ABO亚型鉴定PPT课件

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1、武汉亚洲心脏病医院武汉亚洲心脏病医院检验中心检验中心 A和B抗原是红细胞膜表面糖蛋白、糖脂分子的糖类决定簇。A抗原末端糖基:N-乙酰氨基半乳糖 B抗原末端糖基:D-半乳糖。Karl Landsteiner(1868-1943)ABOABO抗原不是抗原不是ABOABO基因的直接产物基因的直接产物ABO血型分子生物学基础血型分子生物学基础ABO亚型理论亚型理论A亚型分类依据亚型分类依据红细胞上的A抗原依次减少，H抗原的活性则相对增强幻灯片 31、红细胞被抗A及抗A1凝集的程度2、红细胞被抗AB凝集的程度3、红细胞的H反应性程度4、血清内有无抗A1抗体5、分泌型人唾液内具有的A及H物质抗-A1抗-A

2、B抗-HA2C抗抗-A、抗、抗-B、AC、BC、OC亚型亚型试剂试剂常常规规试试剂剂A1和和A2l 占A型的99.99%l 血清学区别：依赖抗-A1抗血清试剂红细胞唾液（分泌型）-A-B-AB-A1-HA1A2BOA14+04+2+W/0004+0A/HA24+04+03+0/W04+0A/HA int4+04+2+3+004+0A/H1、如无抗-A1，A1和A2不需加以区分。2、产生抗-A1的频率，A2型为1%-8%；A2B型为22%-35%。3、抗-A1在37反应才具有临床意义。A3和和Aend两者均呈现mf外观抗血清试剂红细胞唾液（分泌型）-A-B-AB-A1-HA1A2BOA33+mf

3、03+mf03+0/w04+0A/HAend1+mf01+mf04+0/w04+0H1、A3凝集细胞占60%；Aend凝集细胞占10%，Aend需多次离心 才能被发现。2、出现mf时，要进行临床调查，了解患者是否是为白血病或骨 髓移植，如疑是疾病原因造成，应慎报亚型。Ax、Ael和和Am抗血清试剂红细胞唾液（分泌型）-A-B-AB-A1-HA1A2BOAxw01+-3+04+w04+0HAel00004+w04+0HAm0-1+00-1+04+004+0A/HAy极罕见，表现型与Am很相似各种弱各种弱A亚型的鉴别要领亚型的鉴别要领弱凝集弱凝集 A3/Ax/Aend混合外观(Mf）60%A310

4、 红细胞呈十分弱的mf凝集Aend与抗-A呈弱凝，与抗-AB凝集增强Ax不凝集不凝集吸附放吸附放散抗散抗-AAm/Ay/Ael容易吸附放散抗-AAm分泌型唾液中有一定量的A物质不容易吸附放散抗-AAy分泌型唾液含少量的A物质吸附放散抗-AAel分泌型唾液只含H物质无A物质B亚型亚型l B3、Bx、Bel、Bend、Bml 血清学特点同相应A亚型l 不同之处，鉴定时不需抗-A1试剂，及A2细胞抗血清试剂红细胞唾液（分泌型）-A-B-AB-A1-HA1A2BOB303+mf3+mf04+4+3+0/w0B/HBend01+mf004+4+4+0/w0HBx0w1-3+04+4+3+w0HBel00

5、004+4+4+w0HBm00-1+0-1+04+4+3+00B/HAB亚型亚型l A2B、A3B、AxB、AmB、AelB、AendB、AB3、ABx、ABm、ABel、ABendl 同A亚型和B亚型的血清学特点l 不同之处：不需抗AB血清鉴定；与抗H的凝集强度弱，呈w/0，同A1B抗血清试剂红细胞唾液（分泌型）-A-B-AB-A1-HA1A2BOA1B4+4+4+4+w/00000H/A/BAxBw4+4+0w/0w000B/HABx4+w4+4+w/000w0cisABl cisAB是一种罕见的ABO亚型，人群中的发生率非常低，大约在170000到580000之间。最早出现起源于亲代与子

