西南大学药学综合资料 药物分析 第十五章 甾体激素类药物的分析

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1、第十五章第十五章（Analysis of Steroid Hormones)甾体激素类药物的分析甾体激素类药物的分析更多药综资料找西大更多药综资料找西大16年考本学院学姐年考本学院学姐QQ：1003050289第一节第一节 基本结构与基本结构与分类分类内内 容容第二节第二节 鉴鉴别试验别试验第三节第三节 特殊杂特殊杂质检查质检查第四节第四节 含含量测定量测定基本结构：环戊烷并多氢菲基本结构：环戊烷并多氢菲第一节第一节 结构与分类结构与分类C20C21ABCD12345678910111213141516171819一一、基本结构、基本结构二、分类及结构二、分类及结构结构、性质与分类结构、性质与

2、分类甾体激素甾体激素肾上腺皮质激素肾上腺皮质激素雄性激素及蛋白同化激素雄性激素及蛋白同化激素孕激素孕激素雌激素雌激素性激素性激素OHOOHOCH2OHHHH肾上腺皮质激素肾上腺皮质激素氢化可的松氢化可的松C17-醇酮基醇酮基4-3-酮基酮基结构、性质与分类结构、性质与分类OHOOHOHFHOCH3OHCH3醋酸地塞米松醋酸地塞米松肾上腺皮质激素肾上腺皮质激素结构、性质与分类结构、性质与分类4-3-酮基酮基醋酸曲安奈德醋酸曲安奈德肾上腺皮质激素肾上腺皮质激素结构、性质与分类结构、性质与分类4-3-酮基酮基OHOOOHFHOCH3OHCH3OCH3地塞米松磷地塞米松磷酸钠酸钠肌注时可延长作用时间肌

3、注时可延长作用时间肾上腺皮质激素肾上腺皮质激素结构、性质与分类结构、性质与分类4-3-酮基酮基OHOOHOHFHOPHCH3OONaONa肾上腺皮质激素类结构特点肾上腺皮质激素类结构特点A环环4-3-酮基：酮基：UV、与羰基试剂反应、与羰基试剂反应C17 -醇醇酮基酮基:还原性还原性（或醇酮基的醇羟基与酸成酯）（或醇酮基的醇羟基与酸成酯）结构、性质与分类结构、性质与分类雄雄 性性 激激 素素OHOCH33CH3CHHHH甲睾酮甲睾酮C17 羟基羟基结构、性质与分类结构、性质与分类4-3-酮基酮基OOHHHHOCH3雄雄 性性 激激 素素丙酸睾酮丙酸睾酮4-3-酮基酮基结构、性质与分类结构、性质

4、与分类OOHHHHO蛋白同化激素蛋白同化激素苯丙酸诺龙苯丙酸诺龙结构、性质与分类结构、性质与分类4-3-酮基酮基雄性激素及蛋白同化激素类特点雄性激素及蛋白同化激素类特点A环环4-3-酮基酮基 UV、与羰基试剂反应、与羰基试剂反应C17:醇羟基醇羟基 可成酯可成酯结构、性质与分类结构、性质与分类COHHHCH3O孕孕 激激 素素黄黄体酮体酮（天然孕激素）（天然孕激素）4-3-酮基酮基C17 甲酮基甲酮基结构、性质与分类结构、性质与分类醋酸甲地孕酮醋酸甲地孕酮(megestrol acetate)CH3OCH3OCH3OHHHO孕孕 激激 素素炔诺酮炔诺酮4-3-酮基酮基结构、性质与分类结构、性质

5、与分类C17 乙炔基乙炔基COHHHOHHCHA环环4-3-酮基酮基 UV、与羰基试剂反应、与羰基试剂反应C17:甲酮基甲酮基（黄体酮、醋酸甲地孕酮、醋酸甲羟孕酮）（黄体酮、醋酸甲地孕酮、醋酸甲羟孕酮）与亚硝基铁氰化纳反应与亚硝基铁氰化纳反应C17:乙炔基（炔诺酮、左炔诺孕酮）乙炔基（炔诺酮、左炔诺孕酮）孕激素结构特点孕激素结构特点雌雌 激激 素素雌二醇雌二醇A环环3OH 苯环苯环C17 羟基羟基OHHHO3CHHHH结构、性质与分类结构、性质与分类CHOHHHOHCH雌雌 激激 素素炔雌醇炔雌醇A环环3OH 苯环苯环C17 乙炔基乙炔基C17 羟基羟基结构、性质与分类结构、性质与分类A环环3

