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1、实验一母液的配制及培养基的制备一、实验目的（1）掌握配制培养基母液的基本技能（2）掌握培养基各种母液的保存方法（3）掌握高压蒸汽灭菌锅的操作步骤及方法（4）掌握各种培养基的组成和配制（5）掌握培养基消毒灭菌的方法二、实验原理培养基是外植体生长的营养物质，通常包括大量元素、微量元素（无机盐类）、 维生素、氨基酸、糖和水。至今，基本培养基的配方有几百种，但较常用的仅有 一二十种，一是基本培养基如 White、Nirsch、Blaydes、N6、B5、NT 等；二是 完全培养基，即在基本培养基的基础上，根据各种不同实验要求，附加一些物质， 如各种植物生长调节剂：BA、ZT、KT、2,4-D、NAA、
2、IAA、IBA、GA等，以及其 他复杂的有机附加物，包括有些成分尚不完全清除的天然提取物，如，椰乳、香 蕉汁、酵母提取物等。培养基的成分中，除上述各种试剂外，若加入适量凝固剂（如琼脂、冷凝胶）， 则构成固体培养基，不加凝固剂，则为液体培养基。固体培养基和液体培养基各 有优缺点：固体培养基所需设备简单，使用方便。培养物仅能吸收接触培养基部 分及周围小部分营养，不能充分利用培养容器中的养分，而且培养物生长过程中， 排除的有害物质积累，造成自我毒害，必须及时转移。液体培养基则需要摇床， 转床之类的设备，通过振荡培养，给培养物提供良好的通气条件，营养供应周期 化，有害物质能在一定程度上稀释有利于外植体
3、的生长。配制培养基的水应为纯水或单蒸馏水。化学药品用分析纯或化学纯，称量须 准确。对于常用基本培养基的配制，可分别配制成10倍或100倍的混合母液， 贮存于冰箱中，用时再按比例稀释混合。配制混合母液，要根据药剂的化学性质，分别配成混合液。通常对大量无机 盐类，原则上可以混在一起，配成10倍浓度的母液，但若配成100倍浓度，在 冷存时会产生沉淀，大量元素中的硫酸镁和氯化钙要分别单独配制，因为高浓度 的钙离子与镁离子、磷酸盐混合，会产生不溶性沉淀。铁盐也容易发生沉淀，需 要单独配制。微量元素和维生素可配制成100倍浓度的混合母液。配制成的各种 母液，贮放在冰箱内备用。生长调节剂也分别配成溶液，贮放
4、于冰箱。三、试剂及材料电子天平、高压灭菌锅、PH试纸、移液管、量筒、烧杯、玻璃棒、MS培养 基配方各试剂、蔗糖、琼脂、O.lMNaOH、O.lMHCl、蒸馏水四、操作第一部分 MS培养基母液的配制与保存1、母液配制为工作方便起见，常用培养基通常先按配方配制成浓度高于实际使用浓度若 干倍的母液，使用时按按比例稀释即可。MS培养基母液1) 大量元素的配制(1) 称量 用天平称取下列药品，分别放入烧杯NH4NO333KNO338CaCl2.2H2O8.8MgS04.7H207.4KH2P043.4(2) 混合 用少量蒸馏水将药品分别溶解，然后依次混合;(3) 定容 加蒸馏水定容至1000ml，成20
5、倍液。2) 微量元素的配制(1) 微量I的配制：(a) 称量 用天平称取下列药品，分别放入烧杯CoCl20.25(b) 混合 用少量蒸馏水将药品分别溶解，然后依次混合;(c) 定容 加蒸馏水定容至100ml,成100000倍液。(2) 微量II的配制：(a) 称量 用天平称取药品NaMo04.2H20, 0.25g放入烧杯(b) 溶解 用少量蒸馏水将药品溶解；(c) 定容 加蒸馏水定容至100ml,成10000倍液。(3) 微量III的配制：(a)称量 用天平称取下列药品，分别放入烧杯MnS04.H201.69ZnS04.7H200.86H3BO30.62KI0.083(b)混合 用少量蒸馏水
6、将药品分别溶解，然后依次混合；(4) 微量元素的配制从微量I中吸1ml,微量II中吸10ml与微量III混匀定容成1000ml，即得微量元 素1000ml母液。3) 有机元素的配制(1) 称量 用天平称取下列药品，分别放入烧杯肌醇5烟酸0.025盐酸吡哆醇(VB6)0.025盐酸硫胺素(VB1)0.005甘氨酸0.1（2）混合 用少量蒸馏水将药品分别溶解，然后依次混合；（3）定容 加蒸馏水定容至250ml,成200倍液，母液用棕色瓶盛装。4）铁盐的配制（1）称量 用天平称取下列药品，分别放入烧杯FeS04.7H201.39Na2.EDTA.2H20 1.865（2）混合 将药品溶解在适当体积的
7、蒸馏水中，加热搅拌，完全溶解后二者混 合（3）定容 加蒸馏水定容至250ml，成200倍液，母液用棕色瓶盛装。2、母液的保存1）装瓶 将配制好的母液分别倒入瓶中，母液瓶上贴好标签，注明母液号、配 制倍数（或浓度）与配制日期。2）储藏 将母液瓶储放在冰箱内备用。3）定期检查有无沉淀和微生物污染，如果出现沉淀或微生物污染，则不能使用, 需重新配制。第二部分MS固体培养基的配制1、吸取母液按母液顺序和规定量，用吸管吸取母液，放入盛有一定量蒸馏水的烧杯中名称倍数取用量/ml1 .日一*大量兀素2010微量兀素1002有机2001铁盐20012、加糖放入蔗糖6g3、添加激素根据所配培养基体积及激素浓度添
8、加所用激素的量4、定容加蒸馏水定容至200ml5、调整pH值 经酸度计或pH试纸测试，用lmol/L的NaOH和1 mol/L的HC1 把培养基的pH值调整到5.86.0之间。6、加入固化剂每个空培养瓶加入琼脂粉0.28g7、液体培养基分注把配置好的液体培养基分注到培养瓶中，每瓶装40ml。分 注后加盖，贴上标签，注明培养基的名称与配制时间等。8、培养基灭菌 分装好的培养基置于高压蒸汽灭菌锅中灭菌，灭菌条件为温度 121C，压力1.1kg/cm2，灭菌时间20min。灭菌后培养基放置室温下，冷凝后待 用。五、作业1、完成实验实训报告2、1周内观察培养基的污染情况2-3次，注意识别不同类型的污染。
母液的配制及培养基的制备
