常用试剂配方

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1、常用试剂配方常用试剂配方常用试剂储存注意事项：储存于阴凉、通风的地方；远离火种、热源。避免光照。室温不超过30，相对湿度不超过80。包装必须密封，切勿受潮。应与易（可）燃物、还原剂、碱类、醇类、食用化学品分开存放,切忌混储，储区应备有合适的材料收容泄漏物。操作注意事项：尽量在通风橱操作,加强通风，避免粉尘扩散。远离易燃、可燃物，避免与还原剂、碱类、醇类接触，防止包装及容器损坏。使用后应留意剩余量，注意及时订购。 8M Urea（尿素）组份浓度： 8mol/L Urea（MW:60。07）配制量： 1L 配制方法： 1.称取尿素480g，置于1L的蓝盖瓶中. 2。 加水至1L，置于磁力搅拌器上充

2、分搅拌。3。 于棕色瓶中，4保存。 4。使用前，先在常温放置，使析出的尿素溶解。0.25AgNO3 （硝酸银）组份浓度：0。25(W/V)AgNO3（MW:169。87)配制量： 500ml配制方法： 1.准确称取硝酸银1。25g。 2。加入500ml的去离子水，充分溶解。 3.于棕色瓶中，常温保存。0。5M EDTA(PH 8。0）组分浓度： 0。5 mol/L EDTA（MW：372。24)配制量： 500ml配制方法: 1称取93g Na2EDTA2H2O置于500ml蓝盖瓶中。2加入400ml的去离子水，置于磁力搅拌器上充分搅拌.3用NaOH调节调节pH值至8.0（约需加入20g固体N

3、aOH)，当pH接近8.0时， EDTA方可完全溶解，加入去离子水定容至1L。4高温高压灭菌后，室温保存半年。5M NaCl组份浓度： 5mol/L NaCl (MW：58.5）配制量： 1L 配制方法： 1.准确称取氯化钠292.5g，置于1L的蓝盖瓶中。 2.用去离子水溶解并稀释至1L。3.高温高压灭菌后，常温保存.50% 甘油组分浓度： 50%（V/V) glycerol配制量: 100ml配制方法： 1. 量取下列试剂，置于250ml蓝盖瓶 中：100% glycerol 50ml 2.加入50ml去离子水,充分搅拌溶解。3。高温高压灭菌，4保存。 4。使用时，到超净台分装.2M Ca

4、Cl2 组份浓度:2mol/L CaCl2 (MW:110.98)配制量： 50ml 配制方法: 1.准确称取氯化钙4.4g于50ml的conical tube中. 2。用去离子水溶解并稀释至500ml，用0.22m滤膜过滤除菌滤膜过滤除菌到进口的conical tube。3.贮存于4。2M MgSO4组份浓度： 2mol/L MgSO4 （MW：120。37)配制量： 50ml 配制方法: 1.准确称取硫酸镁 4.8g于50ml的conical tube中。 2。用去离子水溶解并稀释至50ml，用0.22m滤膜过滤除菌到进口的conical tube。 3。贮存于43 M NaOAc（pH5

5、。2） 组份浓度: 3mol/L CH3COONa（MW：136）配制量: 100mL 配制方法: 1。称取40.8g NaOAc3H2O置于200mL蓝盖瓶中，2。加入约40mL 的去离子水搅拌溶解3。加入冰乙酸调节pH值至5.2。 4.加入去离子水将溶液定容至100mL。 5。高温高压灭菌后，室温保存。3 M KOAc组份浓度： 3mol/L CH3COOK（MW：98）配制量： 100mL 配制方法:在60ml5mol/L乙酸钾溶液中加入11。5ml冰乙酸和28.5ml；水,即成钾浓度为3mol/L而乙酸根浓度为5mol/L的溶液。1M Na2SO4组份浓度: 1mol/L (MW: 1

