第9章 动物繁殖新技术

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1、第 9 章 动物繁殖新技术教学内容与学时分配【教学内容】家畜的繁殖力；繁殖障碍。【学时分配】4学时。教学目标1. 掌握胚胎移植的生理基础和处理程序。2. 掌握胚胎移植的基本原则。3. 了解现代动物繁殖新技术教学重难点【重点】1. 掌握羊的胚胎移技术。2. 掌握牛的胚胎移技术。【难点】羊的胚胎移技术教学方法 多媒体教学，配图片或动画教学过程第 12 课时授课内容 第一节 胚胎移植技术教学目标1. 掌握胚胎移植的基本原则。2. 掌握胚胎移植的基本程序。资料单第一节 胚胎移植技术一、胚胎移植的意义1充分发挥优良母畜的繁殖潜力 缩短优了良母畜的繁殖周期同时可产生更多的后代。2.缩短世代间隔，及早进行后

2、裔测定能 通过重复超数排卵，不断移植，使后代总数大大地增加，可及早地对后代进行后裔测定，MOET育种已成为现代育种工作的有力手段。3. 增加双胎率 在肉牛业和肉羊业中通过胚胎移植增加双胎率。不但提高了供体母畜的 繁殖率，同时也提高了受体母畜的繁殖率，从而大大提高了生产效率。4. 保存品种资源 胚胎长期保存是保存动物品种资源的理想方法。冷冻胚胎和冷冻精液 共同构成动物优良性状的基因库。5. 防止疾病传播 在养猪业中，采用胚胎移植技术代替剖腹取仔的方法可培育无特异病 原体（SPE）猪群。6. 使不孕母畜获得生育能力 对于不能妊娠的母畜，可以根据具体情况专门作为供体或 受体，继续发挥其繁殖作用。7.

3、 促进基础理论研究 胚胎移植技术为动物繁殖生理学、生物化学、遗传学、细胞学、 胚胎学、免疫学、动物育种学和进化等学科开辟了新的试验研究途径。8. 满足畜牧业现代化的需要 胚胎移植可以使优良母畜的繁殖效率接近或达到生物学 最高限度，并且能够迅速改进家畜的品质。二、胚胎移植的基本原则（一）胚胎移植前后供体和受体所处环境的同一性1.在分类学上的同属性 在分类学上属于同一个种。2生理上的一致性 一般供、受体发情同步差要求在土24h以内。3. 解剖部位的一致性 胚胎采自供体的输卵管就移到受体的输卵管，采自供体的子宫角 就移至受体的子宫角。（二）胚胎发育的期限 胚胎采集和移植的期限（胚胎日龄）不能超过发情

4、周期黄体的寿命，（三）胚胎的质量 在胚胎移植全部操作过程中，胚胎不应受任何不良因素的影响。（四）供、受体的状况1. 生产性能和经济价值 供体的生产性能要高于受体，经济价值要大于受体，这样才能 体现胚胎移植的优越性。2. 全身及生殖器官的生理状况 供、受体应健康、营养良好、体质健壮，特别是生殖器 官应具有正常生理机能，否则会影响胚胎移植效果。三、胚胎移植技术 胚胎移植的过程，在各种家畜基本相同，都是要经过供体、受体的选择，供体超排处理， 受体同期发情处理，配种（输精），收集胚胎（采卵）和移植胚胎（移卵）等步骤。配教材图 9-1（一）供体和受体的选择1. 供体的选择（1）生产性能高，经济价值大，具

5、备遗传优势，在育种上有价值。（2）既往繁殖史正常，无遗传缺陷，具有良好的繁殖能力，且分娩顺利。（3）体质健壮，膘情适度。2. 受体的选择 受体母畜可选用非优良品种个体，但应具有良好的繁殖性能和健康体 况，可选择与供体发情周期同步的母畜为受体。（二）药品和器械的准备1. 药品 FSH、 HCG、 PGF2 ；麻醉剂；生盐理水、 75%酒精、 2%碘酒、青霉素。2. 器械10ml和lml注射器、手术刀、剪子、镊子、止血钳、创布、缝合针、线及手 术台；冲胚管、移胚管、显微镜、表面皿、凹玻片、拔胚针等。（三）供体的超数排卵 超排技术通常用于单胎家畜，其目的是让优良母畜排出大量卵子，充分发挥其繁殖潜力，

