细胞信号转到PPT课件

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1、ph causes non-autonomous overgrowth in mosaic eyes 主要技术手段：主要技术手段：MARCM技术技术 TUNEL法法MARCM技术技术如果想在嵌合体中敲除基因，如果想在嵌合体中敲除基因，用用FLP/FRT系统系统 如果想在嵌合体中增加基因表达，如果想在嵌合体中增加基因表达，用用UAS/Gal4系统系统UAS/Gal4系统系统GAL4/UASGAL4/UAS系统是一种转基因体系。系统是一种转基因体系。原理：利用特定的启动子或增强原理：利用特定的启动子或增强 子，以组织特异性的方式激子，以组织特异性的方式激 活酵母活酵母转录激活子转录激活子GAL4G

2、AL4的表的表 达，达，GAL4GAL4又以同样的方式引又以同样的方式引 起起GAL4GAL4反映反映元件元件（UASUAS）-靶靶 基因的转录。基因的转录。GAL4UASUAS/Gal4系统系统FLP/FRT 系统系统果蝇含有四对染色体，每对染果蝇含有四对染色体，每对染色体中的一条被称为色体中的一条被称为同源染色同源染色体体，分别来自于母本和父本。，分别来自于母本和父本。在正常的细胞分裂中，一对同在正常的细胞分裂中，一对同源染色体总是能源染色体总是能忠诚地复制忠诚地复制，然后分配到新分裂的细胞中然后分配到新分裂的细胞中 FLP是一个来自酵母的染色体重组酶是一个来自酵母的染色体重组酶FRT则是

3、则是FLP催化的一段催化的一段DNA序列序列同源重组产生会两个子细胞中，一个含有双份正常染色体，令一个含有双份突变染色体。如果我们在正常染色体上添加标示（GFP），那么，可以在果蝇组织中观察突变细胞的表型变化 如果两条染色体中的一条是正常的，而另一条基因被突变掉，那么对于绝大部分没有重组的细胞来说，它们是“杂合体”。FLP/FRT 系统系统MARCM 技术技术(mosaic analysis with a repressible cell marker)同源同源染色染色体重体重组组非同非同源染源染色体色体组合组合GAL80UAS/GFP/mutation突变细胞突变细胞TUNEL法法 DNA片

4、段化与检测片段化与检测细胞凋亡中染色体细胞凋亡中染色体DNADNA的断裂是个的断裂是个渐进的过程，染色体渐进的过程，染色体DNADNA首先在核首先在核酸内切酶作用下，随机切断；酸内切酶作用下，随机切断；在核小体单位之间被随机切断。形在核小体单位之间被随机切断。形成成180-200bp180-200bp核小体式片段；核小体式片段；DNADNA双链断裂出现缺口即可产生一双链断裂出现缺口即可产生一系列系列DNADNA的的3-OH3-OH末端，被染色。末端，被染色。增加细胞膜通透性增加细胞膜通透性 TdT 酶和荧光素标记酶和荧光素标记 的的dUTP进入细胞进入细胞在在TdT酶的辅助下酶的辅助下dUTP与凋亡细胞中断裂与凋亡细胞中断裂DNA的的3-OH末端结合末端结合 HRP标记的抗荧光标记的抗荧光 素抗体特异结合素抗体特异结合HRP底物，底物，H2O2发生氧化、环化反发生氧化、环化反应，形成棕褐色应，形成棕褐色 显微镜下观察显微镜下观察TUNEL法法 DNA片段化与检测片段化与检测TUNEL法法 DNA片段化与检测片段化与检测