气单胞菌属的鉴定

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1、气单胞菌属的鉴定1、标本要求：1.1 尽量用药前采集标本。1.2 痰液：病人清晨咳痰于无菌、防漏小塑料盒内，切勿唾液送检。1.3尿液：病人留取12h尿液，送检。1.4粪便：病人留取粪便5 10g,送检。1.5 脑脊液及其它无菌体液：用无菌瓶直接送检。血标本不要冷冻。1.6不可接受的标本：干的拭子、蜡盒、未消毒容器、留取24h后的尿或痰、破裂的瓶子、 标本泄漏、标本无标签。2、仪器35C孵箱、普通光学显微镜3、试剂 碱性蛋白胨水、麦康凯平皿、1盐酸四甲基对苯二胺水溶液、七叶苷培养管、氨基酸脱羧培养管、氧化发酵(0-F)培养管、糖醇发酵管、湖南长沙天地人弧菌鉴定板。4、试验方法及原理：4.1 氧化

2、酶用法：将滤纸片在1%盐酸四甲基对苯二胺水溶液中浸泡约1min,印刮平板上的菌落。 结果观察：10s内观察颜色变化，变红一紫黑色为阳性，不变为阴性。4.2 Hugh-Leifson氧化发酵(0-F)培养管用法：用针挑取可疑菌落穿刺接种于两支0-F培养管中，其中一支滴加无菌石蜡油，高 度不少于1cm。35C培养过夜。结果观察：两支培养管均无变化为产碱型或者不分解糖型；两支培养管均产酸为发酵型 若不加石蜡的培养管产酸为氧化型。可以借此试验与非发酵菌区分开。4.3 氨基酸脱羧试验方法：取待检菌接种于氨基酸脱羧培养管和对照管中，封石腊油，35C培养过夜，观察 结果。结果：培养管变紫色为阳性，黄色为阴性

3、。对照管应保持黄色。、:I 注意点：（1）.培养管的pH值很重要。（2）加封石腊油造成厌氧环境。因为在厌氧情况下氨基酸脱羧生成的胺才稳定。（3）对照管如不呈黄色，则氨基酸脱羧酶试验不能作出判定。4.4 糖、醇发酵试验方法：接种待检菌于糖醇发酵管，35C孵育过夜，观察。结果：培养管变红色为阳性，不变色或黄色为阴性。4.5 七叶苷试验方法：接种被检菌于七叶苷培养管中，35C过夜。观察结果：培养基变黑为阳性，不变为阴性。5、常规鉴定过程：5.1形态与染色：革兰阴性直杆菌，有时呈球杆状，大小0.3 1.0umX1.0 3.5um。除杀 鲑气单胞菌外均有动力，5.2培养特性：营养要求不高，在普通培养基上

4、可以生长，在TCBS培养基上不生长。嗜冷菌 群在35C以下生长，37C不生长，嗜中温菌群1042C之间生长。可用碱性蛋白胨水对含 菌量较少的标本进行增菌培养。豚鼠气单胞菌在MAC上发酵乳糖，嗜水气单胞菌和维隆气单 胞菌在血平板上有溶血现象，菌落灰白色、光滑、湿润、凸起、2mm大小的菌落。5.3生化反应及鉴定要点：利用细菌分解七叶苷、阿拉伯糖、水杨苷、产气等几项试验可将 已知在临床标本出现的气单胞菌菌种分开。具体的鉴别间下表：表：气单胞菌属内及类志贺邻单胞菌的鉴别特性嗜水豚鼠维隆（温和型）维隆（维隆型）简达舒伯特易损类志贺邻单胞菌DN ase+脲酶KCN生长+VV吲哚+匍萄糖产气+精氨酸双水解+

5、赖氨酸脱羧酶+鸟氨酸脱羧酶+V-P+发酵 试 验阿拉伯糖+乳糖+蔗糖+肌醇+甘露醇+水杨苷+V纤维二糖V+VV+七叶苷水解+羊血平板B溶血+VV头抱噻吩敏感+氨苄西林敏感+0/129,10/150ug/+/+6、药敏试验：挑取单个麦康凯平板上单个菌落（革兰染色阴性杆菌,氧化酶阳性）,配成 0.5 麦氏单位药敏液,滴加于天地人弧菌属药敏板中进行药敏试验,结果通过天地人药敏软件判 读。具体可参看天地人药敏板半自动操作规程。7、临床意义：本菌属为水中的常居菌，其中杀鲑气单胞菌为嗜冷菌，通常存在于海水中引起鱼类等的 感染，不引起人类的感染，气单胞菌引起肠道内的感染常见于5 岁以下的儿童和成人。有明 显

6、的季节分布。是夏季腹泻的常见病原菌之一。肠道外感染主要为皮肤和软组织的感染，主 要由嗜水气单胞菌和维隆气单胞菌引起。菌血症一般发生在免疫力低下的人群，90的菌血 症由亲水气单胞菌和维隆气单胞菌（包括两个生物群）引起。气单胞菌还可以引起眼部感染、 脑膜炎、肺炎、胸膜炎、骨髓炎、关节炎、腹膜炎、胆囊炎、静脉炎和尿道感染等。8、质量控制：本室通过参加全国以及全省的每年3 次的质量控制，另外本室还坚持进行了各种标准菌 株的耐药及各种鉴定试验方法的质控，以保证本室结果的准确性。9、参考文献:9.1 张卓然、倪语星等临床微生物学和微生物检验第三版，人民卫生出版社。9.2 袁汉尧等临床检验诊断学，广东科技出版社。