6、代的ABO血型是遗传的矛盾，按照ABO三复等位基因学说和孟德尔遗传定律，AB和O型的双亲不可能生下AB型或O型的子代。l 分子机理：在A等位基因的基础上发生了碱基错义突变，变异的A基因具有编码双功能活性酶的能力，血清学除了表现A抗原的特异性外，还表现少量B抗原的特异性。l 血清学特点：A抗原接近正常或弱略于正常；B抗原较正常弱很多；抗血清试剂红细胞唾液（分泌型）-A-B-AB-A1-HA1A2BOcisAB2-4+2+4+04+001-3+0H/AABx4+w4+4+w/000w0B（A）l 同cisAB的遗传方式相似，也是一种罕见的ABO亚型，cisAB是在1964年发现，B(A)是在198

7、5年发现；l 分子机理：被认为是遗传学上的B型，在B基因基础上发生错义突变，由于单碱基突变，变异的B基因具有编码双功能活性酶的能力，血清学除了表现为B抗原特异性外，还表现为少量A抗原特异性。l 血清学特点：较弱的A抗原和接近正常的 B抗原特异性，血清中有较强的抗-A。抗血清试剂红细胞-A-B-AB-A1-HA1A2BOB（A)2+4+4+04+1-3+1+00AxBw4+4+0w/0w000cisAB、B(A)l 正常AB型，A和B等位基因分别位于9号同源染色体的ABO位点上，分别从父方或母方遗传得到。l 极少数人类个体的一条9号染色体上存在一个cisAB或B（A）基因，它编码的酶具有双功能活

8、性，可以同时催化A抗原和B抗原的合成。l cisAB的A抗原接近正常，B 抗原较正常弱很多；B(A)的B抗原接近正常，A抗原弱很多。l cisAB或B（A）血清中存在针对弱抗原产生的不规则抗体l 与抗H反应强度仅次于甚至接近与O细胞。l 血清学方法判断为AB亚型，需分子生物学验证l cisAB或B（A）是从一个亲本遗传而来的，因此基因型是cisAB/O或或 B（A）/O，表现型为AB型。l 带有cisAB或B(A)等位基因的个体，若与O型血的人（基因型O/O）生育，子女的血型可能表现为AB型或O型，而不像通常AB型血与O型血的父母只能生出A或B型血的子女。孟买型和类孟买型孟买型和类孟买型l 孟

9、买型和类孟买型在ABO血型系统中为罕见的稀有血型，常因交叉配血不合而被发现。l 为红细胞上H抗原缺乏而使ABO血型物质不能正常合成的一类血型。l 遗传特点：与A、B基因相对独立的H-h系统是hh纯合子，不能合成表达A或B基因的前提物质-H物质孟买型类孟买型 H抗原缺乏，非分泌型（H和Se基因均无活性），其红细胞和分泌液中均无ABH物质；血清中有很强的抗-H，血清与所有O型人的红细胞反应都很强。H抗原缺乏，分泌型（H基因无活性而SE基因有活性），其分泌液中含有正常ABH物质，红细胞上含有少量ABH物质，一般认为可能为血浆中的ABH物质吸附到红细胞上所致，可通过吸收放散试验测得。红细胞上ABH抗原

10、缺乏或弱表达，血清中存在抗H或抗HI抗体1952年发现1961年发现孟买型和类孟买型孟买型和类孟买型血清学特点抗血清试剂红细胞唾液（分泌型）-A-B-AB-A1-HA1A2BOOh00004+4+4+3+-Omh 00004+4+4+wHAmhw0w00w04+wA/HBmh0ww004+3+wwB/H血清学方法繁琐，结合正反定型、抗体筛选、吸收放散试验、唾液中的血型物质测定以及家系调查来综合分析。分子生物学方法进行ABO基因定型简便、快速、可靠，成为输血医学的研究热点。ABO正反定型不一致正反定型不一致原因类型处理正定型额外抗原多凝集获得性B直抗强阳性抗原减弱或缺失血型物质增多疾病原因亚型反