6、42。04）配制量: 500mL 配制方法： 1.称取71.02g置于500mL蓝盖瓶中，2.加入去离子水将溶液定容至500mL。 3。室温保存。HEPES1M HEPES：配制量: 100mL 配制方法:1、将23。8gHEPES溶于约90ml的水中,用NaOH调pH（6.88.2），然后用水定容至100ml.2、如不想加入OH ，可以配200ml HEPES和200ml HEPES sodium salt ，将HEPES sodium salt加入200ml HEPES调至所需PH。注意：一般长晶体用的HEPES需用后一种方法配制，配一般buffer则可用第一种方法配.50 PEG（聚乙二

7、醇）有分子量400,1000,2000,4000，6000，10000配制量: 500mL 配制方法:称取250g PEG加入500ml蓝盖瓶，加水至500ml，置于磁力搅拌器上充分搅拌，完全溶解后，用NALGENE过滤器抽滤，抽滤后用50ml灭菌离心管分装，存放在20底层.20 Glucose（葡萄糖）组份浓度：20% （W/V） Glucose配制量：100 ml配制方法：1. 称取20g Glucose置于150ml的广口试剂杯中，加入去离子水到100ml后，搅拌溶解.2。 高温高压灭菌后，4C保存.100 mM ATP组份浓度：100 mM ATP配制量：20 ml配制方法:1. 称取

8、121 mg Na2ATP3H2O，加入到50 ml塑料离心管内。2. 加20 ml的25 mM Tris-HCl(pH8.0)，搅拌溶解。3. 适量分成小份后,20保存。培养基2YT 液体培养基放置：NaCl、蛋白胨、酵母粉置于放电子天平的实验桌上层或在试剂柜底层配方及配法: 500ml 1L 2LNaCl 2.5g 5g 10g蛋白胨（TRYPTONE） 8g 16g 32g酵母粉(YEAST EXTRACT） 5g 10g 20g注意：在通风橱内称量，防止粉末飞起一般用2L三角瓶配2L培养基摇匀溶解后分装成每瓶500ml。装好瓶的液体培养基加塞并用锡箔纸包好，121C高温高压灭菌。配50

9、ml或100ml 2YT 液体培养基时，先用2L瓶配好所需总量，完全溶解后分装。2YT 固体培养基放置：Agar置于放电子天平的实验桌上层配方及配法:取三个500ml 三角瓶，各加5g Agar（鹭隆），将配好的1L 2YT 液体培养基均分成三分加到三个500ml 三角瓶中，用锡箔纸包好,121C高温高压灭菌.（不需加塞，因为加塞后放不进微波炉）抗生素Amp氨苄青霉素（钠盐）放置：置于4C冰箱配方及配法：配成200mg/ml的1000溶液储存（40g溶于200ml蒸馏水中)，溶解后在超净台用注射器过滤灭菌分装，置于-20C冰箱第二层，以1*的终浓度(200ug/ml)加入培养基.Kan卡那霉素

10、（硫酸根）放置:置于试剂柜配方及配法：配成20mg/ml的1000溶液储存(4g溶于200ml蒸馏水中），溶解后在超净台用注射器过滤灭菌分装，置于-20C冰箱第二层，以1*的终浓度（20ug/ml）加入培养基.Chl氯霉素放置：置于试剂柜配方及配法：配成34mg/ml的1000溶液储存（6.8g溶于200ml 100%乙醇中)，溶解后在超净台用注射器过滤灭菌分装，置于20C冰箱第二层，以1*的终浓度（34ug/ml）加入培养基，注意：如接种到5ml培养基摇不起来，可将Chl用量减半蛋白表达纯化相关：IPTG（异丙基硫代D-半乳糖苷）放置：置于20C冰箱顶层配方及配法：1M IPTG的配制:溶解

11、23。8g IPTG 溶于水中，定容至100 mL溶解后在超净台用注射器过滤灭菌分装，置于-20C冰箱第二层，一般使用浓度为0.25uM,即500ml培养基加125ul,注意:个别蛋白表达提高IPTG浓度能提高表达量DTT（二硫苏糖醇）放置：置于-20C冰箱顶层配方及配法：1M DTT的配制：溶解7.7g IPTG 于50 mL水中，溶解后分装成1。5ml管，置于20C冰箱第二层使用浓度为1-10mMPepstantin（胃蛋白酶抑制剂）放置:置于-20C冰箱顶层，25mg1mg/mL pepstantin的配制(1000X）：分子量 685。89配制 直接加25ml 异丙醇，盖紧盖摇匀，分装

