专题动物细胞融合与单克隆抗体ppt课件

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1、 1动物细胞交融也称细胞杂交，是指两个动物细胞交融也称细胞杂交，是指两个 或多个动物细胞结合构成一个细胞的过或多个动物细胞结合构成一个细胞的过 程。程。2动物细胞交融常用的诱导要素有聚乙二动物细胞交融常用的诱导要素有聚乙二 醇醇(PEG)、灭活的病毒、电激等。、灭活的病毒、电激等。3动物细胞交融的主要用途是制备单克隆动物细胞交融的主要用途是制备单克隆 抗体。抗体。4杂交瘤细胞是由经免疫的杂交瘤细胞是由经免疫的B淋巴细胞和骨髓瘤细胞交融而成淋巴细胞和骨髓瘤细胞交融而成 的，具有既能无限增殖又能产生特定抗体的才干。的，具有既能无限增殖又能产生特定抗体的才干。5单克隆抗体最主要的优点是特异性强、灵敏

2、度高，并能大量单克隆抗体最主要的优点是特异性强、灵敏度高，并能大量 制备。制备。6单克隆抗体的主要用途有：作为诊断试剂、用于治疗疾病和单克隆抗体的主要用途有：作为诊断试剂、用于治疗疾病和 运载药物。运载药物。自读教材自读教材夯根底夯根底 1概念概念 或或 动物细胞结合构成动物细胞结合构成 的过程，也称细的过程，也称细胞杂交。胞杂交。两个两个多个多个一个细胞一个细胞2.返回学车问答 ask.jsyst 学车问题回答驾驶员模拟考试2021 jsyst 科目一 科目二 科目三 科目四 3意义意义 (1)突破了突破了 的局限，使远缘杂交成为能够。的局限，使远缘杂交成为能够。(2)为制备为制备 开辟了新

3、途径。开辟了新途径。有性杂交有性杂交单克隆抗体单克隆抗体 1动物细胞交融与植物原生质体交融所用的诱导方法有动物细胞交融与植物原生质体交融所用的诱导方法有何不同？何不同？提示：动物细胞交融可用灭活的病毒进展诱导。提示：动物细胞交融可用灭活的病毒进展诱导。2细胞交融技术与有性杂交相比有哪些优点？细胞交融技术与有性杂交相比有哪些优点？提示：有性杂交有着非常严厉的时空关系和种族界限。动提示：有性杂交有着非常严厉的时空关系和种族界限。动物细胞交融那么不同，它经过人工的方法抑制了存在于物种之物细胞交融那么不同，它经过人工的方法抑制了存在于物种之间的遗传屏障，从而可以按照人们的志愿，把不同物种的不同间的遗传

4、屏障，从而可以按照人们的志愿，把不同物种的不同组织类型的细胞交融在一同。组织类型的细胞交融在一同。跟随名师跟随名师解疑问解疑问 1细胞交融的过程分析细胞交融的过程分析 细胞交融的过程包括细胞膜交融、细胞质交融和细胞核交细胞交融的过程包括细胞膜交融、细胞质交融和细胞核交融，其中细胞膜交融是细胞交融的先导，在细胞膜交融中表达融，其中细胞膜交融是细胞交融的先导，在细胞膜交融中表达出细胞膜具有一定的流动性。出细胞膜具有一定的流动性。2动物细胞交融与植物体细胞杂交的比较动物细胞交融与植物体细胞杂交的比较植物体细胞杂交植物体细胞杂交动物细胞融合动物细胞融合原理原理细胞膜的流动性、细胞的全能细胞膜的流动性、

5、细胞的全能性性细胞膜的流动性细胞膜的流动性过程过程细胞细胞A、B 去壁去壁原生质体原生质体A、B 融合融合融合的原生质体融合的原生质体 杂种细胞杂种细胞 植物组植物组,织培养织培养 杂种植株杂种植株细胞细胞A、B 融合融合杂交细胞杂交细胞 有丝分裂有丝分裂多个相同杂交细胞多个相同杂交细胞植物体细胞杂交植物体细胞杂交动物细胞融合动物细胞融合相关酶相关酶纤维素酶和果胶酶纤维素酶和果胶酶胰蛋白酶或胶原蛋白酶胰蛋白酶或胶原蛋白酶融合方融合方法法物理法：离心、电激、振动；物理法：离心、电激、振动；化学法：聚乙二醇等试剂诱导化学法：聚乙二醇等试剂诱导除物理法和化学法外还除物理法和化学法外还可以用灭活的病毒