6、是胚胎移植中的一个重要环节。1.超排方法（1 ）PMSG或FSH超排 给供体母畜注射PMSG或FSH,发情开始后1216h和20 24h各配种（输精）一次，并于第一次配种后静脉注射HCG或LH,以便排出更多卵子。激 素的应用时间和剂量因家畜种类不同而有差异。配教材表9-1（2）配合应用前列腺素（PG） PG的用法通常是在应用PMSG以后大约48h进行肌 注。牛的用量因PG种类而异，PGF为30mg，15甲基PGF为2mg，氯前列烯醇为500隧； 绵羊和山羊的用量为牛的一半。（3）PMSG与抗PMSG配合使用 抗PMSG可以消除PMSG的残留作用，明显增加 可用胚胎数，提高超排效果。2. 超排效

7、果的评判标准 超排是胚胎移植中最难控制的一个环节，在实践中只要能使一 半以上处理母畜达到满意结果，则认为超排是成功的。Q随堂练习1. 胚胎移植的基本程序是什么？2. 在胚胎移植时如何选择供体和受体？3. 如何对供供进行超数排卵？第 34 课时授课内容 第一节 胚胎移植技术教学目标1. 掌握受体的同期发情处理方法。2. 掌握采胚方法和移胚方法。资料单第一节 胚胎移植技术（四）受体的同期发情胚胎移植时，必须对受体进行同期发情处理，使受体母畜和供体的发情同期化，其发情 时间差应控制在12h之内，若超过24h （牛）或土48h （绵羊或山羊），则妊娠率急剧下降。当前比较理想的同期发情药物是前列腺素及其

8、类似物，其剂量因PG种类和用法不同而 异。15-甲基PGF2a 2mg肌注，氯前列烯醇500yg肌注。各种家畜实施超排处理的具体方法 见本书第 5 章家畜繁殖技术中的发情控制技术部分。（五）供体的发情鉴定和配种 超排处理结束后，要密切观察供体的发情征状，为确保卵子受精，一般在发情 812h输精一次，以后间隔812h再输精一次，并且要加大输精量。（六）胚胎采集在配种或输精后适当时间，从超排供体回收胚胎，准备给受体移植，称胚胎采集或胚胎 回收，简称采胚。1. 冲胚液和培养液的配制 现在多采用杜氏磷酸盐缓冲液（PBS）,不但可用于冲洗、 采集胚胎，还用于体外培养、冷冻保存和解冻胚胎。冲胚液犊牛血清含

9、量一般为3% （1%5%）,培养液血清含量为20% （1%50%）。犊 牛血清需加热（56C水浴30min）灭活。2. 采胚时间 根据配种时间、排卵的大致时间、胚胎的运行速度、胚胎的发育阶段、畜 种、胚胎所处部位及采胚方法等因素来确定是适宜的采胚时间。3. 采胚方法 采胚方法分为手术法和非手术法两种。手术法适用于各种动物，尤其是绵 羊、山羊、猪及实验动物；非手术法仅适用于牛、马等大家畜，且只能在胚胎进入子宫后进 行。（1）手术法采胚 母畜保定 一种方法是用全身或后躯麻醉，母畜进行仰卧保定。另一种方法是用局 部麻醉，使母畜站立于六柱栏中保定。两者的保定姿势均为前低后高的方式。 麻醉 全身麻醉可用

10、普鲁卡因、酒精等；局部后躯麻醉用普鲁卡因、利多卡因进行 腰荐或尾椎硬膜外腔注射，手术部位再以利多卡因作皮肤浸润麻醉。手术部位母牛可在乳房至脐孔之间的白线上剖腹，切口长约10cm；羊在乳房左侧 切口，切口长度 46cm。 采胚 主要包括有输卵管冲胚法、子宫角冲胚法和输卵管子宫角冲胚法三种。配教材图图 9-2、图 9-3 防止手术部粘连的方法 不要用金属器械挟持生殖器官。 所用手套、棉花、纱布等术前要用生理盐水浸湿，以防粘附于生殖器官上。 在生殖器官表面撒涂低浓度肝素液、樟脑油等，以防止其表面附着血或血凝块。 缝合要牢固、紧密，防止术后发生疝症。（2）非手术法采胚 由于手术法采胚在生产应用中受到限