11、定型抗体减弱或缺失年龄因素丙球减少或缺乏额外抗体自身抗体假凝集亚型不规则抗体同种抗体ABO正反定型不合原因分析正反定型不合原因分析正定型反定型自身C可能原因抗-A抗-BA1CBCOC14+01+4+0024+4+2+2+2+2+33+4+1+00044+4+2+2+2+05002+4+006004+4+4+074+004+3+0同种抗体A亚型缗钱状凝集冷自身抗体AB型的亚型同种抗体A型 抗-HO型A亚型同种抗体孟买型 同种抗体ABO正反定型不一致正反定型不一致l 红细胞三洗l 6管：-A、-B、AC、BC、OC、自身C 正常：2管强凝集，其他4管阴性（正定型4+；反定型2+）异常：1、出现其他

12、的凝集（不规则抗体)2、不到2管强凝集（ABO亚型、抗原、抗体减弱）不规则抗体不规则抗体亚型亚型6管反应结果管反应结果ABO亚型鉴定流程亚型鉴定流程1、人-A、人-B2、-H (新鲜BC、OC对照）3、-AB(单独A亚型、B亚型）4、-A1 (A亚型的鉴定)5、排除其他不规则抗体H抗原强弱：抗原强弱：OA亚亚/B亚亚 B AB亚型亚型 A1 A1BABO亚型案例分析亚型案例分析案例案例1反应条件正定反定-A-BAcBcOc自身cIS01+w4+1+w00二次02+w4+1+w004*10 min02+2+RT恢复02+w2+w00Step1正定型多次离心4反应吸收放散反定型多次离心4 反应加大

13、血清量吸收放散增强抗原抗体反应分析：1、强凝集1管，弱凝集2管。2、B抗原减弱，血清中存在正常抗A,同时还有与BC反应的弱不规则抗体3、怀疑B亚型4、进一步实验：Step2-HPCOCBCIS4+4+2+Step3 关键步骤关键步骤人-A人-B-ABIS00二次001+S402+w考虑到人源抗血清效价比较低的缘故，并未得到预期的结果，但4显示有B抗原存在，与抗-AB也未见增强H抗原：OA亚/B亚 B AB 亚型 A1 A1B 根据以上的反应格局，高度怀疑Bx,鉴于Bx亚型的血清学特征，即为血清中存在能凝集常规BC的抗体，为减少偶然性，选择健康B型2份，O型2份（对照），分别与待检血清反应2dp

14、s+1dBC-1BC-2OC-1OC-2IS00二次00排除其他不规则抗体，进一步证实为不规则抗BStep4 根据以上结果，该病例红细胞上有弱的B抗原，血清中有强的抗A 和弱的不规则抗B,红细胞与抗H呈强阳性凝集，根据血清学格局，初步判断为Bx亚型，须经分子生物学实验进一步确认。结论结论案例案例2反应条件正定反定-A-BAcBcOc自身cIS2+02+S3+S00二次2+S02+S4+00Step1分析：1、强凝集只有1管，弱凝集有2管。2、A抗原减弱，血清中有正常抗B，同时还存在 与A1C反应的比较弱的不规则抗体 3、怀疑A亚型 4、进一步实验：抗-A1、抗-AB、抗-H，A2细胞Step2

15、人-A人-B-A1-ABIS2+004+二次2+s004+A1C3+与抗-A1不反应，为A亚型；同时与抗-AB凝集增强，进一步证明为A亚型血清与A1C反应，与A2C不反应，证明存在不规则抗-A1抗体Step3 PS+A2C抗-A+A2CIS03+w二次03+Step4-HPCOCBCIS3+S4+2+H抗原增强，凝集强度与O细胞相当 根据以上的反应格局，高度怀疑Ax。2dps+1dAC-1AC-2OC-1OC-2IS2+W2+W00二次2+2+00排除其他不规则抗体，进一步证实为不规则抗A1Step5结论结论 根据以上结果，该病例红细胞上有弱的A抗原，血清中有强的抗A 和弱的不规则抗A1,红细

