无名高热的理论及其解决思路课件

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1、无名高热无名高热的理论及其解决思路的理论及其解决思路近年来猪越来越难养、病越来越多！近年来猪越来越难养、病越来越多！根本原因何在？根本原因何在？猪群的健康状态下降猪群的健康状态下降两大免疫抑制性疾病两大免疫抑制性疾病猪繁殖与呼吸综合征猪繁殖与呼吸综合征(蓝耳病蓝耳病PRRS)猪圆环病毒猪圆环病毒2型感染型感染(PCV-2)猪蓝耳病猪蓝耳病(PRRS)(PRRS)1.PRRS的危害的危害2.目前的流行特点目前的流行特点3.关于病毒的血清型关于病毒的血清型4.如何诊断？如何诊断？5.疫苗使用存在的问题？疫苗使用存在的问题？6.PRRSV 致病机制致病机制7.利用猪只免疫及攻毒试验测试利用猪只免疫及

2、攻毒试验测试 PRRS免疫营养剂的功效性免疫营养剂的功效性蓝耳病(PRRSV disease)呼吸与繁殖综合症呼吸与繁殖综合症Porcine respiratory disease complex(PRDC)o母猪流产及死亡症状母猪流产及死亡症状Sow Abortion and Mortality Syndrome(SAMs)o仔猪多系统综合衰竭消耗症仔猪多系统综合衰竭消耗症Postweaning Multisystemic Wasting Syndrome(PMWS)蓝耳病毒的感染蓝耳病毒的感染哺乳期哺乳期怀孕期怀孕期保育期保育期育肥期育肥期胎儿胎儿胎盘胎盘PRRSV母猪母猪症状：发烧、嗜睡

3、、厌食、无乳、发情不顺症状：发烧、嗜睡、厌食、无乳、发情不顺链球菌、链球菌、TGE圆环病毒圆环病毒圆环病毒、圆环病毒、猪瘟猪瘟沙氏杆菌、巴氏杆菌沙氏杆菌、巴氏杆菌副嗜血杆菌副嗜血杆菌圆环病毒、圆环病毒、附红细胞体附红细胞体放线杆菌放线杆菌AP仔猪仔猪泌乳泌乳PRRSV保育猪保育猪PRRSV肥猪肥猪PRRSV死胎、木乃伊胎死胎、木乃伊胎晚期流产晚期流产呼吸症状、肺炎呼吸症状、肺炎下痢、脐带出血下痢、脐带出血免疫下降、死亡免疫下降、死亡化脓性脑炎化脓性脑炎肺炎、肺炎、PDWN虚弱、死亡虚弱、死亡呼吸道症状呼吸道症状整体免疫下降整体免疫下降肺炎肺炎除此而外，公猪也会感染除此而外，公猪也会感染PRRS

4、VPRRSV已感染已感染PRRSPRRS的精虫的精虫未感染未感染PRRSPRRS的精虫的精虫黑点黑点PRRSVPRRSV与猪瘟免疫与猪瘟免疫感染感染PRRSV后对猪瘟抗体有很大的免疫抑制性后对猪瘟抗体有很大的免疫抑制性感染感染PRRSV后即使做了猪瘟疫苗免疫后即使做了猪瘟疫苗免疫仍然会爆发猪瘟仍然会爆发猪瘟由于由于PRRSV的存在，使猪瘟疫苗免疫失效的存在，使猪瘟疫苗免疫失效PRRSPRRS对于猪瘟疫苗功效性的影响对于猪瘟疫苗功效性的影响PRRSV HC vaccine CSF virus dpc ill/dead -V 2/911 -V V no symptom V -V 2/911 V V

5、 V 23/6 -no symptom第一组第一组给予猪瘟病毒之攻毒而不免疫疫苗第二组第二组注射猪瘟疫苗并于三周后进行猪瘟病毒攻毒第三组第三组进行PRRS病毒(01NP1,美洲病毒株)攻毒后隔四周再给予猪瘟病毒之攻毒第四组第四组进行PRRS病毒攻毒后一周免疫注射猪瘟疫苗，再隔三周进行猪瘟病毒之攻毒第五组第五组为本试验之空白组，不免疫疫苗亦不攻毒任何病毒。泰国病理学家泰国病理学家 Kesdangsakonwuti 等人等人(2005)也就是说也就是说,即使您打了猪瘟疫即使您打了猪瘟疫苗苗,因为因为PRRSV的侵袭的侵袭,使猪使猪瘟疫苗失去了保护力瘟疫苗失去了保护力,用猪瘟用猪瘟病毒攻毒时病毒攻毒