6、OH 苯环苯环 UV、与重氮苯磺酸盐反应、与重氮苯磺酸盐反应C17:C17 乙炔基乙炔基 与与AgNO3反应反应 C17 羟基羟基 可成酯可成酯雌激素类结构特点：雌激素类结构特点：结构、性质与分类结构、性质与分类第二节第二节 鉴别试验鉴别试验一、一、化学鉴别法化学鉴别法二、紫外二、紫外-可见分光光度法可见分光光度法三、红外分光光度法三、红外分光光度法四、色谱法四、色谱法甾体激素类药物甾体激素类药物呈色呈色H2SO4或或H3PO4、HClO4或或HCl（一）与强酸的呈色反应（母核）（一）与强酸的呈色反应（母核）一、化学鉴别法与硫酸显色反应与硫酸显色反应 显色显色 荧光荧光 加水稀释加水稀释泼尼松

7、龙泼尼松龙 深红深红 絮状絮状灰灰泼尼松泼尼松 橙橙 黄黄蓝绿蓝绿炔雌醚炔雌醚 橙红橙红 黄绿黄绿 红色红色 炔雌醇炔雌醇 橙红橙红 黄绿黄绿 絮状絮状玫红玫红醋酸可的松醋酸可的松 黄或微带橙黄或微带橙 褪色并澄清褪色并澄清鉴别试验鉴别试验（二）（二）官能团的反应官能团的反应1 C17 醇酮基醇酮基 （肾上腺皮质激素类）还原性（肾上腺皮质激素类）还原性（1）呈色反应）呈色反应醋酸泼尼松醋酸泼尼松红色红色氯化三苯四氮唑试液氯化三苯四氮唑试液NaOH（2）沉淀反应沉淀反应肾上腺皮质肾上腺皮质激素药物激素药物氨制硝酸银氨制硝酸银Ag黑色黑色碱性酒石酸铜碱性酒石酸铜Cu2O橙红色橙红色醋酸可醋酸可的松

8、的松黄色黄色2.C3酮基和酮基和C20酮基酮基常用的羰基试剂：常用的羰基试剂：2,4-2,4-二硝基苯肼、异烟肼、硫酸苯肼二硝基苯肼、异烟肼、硫酸苯肼硫酸苯肼试液硫酸苯肼试液70，黄体酮黄体酮异烟肼异烟肼甲醇、稀盐酸甲醇、稀盐酸黄色黄色鉴别试验鉴别试验C ON H NCC H3N H N OCNN异烟双腙（黄色）异烟双腙（黄色）OCCH3O2NCONHNH2HCl黄体酮黄体酮3.C17 甲甲酮基酮基黄体酮黄体酮其他甾体激素类其他甾体激素类亚硝基铁氰化纳亚硝基铁氰化纳蓝紫色蓝紫色淡橙色淡橙色不显色不显色 具有甲酮基或活泼亚甲基的甾体激素类药物，可与亚具有甲酮基或活泼亚甲基的甾体激素类药物，可与亚

9、硝基铁氰化纳、间二硝基酚、芳香醛呈色。硝基铁氰化纳、间二硝基酚、芳香醛呈色。鉴别试验鉴别试验碳酸钠，醋碳酸钠，醋酸钠酸钠COCH3O黄体酮黄体酮 NOCNFe OHH2O2+-4Fe5CNNOCHCOO鉴别试验鉴别试验4.酚羟基（雌激素类）酚羟基（雌激素类）雌激素类药物雌激素类药物重氮苯磺酸重氮苯磺酸红色偶氮染料红色偶氮染料鉴别试验鉴别试验5.乙炔基乙炔基（炔雌醇、炔诺酮）（炔雌醇、炔诺酮）RCCHAgNO3RCCAgOHCCHHO3AgNOOHCCAgHO白白鉴别试验鉴别试验苯环苯环 280nm二、二、UV法法C=C-C=O -3-酮酮 240nm鉴别试验鉴别试验 专属性高专属性高。几乎所有

