土壤微生物分离纯化ppt课件

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1、学习 教程 教材 多媒体课件【友谊分享】GOOD GOOD STUDAY,DAY DAY UP 1 Exercise seven土壤微生物的分别纯化土壤微生物的分别纯化制黄海婵制黄海婵hhczjut.edu:0571-88320921 or 0571-88320197 学习 教程 教材 多媒体课件【友谊分享】GOOD GOOD STUDAY,DAY DAY UP 2 微生物的分别、培育和菌种保微生物的分别、培育和菌种保藏藏v目的要求目的要求v实验资料实验资料v实验程序实验程序v思索题思索题学习 教程 教材 多媒体课件【友谊分享】GOOD GOOD STUDAY,DAY DAY UP 3目的要求

2、目的要求v掌握倒平板的方法和几种常用的分别纯化掌握倒平板的方法和几种常用的分别纯化微生物的根本操作计数。微生物的根本操作计数。v练习微生物接种、移植和培育的根本技术，练习微生物接种、移植和培育的根本技术，掌握无菌操作技术。掌握无菌操作技术。学习 教程 教材 多媒体课件【友谊分享】GOOD GOOD STUDAY,DAY DAY UP 4实验资料实验资料v样品：新颖土壤。样品：新颖土壤。v培育基：牛肉膏蛋白胨琼脂培育基培育基：牛肉膏蛋白胨琼脂培育基v 淀粉琼脂培育基淀粉琼脂培育基v 马铃薯蔗糖培育基马铃薯蔗糖培育基v无菌水：带有玻璃珠装有无菌水：带有玻璃珠装有99mL无菌水三角瓶无菌水三角瓶v

3、装有装有9mL无菌水的试管。无菌水的试管。v其它：无菌培育皿、无菌吸管、无菌三角玻棒、台天平、其它：无菌培育皿、无菌吸管、无菌三角玻棒、台天平、记号笔、记号笔、v 接种环、酒精灯、火柴、标签纸。接种环、酒精灯、火柴、标签纸。v试剂：试剂：5000U/mL链霉素液链霉素液 v 0.5重铬酸钾液重铬酸钾液学习 教程 教材 多媒体课件【友谊分享】GOOD GOOD STUDAY,DAY DAY UP 5实实 验验 总总 流流 程程图图71 从土壤分别微生物操作过程从土壤分别微生物操作过程学习 教程 教材 多媒体课件【友谊分享】GOOD GOOD STUDAY,DAY DAY UP 6实验程序实验程序

4、 倒平板倒平板的方法的方法 将培育基加热融化，待冷却至将培育基加热融化，待冷却至5560 0C时，倒平板。时，倒平板。点击录像点击录像学习 教程 教材 多媒体课件【友谊分享】GOOD GOOD STUDAY,DAY DAY UP 7实验程序实验程序制备土壤稀释液制备土壤稀释液v制备土壤稀释液：制备土壤稀释液：(无菌操作过程见教师示范无菌操作过程见教师示范 1.称取土壤称取土壤1g，放入，放入99mL无菌水的三角瓶中，振荡无菌水的三角瓶中，振荡10min，即为稀释，即为稀释102的土壤悬液。的土壤悬液。v 2.另取装有无菌试管另取装有无菌试管5支，用记号笔编上支，用记号笔编上103、104、10

5、5、106、107。在每只试管中用无菌吸管参与。在每只试管中用无菌吸管参与4.5ml无菌水。无菌水。v 3.取已稀释成取已稀释成102的土壤液，振荡后静止的土壤液，振荡后静止0.5min，用无菌吸管汲取，用无菌吸管汲取0.5mL土壤悬液参与土壤悬液参与103的无菌水的试管中，并在试管内悄然吹吸数的无菌水的试管中，并在试管内悄然吹吸数次，使之充分混匀，即成次，使之充分混匀，即成103土壤稀释液。同法依次延续稀释至土壤稀释液。同法依次延续稀释至104 10 5 106土壤稀释液。土壤稀释液。在土壤稀释过程中，运用一支在土壤稀释过程中，运用一支吸管由浓到稀，稀释究竟，稀吸管由浓到稀，稀释究竟，稀释方