6、诱导可以用灭活的病毒诱导结果结果杂种植株杂种植株杂交细胞杂交细胞意义意义克服了远缘杂交的不亲和性，克服了远缘杂交的不亲和性，获得杂种植株获得杂种植株突破了有性杂交方法的突破了有性杂交方法的局限，使远缘杂交成为局限，使远缘杂交成为可能可能特别提示特别提示(1)动物细胞核交融发生在杂种细胞的有丝分裂过程中。动物细胞核交融发生在杂种细胞的有丝分裂过程中。(2)灭活的病毒只适用于动物细胞交融。灭活的病毒只适用于动物细胞交融。自读教材自读教材夯根底夯根底 1传统抗体的制备传统抗体的制备抗原抗原血清血清(2)缺陷：产量低、缺陷：产量低、低、低、差。差。纯度纯度特异性特异性2单克隆抗体的制备过程单克隆抗体的

7、制备过程(2)处理思绪：将处理思绪：将B淋巴细胞与骨髓瘤细胞交融为淋巴细胞与骨髓瘤细胞交融为 。(3)制备过程：制备过程：杂交瘤细胞杂交瘤细胞(4)单克隆抗体的特点：单克隆抗体的特点：强、强、高，并可大量制备。高，并可大量制备。(5)单克隆抗体的运用：单克隆抗体的运用：作为作为 ，具有准确、高效、简易、快速的优点。，具有准确、高效、简易、快速的优点。用于用于 和和 。特异性特异性灵敏度灵敏度诊断试剂诊断试剂治疗疾病治疗疾病运载药物运载药物 1为什么要对小鼠注射抗原？为什么要对小鼠注射抗原？提示：以获得能产生相应抗体的提示：以获得能产生相应抗体的B淋巴细胞淋巴细胞(浆细胞浆细胞)。2根据单克隆抗

8、体制备过程思索以下问题：根据单克隆抗体制备过程思索以下问题：(1)制备单克隆抗体时，为什么要选用制备单克隆抗体时，为什么要选用B淋巴细胞和骨髓瘤淋巴细胞和骨髓瘤细胞交融构成杂交瘤细胞？细胞交融构成杂交瘤细胞？(2)B淋巴细胞和骨髓瘤细胞经聚乙二醇处置后，培育液中淋巴细胞和骨髓瘤细胞经聚乙二醇处置后，培育液中存在哪几种细胞？存在哪几种细胞？(3)选择杂交瘤细胞的两步挑选的目的各是什么？选择杂交瘤细胞的两步挑选的目的各是什么？提示：提示：(1)每一个每一个B淋巴细胞只能分泌一种特异性抗体，但淋巴细胞只能分泌一种特异性抗体，但不能无限增殖；骨髓瘤细胞可大量快速增殖，却不能产生抗体。不能无限增殖；骨髓

9、瘤细胞可大量快速增殖，却不能产生抗体。假设将两种细胞交融在一同，既能产生一种特异性抗体又能快假设将两种细胞交融在一同，既能产生一种特异性抗体又能快速增殖。速增殖。(2)未交融的未交融的B淋巴细胞、未交融的骨髓瘤细胞、淋巴细胞、未交融的骨髓瘤细胞、BB交交融细胞、瘤瘤交融细胞、融细胞、瘤瘤交融细胞、B瘤交融细胞。瘤交融细胞。(3)第一步挑选的目的是获得杂交瘤细胞；第二步挑选的第一步挑选的目的是获得杂交瘤细胞；第二步挑选的目的是获得能产生所需单一抗体的杂交瘤细胞。目的是获得能产生所需单一抗体的杂交瘤细胞。跟随名师跟随名师解疑问解疑问 1血清抗体与单克隆抗体的比较血清抗体与单克隆抗体的比较名称名称产

10、生产生特点特点血清抗体血清抗体由由B淋巴细胞分泌淋巴细胞分泌一般从血清中分离，产量一般从血清中分离，产量低、纯度低、特异性差低、纯度低、特异性差单克隆抗体单克隆抗体 由杂交瘤细胞分泌由杂交瘤细胞分泌特异性强、灵敏度高，能特异性强、灵敏度高，能大量制备大量制备 2制备单克隆抗体过程中两次挑选的目的不同制备单克隆抗体过程中两次挑选的目的不同 (1)第一次挑选是将未交融的第一次挑选是将未交融的B淋巴细胞、骨髓瘤细胞以及淋巴细胞、骨髓瘤细胞以及BB交融、瘤交融、瘤瘤交融的细胞经过选择培育基淘汰，挑选出杂瘤交融的细胞经过选择培育基淘汰，挑选出杂交瘤细胞。交瘤细胞。(2)第二次挑选是将产生特定抗体的第二次