10、的甾。几乎所有的甾体激素原料体激素原料药都采药都采用了用了IRIR法鉴别。法鉴别。三、三、IR法法-OH 3750 3300cm-1CH 3320 cm-1C-H 3000 2700cm-1C=O 1900 1650cm-1C=C 1650 1450cm-1 =CH 1000 650cm-1鉴别试验鉴别试验1630cm-1OC OH 3420cm-亚甲基、角亚甲基、角甲基吸收带甲基吸收带1750cm-11232cm-11052cm-1COC 醋酸可的松醋酸可的松结构特征：结构特征：43酮、酮、C17 OHC20 酮基、酮基、C11 酮基、醋酸酯酮基、醋酸酯1590cm-13505cm-3300

11、cm-1CH CC 1505cm-13610cm-OH 酚羟基酚羟基醇羟基醇羟基1616cm-1苯环的骨架振动苯环的骨架振动炔雌醇炔雌醇结构特征：酚羟基、结构特征：酚羟基、C17 OH C17 乙乙炔基炔基、苯环、苯环OHHHO3CHHHCCH（一）（一）TLC法法 主要用于甾体激素类药物制剂的鉴别主要用于甾体激素类药物制剂的鉴别 方法：对照品法方法：对照品法鉴别试验鉴别试验（二）（二）HPLC法法 主要用于甾体激素类药物制剂的鉴别（如：醋酸主要用于甾体激素类药物制剂的鉴别（如：醋酸曲安奈德软膏、醋酸氟轻松软膏）曲安奈德软膏、醋酸氟轻松软膏）方法：对照品法方法：对照品法 要求在含量测定项下记录

12、的色谱图中，供试品峰要求在含量测定项下记录的色谱图中，供试品峰的的tR与对照品峰的与对照品峰的tR一致。一致。四、四、色谱色谱法法第三节第三节 特殊杂特殊杂质检查质检查甾体激素类药物中甾体激素类药物中“有关物质有关物质”的检的检查查1.来源：来源：原料、中间体、异构体、降解产物等原料、中间体、异构体、降解产物等“其他甾体其他甾体”2.特点特点:结构结构类似，具有相似的甾体母核结构，采类似，具有相似的甾体母核结构，采用用色谱法色谱法检查检查 TLC法：供试品自身稀释对照法法：供试品自身稀释对照法 显色：碱性四氮唑蓝试液、硫酸显色：碱性四氮唑蓝试液、硫酸-乙醇、荧光等乙醇、荧光等 HPLC法（主成

13、分自身对照法）法（主成分自身对照法）3.方法方法炔孕酮炔孕酮中中有关物质有关物质检查检查l溶剂溶剂CHCl3-MeOH(3:1)l硅胶硅胶Gl展开剂展开剂CHCl3-MeOH(95:5)l展开后晾干展开后晾干l120120加热加热5min5minl365nm比较荧光强度比较荧光强度对照对照50g/ml供试供试10mg/ml黄体酮中黄体酮中“有关物质有关物质”检查检查供试液供试液1 mg/ml对照溶液对照溶液0.02mg/ml 供试品溶液的杂质峰数不得超供试品溶液的杂质峰数不得超过过1 1个，其面积不得大于对照液的个，其面积不得大于对照液的主峰面积的主峰面积的3/43/40.01 mg/ml四、

14、含量测定四、含量测定（一）（一）HPLC法法（二）（二）UV法法（三）比色法（三）比色法（一）（一）HPLC法法RPHPLC 由于由于“其它甾体其它甾体”有关物质的存在，色谱法可消有关物质的存在，色谱法可消除它们的干扰除它们的干扰含量测定含量测定定量方法：定量方法：ChP(2005年版年版)及以前及以前 大多内标法大多内标法ChP(2010年版年版)外标法外标法内标法内标法大多数大多数固定相：固定相：ODS柱柱流动相：甲醇流动相：甲醇-水或乙腈水或乙腈-水水3、样品测定：供试品、样品测定：供试品+内标内标Ai/Cif=Ar/Cri内标内标 r 对照品对照品 x 待检杂质待检杂质Ai/Ci f=