12、成小份贮存于20工作浓度 1ug/mLLeupeptin（亮抑酶肽)放置：置于20C冰箱顶层，25mg1mg/mL leupeptin的配制(1000X）:分子量 475.60配制： 直接加20 ml水,盖紧盖摇匀，分装成小份贮存于20工作浓度: 1ug/mLL-glutathione reduced（还原型谷胱甘肽）放置：置于4C冰箱200 mM glutathione reduced:分子量 307.33配制：称取3.07g glutathione reduced溶解于50 ml的水中,分装成小份贮存于20。工作浓度: 10 mM-OG放置:置于20C冰箱Stock浓度： 100mM使用浓

13、度： 12mMThrombin放置：置于20C冰箱配制溶液: 50 mM sodium citrate， pH 6.5， 200 mM NaCl, 0.1 PEG10000, 50% glycerol单位:0.51mlSpermidine（亚精胺)100 mM Spermidine的配制：分子量 254.6配制 称取0。077g Spermidine溶解于3 ml的水中，分装成300ul贮存于20.Spermine(精胺）100 mM Spermine的配制：分子量 348.2配制 称取0。105g Spermine溶解于3 ml的水中，分装成300ul贮存于20.Imidazole(咪唑)放

14、置：试剂柜1M Imidazole 配制:分子量：68。08配制:称取34。04g Imidazole溶解于450 ml的水中,用HCl调PH至7。5，补足水至500mlPMSF（苯甲基磺酰氟）放置：试剂柜0.1M PMSF的配制：分子量 174。19保存 室温保存，配成PMSF溶液后需20保存。配制 溶解0。87g的PMSF于足量的异丙醇中，定容到50ml。分成小份贮存于20。 工作浓度 1mM注意:有毒，对呼吸道粘膜、眼睛和皮肤有很强的危害性，配制时请在通风橱进行，并穿实验服及戴一次性手套.GST lysis buffer: 50 mM Tris （pH8.0) 500 mM NaCl 1

15、0% Glycerol 5 mM EDTA 5 mM ME/DTT protease inhibitors(1 mM PMSF， 1000xpepstantin, 1000xleupeptin)1L配方：1M Tris (pH8。0） 50ml5M NaCl 100ml100 Glycerol 100ml0。5M EDTA 10ml14.4M -ME 357ul加水至1L 保存 4保存 注意 protease inhibitors及DTT须现用现加。GST Elution Buffer： 保存 现配现用配制 取一定体积的 200 mM glutathione reduced，在GST lysi

16、s buffer中稀释20倍，此时浓度即为（10 mM glutathione reduced） GST Elution Buffer.注意:protease inhibitors及DTT须现用现加。His-tag lysis buffer: 50 mM Tris （pH8.0) 500 mM NaCl 10 Glycerol 20mM Imidazole 5 mM -ME protease inhibitors（1 mM PMSF, 1000xpepstantin， 1000xleupeptin）1L配方：1M Tris (pH8。0) 50ml5M NaCl 100ml100% Glyce

17、rol 100ml1M Imidazole 20ml14.4M -ME 357ul加水至1L 保存 4保存 注意 protease inhibitors须现用现加。Histag Elution Buffer:保存:4冰箱配制方法：分4种,Imidazole 浓度分别为50mM，100mM，200mM,500mM,50ml Elution Buffer加入1M Imidazole量分别为：2.5ml，5ml,10ml，25ml，其他成分与Histag lysis buffer一样，50ml配方:1M Tris (pH8.0) 2.5ml5M NaCl 5ml100% Glycerol 5ml14

18、.4M ME 17。85ul注意 ：protease inhibitors须现用现加。HiTrapTM SP/Q FF （Q 使用Tris; S 使用HEPES)Buffer A 20mM Tris 8.0 2mM EDTA 2mM -MEBuffer B 20mM Tris 8。0 2mM EDTA 2mM ME 1.5M NaCl1L配方：Buffer A1M Tris (pH8.0) 20ml0。5M EDTA 4ml14.4M ME 142.85ul加水至1LBuffer B1M Tris （pH8.0) 20ml0。5M EDTA 4ml14。4M ME 142.85ul5M NaC