16、胞与抗H呈强阳性凝集，根据血清学格局，初步判断为Ax亚型，须经分子生物学实验进一步确认。案例案例3反应条件正定反定-A-BAcBcOc自身cIS2+s4+1+w000二次3+w4+1+w0004*10 min2+w1+sRT恢复1+s000Step1分析：1、强凝集1管，弱凝集2管。2、A抗原减弱，B抗原正常，血清中存与AC反应的弱不规则抗体 3、怀疑A亚型B 4、进一步实验Step2人-A人-B-A1IS2+w4+0二次2+4+0A1C3+与抗-A1不反应，为A亚型血清与A1C反应，与A2C不反应，证明存在不规则抗-A1抗体Step3 PS+A2C抗-A+A2CIS03+w二次03+Step

17、4-HPCOCBCIS4+2+二次1+w4+2+sH抗原未见增强，因为有正常的B基因 根据以上的反应格局，高度怀疑根据以上的反应格局，高度怀疑AxB2dps+1dAC-1AC-2OC-1OC-2IS0000二次00排除其他不规则抗体，进一步证实为不规则抗A1Step5案例案例4Step1反应条件正定反定-A-BAcBcOc自身cIS1+4+2+s000二次1+s4+3+000AxB?B(A)?Step2IS2+二次2+Step3 PS+A2C人-A人-B-A1IS04+0二次04+0A1C3+人-A并未得到预期的结果。抗-A1不反应，初步判断为A亚B。仍然不能区分是AXB还是B(A)排除AXB

18、，AXB与A2细胞不反应，此点是鉴别B(A)与AXB最有价值的依据之一-HPCOCBCIS4+4+2+s二次4+4+2+sStep4AXB与抗-H呈弱凝集，而B(A)与抗-H呈强凝集，这也是区分两者的一个非常重要的标记结论：根据以上血清学实验，初步定为B(A)亚型，须经分子生物学实验进一步确认。B(A)亚型的特点：1、红细胞上A抗原减弱，B抗原基本正常 2、H抗原增强，与O细胞H抗原相当 3、血清中的抗-A与A1、A2细胞均有反应B(A)与AXB的区别：1、B(A)的H抗原增强，AXB不增强 2、B(A)的血清与A1、A2细胞均反应；AXB只与 A1 细胞反应。案例案例5反应条件正定反定-A-

19、BAcBcOc自身cIS4+002+00二次4+02+004*10 min1+w2+sRT恢复1+w02+00Step1分析：1、强凝集1管，弱凝集2管。2、A抗原正常，B抗原减弱，血清中存与BC反应的弱不规则抗体 3、怀疑AB亚型 4、进一步实验：Step2-HPCOCBCIS03+1+w二次3+s1+41+4+1+sStep3人-A人-B-A1IS3+S04+二次3+S044+人源抗血清显示有正常A抗原，有比较弱的B抗原。此处增加抗-A1的目的用以区分CisABH抗原未见增强，CisAB呈4+,两者可区分 根据以上的反应格局，怀疑根据以上的反应格局，怀疑ABx2dps+1dBC-1BC-2

20、OC-1OC-2IS2+2+00二次2+s2+s00排除其他不规则抗体，进一步证实为不规则抗BStep4案例案例6反应条件正定反定-A-BAcBcOc自身cIS4+2+02+w00二次4+3+w02+004*10 min02+s00Step1分析：1、强凝集1管，弱凝集2管。2、A抗原正常，B抗原减弱，血清中存与BC反应的弱不规则抗体 3、怀疑AB亚型 ABx?CisAB?4、进一步实验：Step2人-A人-B-A1IS1+s0二次2+s1+043+s2+A1C3+与抗-A1不反应，说明A抗原为非正常A1型。初步排除ABX-HPCOCBCIS4+4+2+w二次4+4+2+Step3ABx与抗-