6、时,照样引起感染猪照样引起感染猪瘟而死亡瘟而死亡!结论：结论：oPRRSV潜在的危害很大潜在的危害很大o猪群的生产性能下降猪群的生产性能下降o猪群免疫力下降猪群免疫力下降o呼吸道疾病发病率上升呼吸道疾病发病率上升o继发感染增多继发感染增多o母猪发情障碍、滞后产现象增多母猪发情障碍、滞后产现象增多PRRSPRRS病毒的血清型病毒的血清型o国际上分美洲型和欧洲型国际上分美洲型和欧洲型o我国分离的毒株都属美洲型我国分离的毒株都属美洲型o我国猪群中还未发现欧洲型毒株我国猪群中还未发现欧洲型毒株如何诊断如何诊断?o明确猪场各阶段猪群的蓝耳病病毒感染明确猪场各阶段猪群的蓝耳病病毒感染率（用率（用ELISA

7、试剂盒进行抗体监测）试剂盒进行抗体监测）o监测感染动态情况（每季度监测感染动态情况（每季度1次），是次），是否升高或降低否升高或降低o出现繁殖障碍问题，应同时检测（胎儿出现繁殖障碍问题，应同时检测（胎儿体内、母猪血清中）病毒和抗体，单纯体内、母猪血清中）病毒和抗体，单纯的抗体阳性并不能说明就是由蓝耳病造的抗体阳性并不能说明就是由蓝耳病造成的繁殖障碍成的繁殖障碍当一个猪场符合以下当一个猪场符合以下3点时应诊断患点时应诊断患PRRS1.猪群表现典型的猪群表现典型的PRRS症状及有症状及有PRRS患病史患病史2.猪群出现猪群出现PRRS病变病变3.患病猪中找到患病猪中找到PRRS病毒病毒如果仔猪出现

8、典型的临床症状、病变、血如果仔猪出现典型的临床症状、病变、血液中有液中有PRRS抗体时，又知该猪群没有注抗体时，又知该猪群没有注射射PRRS疫苗的则可诊断患有疫苗的则可诊断患有PRRS。疫苗使用存在的问题：疫苗使用存在的问题：1.使用活疫苗造成蓝耳病暴发已是不争的事使用活疫苗造成蓝耳病暴发已是不争的事 实（国内外均有实例）实（国内外均有实例）2.活疫苗的返强、变异、重组可产生新病毒活疫苗的返强、变异、重组可产生新病毒3.免疫接种猪造成疫苗毒的持续性感染和长免疫接种猪造成疫苗毒的持续性感染和长 期带毒；引起免疫猪场和猪群处于长期感期带毒；引起免疫猪场和猪群处于长期感 染状态染状态PRRSV PR

9、RSV 致病机制致病机制猪的肺泡巨噬细胞上的猪的肺泡巨噬细胞上的Heparinlike接受器与接受器与PRRS病毒母体蛋白的接合情况病毒母体蛋白的接合情况(Involvement of the Matrix Protein in Attachment of Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus to a Heparinlike Receptor on Porcine Alveolar Macrophages)pSn=receptor for PRRSV ORF5 ORF6C-S-S-CPRRSVSialo-adhesin pro

10、tein(涎黏着蛋白)Heparinlike ReceptorNucleus核ORF5 ORF6MhcIIMhcIMhcIMhcIICD8+cellCD4+cellNT domain结合部位结合部位Host cells,Antigen present cells利用猪只利用猪只免疫免疫及攻毒试验测试及攻毒试验测试 PRRS免疫营养剂的功效性免疫营养剂的功效性(1)(1)猪只免疫及攻毒试验猪只免疫及攻毒试验代号免疫营养剂组别头数H 高剂量6L 低剂量6BK 空白组6组别1st immunized 2nd 3rd challenge 高剂量低剂量空白组2128 days3-wk age 5-wk

11、7-wk 9-wkHalf-doseHalf-doseFull-dose3-wk age 5-wk 7-wk 9-wkImmunization and challenge in pigs modelGroup coating antigen IgM-ELISA titres(S/BK)IFA titres NT titres H dose group 310 1030 1632 1632 L dose group 3 10 16 832 BK groupNegative CTL 1 1 8 8 (2)(2)各试验组免疫三次后各试验组免疫三次后2 2周周(9 9周龄周龄)之血清免疫力价分析之血清

