：准备及清洗仪器第二天：铺薄层板，置于水平台上自然风干12h第三天：将薄层板放入烘箱中活化30min,同时进行黄连的性状、显微鉴定，薄层 板活化完成后取出进行薄层色谱鉴定。第四天：称取黄连，研磨成粉末状，用乙醇加热回流30min,然后浸泡1h,抽滤， 减压蒸馏乙醇至棕红色糖浆状，加醋酸加热使之，溶解，抽滤去不溶物得滤液。第五天：在滤液中滴加浓盐酸至溶液浑浊，冰水冷却，抽滤得结晶，用水洗涤两次, 再用丙酮洗涤一次，即可得到小檗碱。对所得小檗碱进行质

35、量、熔点测量、纯度检测等。第六天：清洗仪器，结束实验。五、致谢本设计说明书是在孔阳老师和李楠老师的亲切关怀和悉心指导下完成的。她们严肃 的科学态度，严谨的治学精神，精益求精的工作作风，深深地感染和激励着我。在此谨 向两位老师致以诚挚的谢意和崇高的敬意。感谢老师在答辩时对我们的方案耐心的指 导，以及在实验开始前的答疑解惑，让我们对实验更加有把握。也感谢和我一组的搭档， 正是由于搭档的不断补充完善，才有成型的方案，我才能克服一个一个的困难和疑惑， 直至本文的顺利完成。在论文即将完成之际，我的心情有些激动，从开始进入课题到说明书的顺利完成， 遇到了或多或少的问题，包括文献的查找，资料的收集，word

36、中页眉的编辑等等，但伴 随这一个又一个问题的解决，感觉是另外一种收获，在这里请接受我诚挚的谢意!最后 我还要感谢培养我长大含辛茹苦的父母，谢谢你们！六、参考文献1 余园媛，王伯初，彭亮等，黄连的药理研究进展J.重庆大学学报，自然 科学版，2006, 29（2）； 107-1112 胡冬华，袁绪富，黄连素的提取及分子活性部位研究J，长春中药学院 学报，2006，22（1）； 66-673 宋红萍，陈冠容，小檗碱的药理作用及临床新用J,老药新用，2007 23 （2）； 21-224吴柯，周岐新，黄连抗肿瘤作用研究进展J，中国药房，2007，18（3）； 226-2295李波，朱维良，陈凯先，小檗碱及其衍生物的研究进展，药学学报，2008, 43 （8）： 773-7876熊晓莉，陈锦锦，黄连中小檗碱提取工艺研究，重庆工商大学学报（自然 科学版），2008，25（4），413-415, 444。