21、H呈弱凝集，而CisAB与抗-H呈强凝集，这是区分两者的一个非常重要的标记结论：根据以上血清学实验，初步定为CisAB亚型，须经分子生物学实验进一步确认。cisAB亚型的特点：1、红细胞上A抗原基本正常，B抗原弱于正常B抗原 2、H抗原增强，与O细胞H抗原相当 3、血清中存在弱的抗-BcisAB与ABx的区别：1、cisAB的H抗原增强，ABx不增强 2、cisAB的红细胞与抗-A1不反应；ABx与抗-A1反应 案例案例7反应条件正定反定-A-BAcBcOc自身cIS003+s000二次004+1+w004*10 min001+s00Step1分析：1、强凝集1管，弱凝集1管。2、O型：抗-B

22、减弱？3、B亚型：B抗原未检出，血清中有不规则抗B?4、进一步实验：Step2-HPCOCBCIS4+4+2+二次4+4+2+Step3人-A人-B-ABIS000二次0004000人源血清和抗-AB均显示不反应。H抗原增强，B亚型和O型仍然无法区分。由于该标本为健康献血员，无其他疾病史，可排除抗体减弱的可能。进一步实验，证明是否存在B抗原。Step4 吸收放散试验 PC OC（对照）4 1h离心吸出上清4NS洗涤6次56热放散10min立即离心吸出上清液（放散液）再次离心放散液中加入BC，4 过夜人-B离心看结果4过夜PC放OC放IS（Bc)2+证明有B抗原存在 根据以上的反应格局，怀疑根据

23、以上的反应格局，怀疑Bel2dps+1dBC-1BC-2OC-1OC-2IS0000二次1+w1+w00排除其他不规则抗体，进一步证实为不规则抗BStep5结论结论l 根据以上血清学试验，初步鉴定为Bel型。l 其特点：l 红细胞上仅有很少量的B抗原，常规的血清学方法难以检测出，需通过吸收放散试验才能证明l 血清中通常存在不规则抗Bl 需与抗B减弱的O型相区别案例案例8反应条件正定反定-A-BAcBcOc自身cIS2+mf4+0000二次2+mf4+0000+4dPs004*10 minRT恢复00Step1分析：1、强凝集1管，弱凝集呈mf。2、mf：疾病原因、异型输血、嵌合体、骨髓移植、亚

24、型 3、怀疑A3B 4、进一步实验：鉴定血清中是否存在不规则抗-A1，排除Step2-HPCOCBCIS4+2+二次1+4+2+Step3人-A人-BIS2+mf4+二次2+mf4+人-A也显示为mfH抗原未见增强结论结论l 根据以上血清学试验，可初步鉴定为A3B，进一步进行分子生物学试验确定l 特点：红细胞与抗-A、抗-AB反应，表现为mf，大约有60%凝集，周围有约40%未凝集红细胞 血型鉴定当出现mf外观时，对于白血病患者不轻易报亚型我科案例我科案例Step1反应条件正定反定-A-BAcBcOc自身c强生卡3+4+4+0/长春卡2+4+4+00/IS04+3+000多次04+3+0004

25、*10min04+IS1+4+二次1+s4+AxB?B(A)?长春博得长春博得南京欣迪南京欣迪Step2IS2+二次2+Step3抗筛强声卡000排除血清中ABO血型以外的不规则抗体进一步排除AXB，AXB与A2细胞不反应，此点是鉴别B(A)与AXB最有价值的依据之一-HPCOCBCABCIS2+3+-0二次2+s3+s1+w+-Step4 PS+A2CAXB与抗-H呈弱凝集，而B(A)与抗-H呈强凝集，排除AXB结论：根据以上血清学实验，初步定为B(A)亚型，须经分子生物学实验进一步确认。送上海血液中心进行分子生物学验证，基因型为BA04/O04。遗憾之处：未进行家系调查2dps+1dAC-1AC-2OC-1OC-2IS2+s2+s00二次3+w3+w00Step5 进一步排除其他不规则抗体的存在进一步排除其他不规则抗体的存在