12、免疫力价分析(3)(3)攻毒后攻毒后(14-DPC)(14-DPC)临床症状及健康情形临床症状及健康情形：攻毒后之攻毒后之DPI-14之临床症状之临床症状(P8)P10-experiment group总头数总头数发烧发烧咳嗽咳嗽死亡死亡毛粗毛粗(H)High dose 61102(L)Low dose 621202(BK)Placebo(15%ISA 206)64534035疫苗组，于攻毒后一至二天内都有一至二头发生40.5以上发烧反应，但是二周后大都回复原来之40.3以下，攻毒后(H)及(L)显然大多较活泼健康、不再咳嗽、皮毛渐渐恢复亮丽，而(BK)对照组之猪只咳嗽现象比较频繁。以下表为攻

13、毒后114-DPC观察之将康状态及患病情形观察项目点数观察项目点数1.粪便粪便3.关节关节坚固1正常1半固状2肿胀2下痢3无法支撑重量3死亡4死亡42.行为行为4.步行步行活泼机警1正常1昏睡2跛行2挤在一堆3不能站立3死亡4死亡4观察项目点数观察项目点数5.食欲食欲8.毛发毛发正常1平滑1食量减少2粗糙2无食欲3竖立3死亡4死亡46.身体状况身体状况9.皮肤皮肤腹部圆满1正常1消瘦2疹斑2脊骨突出肋骨明显3发疳3死亡4死亡47.神经肌肉神经肌肉10.呼吸呼吸正常1正常1歪头斜头2快速2震颤3呼吸困难，咳嗽3死亡4死亡4健康状况与临床症状观察指标表健康状况与临床症状观察指标表每只动物每日需作每

14、只动物每日需作1010项观察指标，项观察指标，每个观察项目正常为每个观察项目正常为1 1点，每日总点，每日总计正常为计正常为1010点，最严重的临床症状点，最严重的临床症状为为3030点，死亡点，死亡4040点。点。攻毒后之攻毒后之14-DPC14-DPC依观察项目计分之临床症状依观察项目计分之临床症状P10 观察项目12345678910T*H dose1.01.01.01.01.01.21.01.31.21.210.9L dose1.01.21.21.21.21.21.01.51.51.212.2BK1.5 1.8 1.7 1.7 2.0 2.2 1.5 2.5 1.5 2.3 18.7

15、18.7 P10 观察项目12345678910T*H dose1.01.01.01.01.01.21.01.31.21.210.9L dose1.01.01.01.21.21.21.01.31.51.211.6BK1.5 1.8 1.7 1.7 2.0 2.2 1.5 2.3 1.5 2.3 18.5 18.5*：观察：观察1010项之临床症状，每一组项之临床症状，每一组6 6头猪分别给分后取其平均值后分别填入表格，头猪分别给分后取其平均值后分别填入表格，T T为为1010项临床症状之总分。项临床症状之总分。攻毒后之攻毒后之21-DPC21-DPC依观察项目计分之临床症状依观察项目计分之临床

16、症状(4)(4)试验猪只在免疫及攻毒后重量变化情形试验猪只在免疫及攻毒后重量变化情形攻毒攻毒*:The blood samples of tested pigs can be detected PRRSV infected by RT-PCR running(5)(5)猪只攻毒试验后病毒血症检出情况猪只攻毒试验后病毒血症检出情况组别 疫苗名称 头数 2-DPC 7-DPC*14-DPC 21-DPCH 6 0 2 1 0L 6 0 2 2 0BK Placebo 6 1 3 6 3(6)(6)各试验组攻毒后各试验组攻毒后21DPC21DPC解剖后肺脏之病变严重性分析解剖后肺脏之病变严重性分析猪

17、只攻毒后，第猪只攻毒后，第2121天起进行试验猪只之屠体解剖，观察肺部天起进行试验猪只之屠体解剖，观察肺部之肉眼病变结果可知，空白组之之肉眼病变结果可知，空白组之6 6头猪都有明显的间质性肺头猪都有明显的间质性肺炎，坏死病变症状之病变指数炎，坏死病变症状之病变指数Lesion scoreLesion score约在约在1515-40-40，高，高剂量组有一肺脏病变严重，可能有二次感染发生，其指数约剂量组有一肺脏病变严重，可能有二次感染发生，其指数约在在2525左右，其他左右，其他5 5头的指数都在头的指数都在1515以下。以下。Lesion scoreHigh dose 251510885Lo