6、法见图释方法见图73。四人成一组，每人选取一个稀四人成一组，每人选取一个稀释度的土壤稀释液做以下的三释度的土壤稀释液做以下的三个步骤。个步骤。学习 教程 教材 多媒体课件【友谊分享】GOOD GOOD STUDAY,DAY DAY UP 8实验程序实验程序 稀释平板法稀释平板法混合法混合法v涂平板：每人取培育皿涂平板：每人取培育皿1 1付，即每个同窗做一只。付，即每个同窗做一只。v1.1.先在无菌培育皿底部贴上标签，注明分别菌名、稀释度、组别、先在无菌培育皿底部贴上标签，注明分别菌名、稀释度、组别、班级。班级。v2.2.另取一吸管，以无菌操作法汲取相应的土壤稀释液另取一吸管，以无菌操作法汲取相

7、应的土壤稀释液0.1mL0.1mL，加在无菌培，加在无菌培育皿里。育皿里。v3.3.取已熔化的在水浴锅中保温取已熔化的在水浴锅中保温500C500C左右的马铃薯培育基左右的马铃薯培育基PDAPDA培育基，培育基，分别倒约分别倒约151520ml20ml入上述培育皿中，悄然转动培育皿，使菌液、培育基入上述培育皿中，悄然转动培育皿，使菌液、培育基充分混匀铺平，放在平坦的桌面上，凝固后，倒置于充分混匀铺平，放在平坦的桌面上，凝固后，倒置于2828300C300C恒温培育恒温培育5 56d6d。察看真菌菌落形状以及计数。察看真菌菌落形状以及计数 菌落。并计算出每菌落。并计算出每g g土壤中真菌的数土壤

8、中真菌的数量。即用某一培育皿内真菌的菌落数乘以该培育皿接种液的稀释倍数即量。即用某一培育皿内真菌的菌落数乘以该培育皿接种液的稀释倍数即得。得。见图见图7 74 4每毫升样品中微生物细胞数每毫升样品中微生物细胞数=每皿菌落平均数每皿菌落平均数 1/取样体积数取样体积数稀释倍数稀释倍数学习 教程 教材 多媒体课件【友谊分享】GOOD GOOD STUDAY,DAY DAY UP 9混匀混匀凝固凝固2830培育培育图图74 混合法流程图混合法流程图学习 教程 教材 多媒体课件【友谊分享】GOOD GOOD STUDAY,DAY DAY UP 10实验程序实验程序 平板涂抹法涂布平板涂抹法涂布法法v每

9、人取无菌培育皿每人取无菌培育皿1付每个同窗做一只。在皿底贴上标签，注明付每个同窗做一只。在皿底贴上标签，注明分别菌名、稀释度、组别、班级。分别菌名、稀释度、组别、班级。v取已熔化的高氏培育基，分别倒取已熔化的高氏培育基，分别倒1520ml入培育皿中，铺平，制成平入培育皿中，铺平，制成平板。板。v凝固后，另取一支吸管汲取相应的土壤稀释液凝固后，另取一支吸管汲取相应的土壤稀释液0.2mL放在平板上。放在平板上。v用无菌三角玻棒将稀释液在平板外表涂抹均匀。倒置于用无菌三角玻棒将稀释液在平板外表涂抹均匀。倒置于28300C条条件下培育件下培育34d，察看放线菌菌落形状及计数菌落，并计算出每，察看放线菌

10、菌落形状及计数菌落，并计算出每g土壤土壤中放线菌的数量方法同上。假设样品稀释适当的话，微生物能一中放线菌的数量方法同上。假设样品稀释适当的话，微生物能一一分散，经培育后，可在平板外表得到单菌落。一分散，经培育后，可在平板外表得到单菌落。v挑取单个菌落，接种于相应的斜面培育基上，假设不纯，再移植纯化，挑取单个菌落，接种于相应的斜面培育基上，假设不纯，再移植纯化，至最后得到纯培育为止。至最后得到纯培育为止。每毫升样品中微生物细胞数每毫升样品中微生物细胞数=每皿菌落平均数每皿菌落平均数 1/取样体积数取样体积数稀释倍数稀释倍数学习 教程 教材 多媒体课件【友谊分享】GOOD GOOD STUDAY,