15、Ax/Cx Cx=f AxAi/Ci 1、系统适用性试验系统适用性试验：2、校正因子、校正因子f 的测定：对照品的测定：对照品+内标内标含量测定含量测定内标法内标法ChP（2010年版）附录年版）附录 D 高效液相色谱法高效液相色谱法 色谱系统的适用性试验通常包括色谱系统的适用性试验通常包括理论板数、理论板数、分离度、重复性和拖尾因子分离度、重复性和拖尾因子等四个指标。其中，等四个指标。其中，分离度和重复性是系统适用性试验中更重要的参分离度和重复性是系统适用性试验中更重要的参数。数。对照液供试液己烯雌酚黄体酮黄体酮含量测定的黄体酮含量测定的HPLC图图示例：地塞米松磷酸钠的外标法测定示例：地塞

16、米松磷酸钠的外标法测定 ChP（2010年版）年版）示例：醋酸曲安奈德乳膏的内标法测定示例：醋酸曲安奈德乳膏的内标法测定 ChP（2010年版）年版）色谱柱：色谱柱：ODS柱柱流动相：三乙胺溶液（磷酸调流动相：三乙胺溶液（磷酸调pH值为值为3.00.05）-甲甲醇醇-乙腈（乙腈（55:40:5）检测波长：检测波长：242nm色谱柱：色谱柱：ODS柱柱流动相：甲醇流动相：甲醇-水（水（60:40）检测波长：检测波长：242nm内标：炔诺酮内标：炔诺酮（二）（二）UV法法-3-酮酮 maxmax 240nm（）肾上腺皮质激素肾上腺皮质激素雄性激素和蛋白同化激素雄性激素和蛋白同化激素孕激素孕激素 苯

17、环苯环 maxmax 280nm（）雌激素雌激素（三）比色法（三）比色法 1 1、四氮唑比色法：、四氮唑比色法：C17-醇酮基醇酮基 强还原性强还原性含量测定含量测定2 2、异烟肼比色法：、异烟肼比色法：C3酮基酮基3 3、Kober反应比色法：反应比色法：雌激素雌激素ChP（20102010年版）醋酸地塞米松注射液年版）醋酸地塞米松注射液ChP（19771977年版）地塞米松磷酸钠注射液年版）地塞米松磷酸钠注射液ChP（20102010年版）复方炔诺孕酮滴丸中炔雌醇的测定年版）复方炔诺孕酮滴丸中炔雌醇的测定1 1、四氮唑比色法、四氮唑比色法COOHC2H-2eCOCHO含量测定含量测定分子重

18、排分子重排肾上腺皮质激素肾上腺皮质激素 C17-醇酮基醇酮基 强还原性强还原性 含量测定含量测定氯化三苯四氮唑氯化三苯四氮唑（TTC、红四氮唑）、红四氮唑）ChP、BP：2e（深红色）（深红色）maxmax 480-490nm蓝四氮唑（蓝四氮唑（BT）USP：2e单甲瓒单甲瓒2e双甲瓒双甲瓒（暗蓝色）（暗蓝色）maxmax 525nm四氮唑盐：四氮唑盐：甲瓒甲瓒CNNNNH三苯甲瓒三苯甲瓒深红深红CNNNN+Cl-氯化三苯四氮唑氯化三苯四氮唑（TTC）红四氮唑（红四氮唑（RT）nmmax490480 OHe2 含量测定含量测定含量测定含量测定C l-+CNNNNOC H3+-C lCNNNNO

19、C H3蓝四氮唑蓝四氮唑（BT）OHe4 HCNNNNOCH3HCNNNNOCH3双甲瓒（暗蓝）双甲瓒（暗蓝）nmmax525 原原 理理异异烟烟腙腙（黄黄）酮酮基基异异烟烟肼肼 CHCl2 2、异烟肼比色法：、异烟肼比色法：C3酮基酮基CONHNOHN异烟腙（黄色）异烟腙（黄色）含量测定含量测定原理原理max=465nmmax=515nm3 3、Kober反应比色法：反应比色法：雌激素雌激素H2SO4-乙醇乙醇黄色黄色H2O或稀或稀H2SO4桃红色桃红色含量测定含量测定OHCH3O雌二醇雌二醇-3-甲醚甲醚CH3CH3OCH3CH3Omax=465nmmax=515nm SOH SOHOH 思思 考考 题题 2、为什么甾体激素类药物中、为什么甾体激素类药物中“其它甾体其它甾体”的检查方的检查方法要采用色谱法？法要采用色谱法？1、区分醋酸地塞米松、甲睾酮、黄体酮、炔雌醇、区分醋酸地塞米松、甲睾酮、黄体酮、炔雌醇