11、制，目前在马、牛等大家畜 都用采胚管进行非手术法采胚，一般在配种后7（68）天进行。供体牛的保定和麻醉同手术法采胚，采胚时先用扩张棒对子宫颈进行扩张（青年牛尤为 必要）。采胚管消毒后，将无菌不锈钢导杆插入采胚管内。将采胚管经子宫颈缓慢导入一侧 子宫角基部，由助手抽出部分不锈导杆，操作者继续向前推进采胚管，当达到子宫角大弯附 近时，助手从进气口注入1225ml气体。当气囊位置和充气量合适时，抽出全部不锈钢导 杆。助手用注射器吸取事先加温至37 C的冲胚液，从采胚管的进水口推进，进入子宫角内， 再将冲胚液连同胚抽回注射器内，如此反复冲洗和回收56 次，将每次回收的冲胚液收入 集胚器内，并置于37C

12、的恒温箱或无菌检胚室内等待检胚。一侧子宫角冲胚结束后，按上 边方法再冲洗另一侧子宫角。配教材图 9-44. 检胚检胚应在2025C的无菌操作室内进行。在立体显微镜下，检查收集到的胚 胎数，并用一细检胚吸管将胚胎移至新鲜培养液内，在放大40200倍的复式显微镜下，进 行形态学观察，选出适合于移植的正常胚胎。配教材图 9-5、图 9-6（七）胚胎保存1.常温保存 指在常温（1525C ）下保存胚胎。通常采用含20%犊牛血清的PBS保 存液，可保存胚胎 48h。2低温保存 指在010C的较低温度下保存胚胎的方法。在此温度下，胚胎细胞分裂 暂停，新陈代谢速度显著减慢，所以较常温保存的存活时间要长。3.

13、 冷冻保存 指在干冰（-79C）和液氮（-196C）中保存胚胎。其最大优点是胚胎可 以长期保存，而对其活力无影响。胚胎冷冻方法有以下几种：（1）逐步降温法 这是一种传统方法，本法的优点是解冻后胚胎存活率较高，但操作 程序比较复杂。（2）一步细管法 即在细管内用非渗透性蔗糖溶液一步脱除抗冻剂（甘油）的方法。 其特点是从解冻到移植的全过程简单易行，利于在生产中推广应用。（3）玻璃化法 用这种方法冷冻时，胚胎内外液体能同时玻璃化，不会形成冰晶，能 较好地保护胚胎。（八）胚胎移植 胚胎移植就是将采取的可用胚胎移给受体母畜，亦称卵的移植，简称移卵。1. 移胚部位 早期胚胎少于8细胞时，一般应移植于输卵管

14、，多于8细胞应移植于子宫 角。2. 移胚方法 与采胚方法相似，也分为手术法与非手术法两种，前者适用于不能进行直 肠操作的中小家畜，后者适用于大家畜。（1）手术法移植 与采胚方法相似，对母畜进行保定、麻醉。以山羊为例，先在其乳 房一侧作一平行于腹中线的切口，暴露输卵管和子宫角，再将胚胎注入输卵管或子宫角。无论是子宫内移植还是输卵管移植，都要避免把空气注入。移植完毕后将输卵管及子宫 角送回腹腔，按回收手术中的要求缝合腹壁创口，术后做好移植记录。（2）非手术法移胚 非手术法移胚只适用于牛、马等大家畜。与采胚相似，先将母畜 保定麻醉后，再移胚。3. 影响胚胎移植妊娠率的因素（1）胚胎因素 包括胚胎质量、日龄、移植胚胎的数量、提供胚胎的供体、胚胎在体 外培养的时间、鲜胚和冻胚等。（2）母体因素 包括供、受体发情同期化程度，受体的孕酮水平，受体的营养，子宫 卵巢的生理状况等。3）其他因素 包括自然发情与人工诱导发情，移植器污染程度以及操作者熟练程度等。I随堂练习1.怎样冲胚和检胚？2.胚胎的保存方式有几种？3. 影响胚胎移植妊娠率的因素有哪些？