蛋白酶酶切位点(精品)

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1、蛋白酶酶切位点 蛋白酶的分类及作用位点蛋白酶分类作用位点已知抑制物氨基肽酶金属蛋白酶带有自由氨基的L-氨基酸氨基末端；不分解由X-Pro、D或Q组成的肽键2，2，双吡啶，11()-菲咯啉菠萝蛋白酶巯基蛋白酶无特异性2巨球蛋白，TPCK，TLCK，烷化羧肽酶A锌金属蛋白酶带有自由氨基酸的L-氨基酸羧基端；不能分解R、P或羟脯氨酸EDTA，EGTA羧肽酶B锌金属蛋白酶K- Lys，R- Arg羧基端EDTA，EGTA，碱性氨基酸羧肽酶Y丝氨酸羧肽酶氨基酸羧基端PMSF组织蛋白酶C琉基蛋白酶氨基端双肽，可通过K，R或P氨基端作为第二或第三个氨基酸封闭醋酸碘， 甲醛胰凝乳蛋白酶丝氨酸蛋白酶在F- Ph

2、e,T- Thr或Y- Tyr之后抑肽酶,PMSF,TPCK,-巨球蛋白胶原酶金属蛋白酶在P-X-G-P肽链中X之后EDTA,EGTA,还原剂,但无血清存在dispase金属蛋白酶无特异性EDTA，EGTA，Hg2+，重金属内肽酶Arg-C丝氨酸蛋白酶在R- Arg之后巨球蛋白，TLCK内肽酶Asp-N金属蛋白酶在D- Asp和C-Cys半胱氨酸之前EDTA，菲咯啉内肽酶Glu-C丝氨酸蛋白酶在E- Glu/Gln或D- Asp之后巨球蛋白，TLCK内肽酶Lys-C丝氨酸蛋白酶在K- Lys之后TLCK，抑肽酶，抑蛋白酶醛肽肠激酶丝氨酸蛋白酶在D-D-D-D-K-肽链中K之后Xa因子丝氨酸蛋白

3、酶在R- Arg之后PMSF,APMS,大豆胰蛋白酶抑制物无花果蛋白酶琉基蛋白酶无特异性TPCK，TLCK，-巨球蛋白激肽释放酶丝氨酸蛋白酶在一些R- Arg之后抑肽酶，抑蛋白酶醛肽木瓜蛋白酶巯基蛋白酶长期孵育时具有广泛特异性arg、lys、gly、L-CitrullineTPCK，TLCK，抑蛋白酶醛肽巨球蛋白，烷化剂胃蛋白酶酸蛋白酶广泛特异性phe、trp、tyr等疏水aa胃蛋白酶抑制素纤溶酶丝氨酸蛋白酶在K- Lys或R- Arg之后PMSF,TLCK,抑肽酶,-巨球蛋白链霉蛋白酶混合型无特异性BM完整药片蛋白酶K丝氨酸蛋白酶广泛特异性PMSF，PefablocSc枯草杆菌蛋白酶丝氨酸蛋

4、白酶无特异性PMSF，巨球蛋白，苯甲脒热溶素锌金属蛋白酶在非极性残基之前EDTA凝血酶丝氨酸蛋白酶在K- Lys之后TLCK，PMSF，抑蛋白酶醛肽抑肽酶，巨球蛋白，苯甲脒胰蛋白酶丝氨酸蛋白酶在K- Lys或R -Arg之后arg、lysTLCK，PMSF，抑蛋白酶醛肽抑肽酶，巨球蛋白蛋白酶 分类 作用位点 已知抑制物 木瓜蛋白酶 巯基蛋白酶 具有广泛特异性 TPCK,TLCK,抑蛋白酶醛肽-巨球蛋白,烷化剂 胃蛋白酶 酸蛋白酶 广泛特异性 胃蛋白酶抑制素 胰蛋白酶 丝氨酸蛋白酶 在K或R之后 TLCK,PMSF,抑蛋白酶醛肽抑肽酶,巨球蛋白人体20种氨基酸及其英文缩写名称 三字符号 单字符号