11、挑选是将产生特定抗体的B瘤细胞经过细胞培瘤细胞经过细胞培育用相应抗原检测的方法挑选出来。由于从体内取免疫过的育用相应抗原检测的方法挑选出来。由于从体内取免疫过的B淋巴细胞时会取出很多种，构成的杂交瘤细胞有很多种，所以淋巴细胞时会取出很多种，构成的杂交瘤细胞有很多种，所以需挑选出产生特定抗体的杂交瘤细胞。需挑选出产生特定抗体的杂交瘤细胞。例例1以下对植物体细胞杂交和动物细胞交融的比较，描以下对植物体细胞杂交和动物细胞交融的比较，描画正确的选项是画正确的选项是()A动物细胞交融与植物原生质体交融的根本原理一样，动物细胞交融与植物原生质体交融的根本原理一样，诱导交融的方法也完全一样诱导交融的方法也完

12、全一样 B两者都可以跨越种属间的生殖隔离，突破有性杂交方两者都可以跨越种属间的生殖隔离，突破有性杂交方法的局限，使远缘杂交成为能够法的局限，使远缘杂交成为能够 C利用动物细胞交融技术而开展起来的杂交瘤技术，为利用动物细胞交融技术而开展起来的杂交瘤技术，为试管婴儿的诞生开辟了新途径试管婴儿的诞生开辟了新途径 D目前科学家终于实现了两个植物物种间的体细胞杂交，目前科学家终于实现了两个植物物种间的体细胞杂交，得到了同时具有两个物种遗传物质的超级植物，并使它们的性得到了同时具有两个物种遗传物质的超级植物，并使它们的性状全部得以表达状全部得以表达 思绪点拨思绪点拨 精讲精析精讲精析A项中动物细胞交融可用

13、灭活的病毒诱导，而项中动物细胞交融可用灭活的病毒诱导，而植物原生质体是不能的；植物原生质体是不能的；C项中杂交瘤技术是细胞工程技术，项中杂交瘤技术是细胞工程技术，而试管婴儿那么是胚胎工程内容；而试管婴儿那么是胚胎工程内容；D项生物性状的表达是基因项生物性状的表达是基因型与环境共同作用的结果，型与环境共同作用的结果，“超级植物具有两个亲本的遗传物超级植物具有两个亲本的遗传物质，但性状不一定能全部表达。质，但性状不一定能全部表达。答案答案B 动、植物细胞交融技术的比较动、植物细胞交融技术的比较 动、植物细胞交融技术根本原理一样，都是细胞膜的流动动、植物细胞交融技术根本原理一样，都是细胞膜的流动性；

14、诱导交融的方法根本类似。不同点是：植物细胞交融前性；诱导交融的方法根本类似。不同点是：植物细胞交融前需先去掉细胞壁；动物细胞交融除物理法、化学法外，还用需先去掉细胞壁；动物细胞交融除物理法、化学法外，还用到生物方法，即灭活病毒；培育基成分不同，动物细胞培育到生物方法，即灭活病毒；培育基成分不同，动物细胞培育是用液体培育基，其成分中有动物血清。另外还有培育目的和是用液体培育基，其成分中有动物血清。另外还有培育目的和结果等方面的区别。结果等方面的区别。例例2以下图是制备分泌抗以下图是制备分泌抗X(H1N1流感病毒流感病毒)抗体的过程，抗体的过程，根据图解回答以下问题：根据图解回答以下问题：(1)给

15、小鼠注射抗原的目的是给小鼠注射抗原的目的是_。(2)在单克隆抗体制备过程中之所以选用在单克隆抗体制备过程中之所以选用B淋巴细胞和骨髓淋巴细胞和骨髓瘤细胞，是由于它们交融后的杂交瘤细胞具有瘤细胞，是由于它们交融后的杂交瘤细胞具有_的特性。的特性。(3)由图中可看出，单克隆抗体制备过程运用了由图中可看出，单克隆抗体制备过程运用了_和和_的动物细胞工程技术手段。的动物细胞工程技术手段。(4)动物细胞培育液的配方通常含有葡萄糖、氨基酸、无机动物细胞培育液的配方通常含有葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素等，与植物细胞培育基有所不同的是还含有盐、维生素等，与植物细胞培育基有所不同的是还含有_。(5)在动物细胞

16、交融过程中，需求将所选取的组织细胞分散在动物细胞交融过程中，需求将所选取的组织细胞分散开，以利于细胞交融，可用开，以利于细胞交融，可用_处置离体组织细胞使之分处置离体组织细胞使之分散。散。(6)图中有两次挑选过程，其中步骤的目的是挑选出图中有两次挑选过程，其中步骤的目的是挑选出_，步骤的目的是挑选出步骤的目的是挑选出_。(7)请根据以下信息，设计一方法请根据以下信息，设计一方法(不思索机械方法不思索机械方法)，从培，从培育液中挑选出杂交瘤细胞。知细胞合成育液中挑选出杂交瘤细胞。知细胞合成DNA有有D和和S两条途径，两条途径，其中其中D途径能被氨基嘌呤阻断。人淋巴细胞中有这两种途径能被氨基嘌呤阻