11、DAY DAY UP 11凝凝固固后后2830培育培育图图75 涂布法流程图涂布法流程图学习 教程 教材 多媒体课件【友谊分享】GOOD GOOD STUDAY,DAY DAY UP 12实验程序实验程序 平板划线法平板划线法v每人取无菌培育皿每人取无菌培育皿1付，在皿底贴上标签，注明事项。付，在皿底贴上标签，注明事项。v取已熔化的牛肉膏蛋白胨培育基，倒入平皿，制成平板。取已熔化的牛肉膏蛋白胨培育基，倒入平皿，制成平板。v凝固后，用接种环取相应的凝固后，用接种环取相应的 菌液一环菌液一环102或或103在平板上划线在平板上划线教师作示范。教师作示范。1.延续划线法：将挑取有样品的接种延续划线法

12、：将挑取有样品的接种环在平板培育基外表作延续划线。环在平板培育基外表作延续划线。终了后，倒置于终了后，倒置于2830温室培育。温室培育。图图76 延续划线法图延续划线法图学习 教程 教材 多媒体课件【友谊分享】GOOD GOOD STUDAY,DAY DAY UP 132.分区划线法：用接种环以无分区划线法：用接种环以无菌操作挑取土壤稀释液菌操作挑取土壤稀释液1环，环，先在培育基的一边作第一次平先在培育基的一边作第一次平行划线行划线34条，再转动培育皿条，再转动培育皿约约600角，并将接种环上剩余角，并将接种环上剩余物烧掉，待冷却后经过第一次物烧掉，待冷却后经过第一次划线部分作第二次划线会，同

13、划线部分作第二次划线会，同法依次作第三次和第四次划线。法依次作第三次和第四次划线。划线终了，盖上皿盖，倒置于划线终了，盖上皿盖，倒置于2830温室培育。温室培育。挑取单个菌落接种于斜面培育基挑取单个菌落接种于斜面培育基上，假设不纯，再移植纯化，最上，假设不纯，再移植纯化，最后得到纯培育。后得到纯培育。学习 教程 教材 多媒体课件【友谊分享】GOOD GOOD STUDAY,DAY DAY UP 14实验程序实验程序四大类微生物菌落形四大类微生物菌落形状的比较和识别状的比较和识别v区分和识别各大类微生物通常包括菌落形状群体形状区分和识别各大类微生物通常包括菌落形状群体形状和细胞形状个体形状两方面

14、的察看。和细胞形状个体形状两方面的察看。v菌落形状：菌落形状：菌落外表潮湿：细菌菌落外表潮湿：细菌薄而小，酵母菌薄而小，酵母菌厚而大。厚而大。v 菌落外表枯燥：放线菌菌落外表枯燥：放线菌密而小，霉菌密而小，霉菌松而大。松而大。v细胞形状：细胞形状：细菌细菌小而分散小而分散 酵母菌酵母菌大而分散大而分散 放线菌放线菌丝状细丝状细 霉菌霉菌丝状粗丝状粗学习 教程 教材 多媒体课件【友谊分享】GOOD GOOD STUDAY,DAY DAY UP 15表表 7-1 细菌、放线菌、霉菌和酵母菌的菌落形状比较细菌、放线菌、霉菌和酵母菌的菌落形状比较学习 教程 教材 多媒体课件【友谊分享】GOOD GOO

15、D STUDAY,DAY DAY UP 16结结 果果 记记 录录v1.他所做的涂布平板法和划线法能否较好地他所做的涂布平板法和划线法能否较好地得到了单菌落？假设不是，请分析缘由。得到了单菌落？假设不是，请分析缘由。v2.在三种不同平板上他分别得到哪些类群的在三种不同平板上他分别得到哪些类群的微生物？简述它们的菌落特征。微生物？简述它们的菌落特征。学习 教程 教材 多媒体课件【友谊分享】GOOD GOOD STUDAY,DAY DAY UP 17思思 考考 题题v什么叫无菌操作？分别放线菌和真菌为什么什么叫无菌操作？分别放线菌和真菌为什么需求分别加重铬酸钾和链霉素？需求分别加重铬酸钾和链霉素？v平板培育时为什么要把培育皿倒置？平板培育时为什么要把培育皿倒置？v如何确定平板上某单个菌落能否为纯培育？如何确定平板上某单个菌落能否为纯培育？学习 教程 教材 多媒体课件【友谊分享】GOOD GOOD STUDAY,DAY DAY UP 18实实 验验 七七结结 束束学习 教程 教材 多媒体课件【友谊分享】GOOD GOOD STUDAY,DAY DAY UP 19下周实验下周实验理化要素对微生物的影响理化要素对微生物的影响实验三十二、实验三十四、实验三实验三十二、实验三十四、实验三十八十八