18、w dose 2018151055BK403530262515 各组的各组的6头猪只其肺脏病变指数头猪只其肺脏病变指数(7)(7)各试验组攻毒后各试验组攻毒后21DPC21DPC解剖后分析肺脏组织切片病解剖后分析肺脏组织切片病理分析间质性肺炎之严重性理分析间质性肺炎之严重性 耳號 scoreHigh dose vaccine10011 110021 110031 110041 110050 010061 1Low dose vaccine10111 110121 110131 110141 110152 210161 1BK10216 610225 510236 610246 610255 5

19、10266 6C10310 010321 110330 0空白组的感染指数最高结论：结论：由猪只免疫及攻毒试验模式可知：由猪只免疫及攻毒试验模式可知：高剂量及低剂量的高剂量及低剂量的PRRSPRRS免疫营养剂经免疫营养剂经前二次半剂量及第三次全量免疫仔猪前二次半剂量及第三次全量免疫仔猪后，该免疫的猪只对于后，该免疫的猪只对于PRRSVPRRSV（5 T-5 T-type1;TCIDtype1;TCID5050=10=104 4)攻毒攻毒皆具有相皆具有相当强的保护力！当强的保护力！PRRSV PRRSV 感染途径与免疫营养增强剂的开发策略感染途径与免疫营养增强剂的开发策略多重感染路径：多重感染路

20、径：Step1.Step1.上呼吸道及下呼吸道上皮细胞感染路径上呼吸道及下呼吸道上皮细胞感染路径Step2.Step2.呼吸道周边组织的呼吸道周边组织的monocytemonocyte（单核球）单核球）,macrophage macrophage（巨噬细胞）感染路径巨噬细胞）感染路径Step3.Antibody dependent enhancement(ADE)Step3.Antibody dependent enhancement(ADE)of phagocytosis of phagocytosiso可以诱发产生较高的中和力价。可以诱发产生较高的中和力价。o减低减低PRRS vaccin

21、e PRRS vaccine 抗原过敏性问题。抗原过敏性问题。o可以有效诱发可以有效诱发T T细胞免疫机制。细胞免疫机制。（1 1）诱发诱发中和力价之液体或粘膜免疫反应机制中和力价之液体或粘膜免疫反应机制 （2 2）诱发诱发细胞免疫机制清除被感染的细胞细胞免疫机制清除被感染的细胞 PRRSV PRRSV 感染途径与免疫营养增强剂的开发策略感染途径与免疫营养增强剂的开发策略千呼万唤始出来千呼万唤始出来Procedure of V.S.P:Procedure of V.S.P:PRRS VirusEffective DNAORF5 ORF6C-S-S-CCopy in carrierMix wit

22、h PCV2ProductCuttingExtracting免疫营养增强剂免疫营养增强剂的特点的特点:1.1.明确、稳定、纯粹的抗原。明确、稳定、纯粹的抗原。2.2.免疫反应高度的特意性，只有针对有效抗原产生免疫反应高度的特意性，只有针对有效抗原产生 抗体，对无关抗原没有反应。抗体，对无关抗原没有反应。3.3.免疫应答可以精确检测出来。免疫应答可以精确检测出来。4.4.采用的电脑合成技术很简便。采用的电脑合成技术很简便。5.5.有高度的精确性（高抗体并非一定是有效的抗有高度的精确性（高抗体并非一定是有效的抗 体，蛋白抗体才是有效的高抗体）。体，蛋白抗体才是有效的高抗体）。6.6.采用生化技术采

23、用生化技术(非疫苗技术非疫苗技术)，不会产生没必要的抗，不会产生没必要的抗 原及抗体。原及抗体。7.7.高度的重复性，每批产品成份一样，稳定性高。高度的重复性，每批产品成份一样，稳定性高。强疫肽强疫肽的使用方法（肌肉注射）：的使用方法（肌肉注射）：后备母猪：进场（留种）-2 ml（一剂）经产母猪：生产前6周 -2 ml（一剂）生产前4周 -2 ml（一剂）出生仔猪：1-2周龄 -2 ml（一剂）（对母源抗体没有干扰）种 公 猪：每年2-3次 -2 ml/次（一剂）台湾某规模猪场台湾某规模猪场20052005年断奶仔猪存活率年断奶仔猪存活率经过使用经过使用免疫营养增强剂免疫营养增强剂产品后存活率产品后存活率猪场全面净化方案猪场全面净化方案良好良好饲养管理饲养管理预防及预防及正常免疫正常免疫定期定期抗体检测抗体检测充足的充足的营养营养全面净化全面净化谢谢大家谢谢大家