17、断。人淋巴细胞中有这两种DNA的的合成途径，但普通不分裂增殖；鼠骨髓瘤细胞中虽然只需合成途径，但普通不分裂增殖；鼠骨髓瘤细胞中虽然只需D途途径，但能不断分裂增殖，将这两种细胞在试管中混合，参与聚径，但能不断分裂增殖，将这两种细胞在试管中混合，参与聚乙二醇促融，获得杂种细胞。乙二醇促融，获得杂种细胞。方法：方法：_。原理：原理：_。思绪点拨思绪点拨 精讲精析精讲精析(1)根据抗原抗体特异性结合的原理，用特定根据抗原抗体特异性结合的原理，用特定抗原刺激，小鼠体内便可产生能产生特定抗体的浆细胞，即可抗原刺激，小鼠体内便可产生能产生特定抗体的浆细胞，即可获得相应的获得相应的B淋巴细胞。淋巴细胞。(2)

18、杂交瘤细胞具有两种细胞的遗传物质，既能产生特定的杂交瘤细胞具有两种细胞的遗传物质，既能产生特定的抗体，又能无限增殖。抗体，又能无限增殖。(3)从图中看出，单克隆抗体技术实践是运用了动物细胞交从图中看出，单克隆抗体技术实践是运用了动物细胞交融和动物细胞培育技术。融和动物细胞培育技术。(5)细胞交融时是单个细胞和单个细胞的交融，为将细细胞交融时是单个细胞和单个细胞的交融，为将细胞从动物组织中离散，可用胰蛋白酶处置。胞从动物组织中离散，可用胰蛋白酶处置。(6)在单克隆抗体制备过程中，由于从小鼠体内提取的在单克隆抗体制备过程中，由于从小鼠体内提取的B淋巴细胞能够有多种，以及细胞交融方式有多种，从而产生

19、淋巴细胞能够有多种，以及细胞交融方式有多种，从而产生多种交融细胞以及多种杂交瘤细胞，因此需多次挑选。从图多种交融细胞以及多种杂交瘤细胞，因此需多次挑选。从图中可看出，是用选择培育基挑选出杂交瘤细胞，是挑中可看出，是用选择培育基挑选出杂交瘤细胞，是挑选出能产生所需抗体的杂交瘤细胞。选出能产生所需抗体的杂交瘤细胞。(7)据题干信息可知，可在培育液中参与氨基嘌呤，使据题干信息可知，可在培育液中参与氨基嘌呤，使D合成途径阻断，仅有合成途径阻断，仅有D合成途径的骨髓瘤细胞及其彼此交融合成途径的骨髓瘤细胞及其彼此交融的细胞不能增殖，而的细胞不能增殖，而B淋巴细胞普通不增殖，但人淋巴细胞淋巴细胞普通不增殖，

20、但人淋巴细胞和骨髓瘤细胞交融后的杂种细胞可以利用淋巴细胞中的和骨髓瘤细胞交融后的杂种细胞可以利用淋巴细胞中的S途途径合成径合成DNA而增殖。而增殖。单克隆抗体制备过程中，骨髓瘤细胞和单克隆抗体制备过程中，骨髓瘤细胞和B淋巴细胞交融淋巴细胞交融 后后,要用特定的培育基挑选出杂交瘤细胞，在这种培育基上要用特定的培育基挑选出杂交瘤细胞，在这种培育基上 不能存活增殖的细胞是不能存活增殖的细胞是 ()B淋巴细胞小鼠骨髓瘤细胞淋巴细胞小鼠骨髓瘤细胞B淋巴细胞本身融淋巴细胞本身融 合细胞小鼠骨髓瘤细胞本身交融细胞杂交瘤细胞合细胞小鼠骨髓瘤细胞本身交融细胞杂交瘤细胞 AB C D解析：单克隆抗体的制备过程中，

21、骨髓瘤细胞和解析：单克隆抗体的制备过程中，骨髓瘤细胞和B淋巴细胞淋巴细胞交融时，发生了以下三种情况：未发生交融的细胞交融时，发生了以下三种情况：未发生交融的细胞(B淋巴淋巴细胞，小鼠骨髓瘤细胞细胞，小鼠骨髓瘤细胞)；本身交融的细胞；本身交融的细胞(B淋巴细胞本身淋巴细胞本身交融，小鼠骨髓瘤细胞本身交融交融，小鼠骨髓瘤细胞本身交融)；骨髓瘤细胞与单个；骨髓瘤细胞与单个B淋淋巴细胞交融的杂交瘤细胞。杂交瘤细胞是制备单克隆抗体巴细胞交融的杂交瘤细胞。杂交瘤细胞是制备单克隆抗体必需的，因此在特定的培育基上只需杂交瘤细胞才干存活必需的，因此在特定的培育基上只需杂交瘤细胞才干存活增殖。增殖。答案：答案：A