5、 丙氨酸 Ala A 精氨酸 Arg R 天冬氨酸 Asp D 半胱氨酸 Cys C 谷氨酰胺 Gln Q 谷氨酸 Glu/Gln E 组氨酸 His H 异亮氨酸 Ile I 甘氨酸 Gly G 天冬酰胺 Asn N 亮氨酸 Leu L 赖氨酸 Lys K 甲硫氨酸 Met M 苯丙氨酸 Phe F 脯氨酸 Pro P 丝氨酸 Ser S 苏氨酸 Thr T 色氨酸 Trp W 酪氨酸 Tyr Y 缬氨酸 Val V【生化】特异性蛋白酶的酶切位点胰蛋白酶arg、lys，得到以arg、lys为C末端残基的肽段。 胰凝乳蛋白酶phe、trp、tyr等疏水aa。 胃蛋白酶phe、trp、tyr等疏

6、水aa。 木瓜蛋白酶arg、lys。 葡萄球菌蛋白酶，磷酸缓冲液ph7.8时断裂glu、asp。碳酸氢铵缓冲液ph7.8或醋酸铵缓冲液ph4.0时断裂glu。 梭菌蛋白酶arg，用于不溶性蛋白的长时间裂解。 CNBr断裂Met。 羟胺断裂asngly间的肽键。 二硫键可以用巯基化合物还原法或者过甲酸氧化法断裂.。木瓜蛋白酶（Papain），又称木瓜酶，是一种蛋白水解酶。木瓜蛋白酶是番木瓜（Carieapapaya）中含有的一种低特异性蛋白水解酶，广泛地存在于番木瓜的根、茎、叶和果实内，其中在未成熟的乳汁中含量最丰富。木瓜蛋白酶的活性中心含半胱氨酸，属于巯基蛋白酶，它具有酶活高、热稳定性好、天然

7、卫生安全等特点，因此在食品、医药、饲料、日化、皮革及纺织等行业得到广泛应用。木瓜蛋白酶是一种蛋白水解酶，分子量为23406，由一种单肽链组成，含有212个氨基酸残基。至少有三个氨基酸残基存在于酶的活性中心部位，他们分别是Cys25、His159和Asp158，另外六个半胱氨酸残基形成了三对二硫键,且都不在活性部位。纯木瓜蛋白酶制品可含有：（1）木瓜蛋白酶，分子量21000，约占可溶性蛋白质的10%；（2）木瓜凝乳蛋白酶，分子量26000，约占可溶性蛋白质的45%；（3）溶菌酶，分子量25000，约占可溶性蛋白质的20%；及纤维素酶等不同的酶。番木瓜未成熟果实中含有木瓜蛋白酶(Papain)、木

8、瓜凝乳蛋白酶A(Chymopapain A )、木瓜凝乳蛋白酶B(Chym opapain B )、木瓜肽酶B (PapayaPeptidase B ) 等多种蛋白水解酶。且已知四种半胱氨酸蛋白酶的一级结构具有高度的同源性。其中，木瓜蛋白酶属巯基蛋白酶，可水解蛋白质和多肽中精氨酸和赖氨酸的羧基端，并能优先水解那些在肽键的N-端具有二个羧基的氨基酸或芳香L-氨基酸的肽键。木瓜蛋白酶papain属巯基蛋白酶，具有较宽的底物特异性，作用于蛋白质中L-精氨酸、L-赖氨酸、甘氨酸和L-瓜氨酸残基羧基参与形成的肽键。此酶属内肽酶，能切开全蛋蛋白质分子内部肽链CO-NH生成分子量较小的多肽类。最适合pH值5

9、.7(一般39.5皆可)，在中性或偏酸性时亦有作用，等电点I= 8.75；最适合温度5560(一般1085皆可)，耐热性强，在90时也不会完全失活；受氧化剂抑制，还原性物质激活。胃蛋白酶为什么不水解自身_百度文库胃蛋白酶是一种酸性蛋白酶。由胃部中的胃粘膜主细胞释放出没有活性的胃蛋白酶原。酶原 在遇到由胃壁细胞所释放的胃酸中的盐酸后切去 44个氨基酸残基将被激活，其最适pH值约为 1.52.2，在中性或碱性pH值的溶液中，胃蛋白酶 会发生解链而丧失活性。胃蛋白酶在对蛋白质或 多肽进行水解时，具有一定的氨基酸序列特异性， 倾向于水解氨基端或羧基端为芳香族氨基酸（苯丙氨酸、色氨酸和酪氨酸）或亮氨酸的肽键。胰蛋白酶和糜蛋白酶：糜蛋白酶潜在切点太多了，你联合用的话会出好多峰，要控制好反应时间或者建议glu-C配合trypsin切E + K + R或glu-C + lysyl endopeptidase切 E + K都很特异，比较好的结果，顺便说一下 trypsin太猛 不要放太多。搭配糜蛋白酶 反应要彻底点，主要的切点 W Y F T3