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1、n分四种分四种 001ml菌液均均匀匀涂布，染色 面积 1cm2 计数 每个视野细菌的平均数量 细菌数量=视野中的菌液体积 =个/mL 目镜中的视野每个视野的面积由目测微尺的单元格量出，视野中菌液的体积按比例折算 计数格计数格=44=16 大格大格 血球计数板血球计数板 1 大格大格=55=25 小格小格 1 小格小格=0.05mm0.05mm=0.0025mm2 总体积总体积=160.1250.0025=0.1mm3=（万分之一万分之一）mL 每小格深每小格深 0.1m 盖玻片盖玻片 载玻片载玻片 菌液滴 染色（或不染色）面积 1cm2 血球计数板提问：提问：数了数了125个小格中有个小格中
2、有90个细菌，样品中的细菌浓度是个细菌，样品中的细菌浓度是多少？多少？(90个个125)*400/0.1ml=2880个个/ml适用范围：适用范围：细菌个体若太小、过多，由于每一小格中细细菌个体若太小、过多，由于每一小格中细菌层层叠加，相互遮挡，难以准确计数。菌层层叠加，相互遮挡，难以准确计数。数数数数细菌（或其他微生物或细胞）数目，（细菌（或其他微生物或细胞）数目，（一般数一般数125个小格个小格），），折算折算样品细菌浓度；样品细菌浓度；n比例比例样品菌液与等体积的血液混合，样品菌液与等体积的血液混合，观测二者比例观测二者比例样品溶液与等体积的血液混合 涂片 平均每个视野中平均每个视野中细
3、菌数量细菌数量/红血球红血球的数量的数量比例为比例为5.55.5：1 1，则细菌数量，则细菌数量=？5.55.5400400万个万个/m l/m l=2.2=2.210107 7个个/mLmL样品样品n红血球红血球数已知数已知(男性男性，女性，女性)，平均平均400400万个万个/ml/ml 分光光度法测分光光度法测 浊度浊度 1 2 3 4其他细菌计数法其他细菌计数法 细菌数量细菌数量 10 100 1000 10000 个个/mL 细菌数量细菌数量 制标准曲线制标准曲线 菌液浊度菌液浊度n分分固体培养法和液体培养法固体培养法和液体培养法 1mL 混合混合 1mL 混合混合 9mL 10mL
4、 1 ：10-1 10-1 ：10-2 10-2 10-3 10-4 10-5得到不同得到不同稀释度稀释度 （10-x）菌液菌液 10-2 10-3 10-4 10-5 n细菌数量细菌数量=？n细菌数量细菌数量=数出的菌落数数出的菌落数/稀释度稀释度n例如：例如：10-5稀释度时菌落数为稀释度时菌落数为125个个n细菌数量细菌数量=125/10-5=1.25107个个/mLn 平板计数法是采用最广的一种活菌计数法平板计数法是采用最广的一种活菌计数法n如国标法水中如国标法水中细菌菌落总数细菌菌落总数（CFUColony Forming Unit）的测定的测定 。n注意：注意：作空白及取平行样（作
5、空白及取平行样（2 23 3组）均值减小组）均值减小误差误差n特点：特点：液体培养、统计学查表计数液体培养、统计学查表计数n又称又称MPN法法（或最可能数法）（或最可能数法）n例如例如测定测定SRB（硫酸盐还原菌，硫酸盐还原菌，厌氧厌氧）的数量）的数量n提问：提问：能用稀释平板法计数吗？为什么？能用稀释平板法计数吗？为什么？n一般一般不能，厌氧菌暴露在空气中不能生长不能，厌氧菌暴露在空气中不能生长（除非厌氧（除非厌氧培养箱）培养箱）n对这类菌可以利用它们生长时产生的对这类菌可以利用它们生长时产生的硫化亚铁黑色特征硫化亚铁黑色特征进进行行深层隔氧液体培养深层隔氧液体培养，按，按MPNMPN法进行
6、计数。法进行计数。3 3 2 010 -4 10-5 10-63 10-10-2 10-3 10-4 10-5在液体表面加一层无菌在液体表面加一层无菌液体石蜡隔绝氧气，液体石蜡隔绝氧气，恒温恒温37培养培养14天天记录变黑的试管情况记录变黑的试管情况 320 320 1010-4-4数量数量 指标指标 细菌最细菌最 可能数可能数 数量数量 指标指标 细菌最细菌最 可能数可能数 数量数量 指标指标 细菌最细菌最 可能数可能数 数量数量 指标指标 细菌最细菌最 可能数可能数 000 0.0 121 1.5 223 4.0 320 9.5 001 0.3 130 1.6 230 3.0 321 15
7、.0 010 0.3 200 0.9 231 3.5 322 20.0 020 0.6 201 1.4 232 4.0 323 30.0 100 0.6 202 2.0 300 2.5 330 25.0 101 0.4 210 1.5 301 4.0 331 45.0 110 0.7 211 2.0 302 6.5 332 110.0 102 1.1 212 3.0 310 4.5 333 140.0 110 0.7 220 2.0 311 7.5 111 1.1 221 3.0 312 11.5 120 1.1 222 3.5 313 16.0 水中大肠菌群水中大肠菌群、铁细菌、硝化菌、亚硝化菌铁细菌、硝化菌、亚硝化菌也也用这种方法进行数量统计。用这种方法进行数量统计。滤膜，细菌不能通过 支撑体，支撑滤膜 抽气抽气)离心沉淀离心沉淀 滤膜过滤滤膜过滤计算计算105110下进行干燥下进行干燥称重称重 550下灼烧下灼烧2h称重称重105110下进下进行干燥恒重行干燥恒重称重称重
环境微生物学教学课件132生长量测定方法