19、l 333ml 加水至1L保存：贮存于4层析柜 灭菌方式：超滤灭菌，灭菌后抽气处理HIC Buffer A 40mM Tris 8.0 3mM ME1。5M ammonium sulfate Buffer B 40mM Tris 8。0 3mM ME500ml配方：Buffer A1M Tris （pH8。0) 20ml14.4M ME 107。14ul ammonium sulfate 99。1g 加水至500mlBuffer B1M Tris (pH8.0) 20ml14。4M ME 107.14ul 加水至500mlGel Filtration20 mM Tris （pH8.0) 100

20、 mM NaCl 300 mM ammonium acetate 1 mM EDTA 2 mM ME1L配方：1M Tris (pH8.0) 20ml5M NaCl 20mlammonium acetate 23。12g0。5M EDTA 2ml14。4M ME 142。86ul加水至1L10TE Buffer（pH 8.0）组份浓度: 100 mM TrisHCl，10 mM EDTA 配制量: 1L 配置方法 1。 量取下列溶液，置于1L蓝盖瓶中。 1。0M Tris-HCl Buffer（pH8.0) 100mL 0。5M EDTA(pH8。0) 20mL 2。 向蓝盖瓶中加入约800m

21、L的去离子水，均匀混合. 3. 将溶液定容至1L，高温高压灭菌。 4. 室温保存半年.注意：此为贮存液,使用时稀释100倍，用于PCR纯化和质粒提取后产物保存。高效感受态转化缓冲液组分浓度：55 mM MnCl2 15 mM CaCl2 250 mM KCl 10 mM PIPE（PH6.7）1L配方：MnCl2-4H2O 10。88gCaCl2-H2O 2.2gKCl 18.65g0。5M PIPES(PH6.7) 10ml加水至1L0.5M PIPES （PH 6.7）配制量:10 ml（MW：302.4）配制方法：1。 称取1.5g,加入到15 ml塑料离心管内。2. 加8 ml的水，搅

22、拌溶解.3。 用5M KOH 调PH至6.74。 0.22um滤膜过滤，-20 保存。电泳相关1.5M TrisHCl（pH8.8）组份浓度: 1.5 mol/L Tris-HCl 配制量: 1L 配制方法： 1。称取181.7g的Tris-base（MW:121.14）置于1L蓝盖瓶中。 2。 加入约800mL的去离子水,充分搅拌溶解。 3。 用浓盐酸调pH值至8。8。 4。 将溶液定容至1L. 5. 高温高压灭菌后，室温保存半年。1。0M Tris-HCl（pH8。0)组分浓度： 1.0 mol/L Tris-HCL配制量: 1L配制方法: 1。称取121g的Trisbase（MW:121

23、。14)于1L蓝盖瓶中，2.加入900ml的去离子水，充分搅拌均匀，3. 用浓盐酸调pH值至8。0，每升约需4050ml浓盐酸,用水调整终体积至1L。如需其他PH的Tris，根据所要求的pH（25下）加一定量的浓盐酸。4.高温高压灭菌后，室温保存半年。注意：测PH时需使用温度补偿电极，因为温度变化对Tris的PH有很大影响.浓盐酸的体积（ml)pH8.6142128。53846566671。3769.08.88。68。48。28。07.87.67.47.2 10%SDS组份浓度： 10(W/V）SDS 配制量： 500mL 配置方法 1.称量50g高纯度的SDS置于500mL蓝盖瓶中,加入约4

24、00mL的去离子水，68加热溶解. 2。滴加数滴浓盐酸调节pH值至7.2。 3.将溶液定容至500mL后,室温保存。注意： SDS为固体粉末状，吸入会对肺造成损害，应在通风橱中称取SDS。溶解时，SDS易产生气泡，不要剧烈搅拌。30APS (过硫酸铵）组份浓度: 30（W/V）APS配制量： 1mL 配制方法: 1。准确称取0.3g APS。 2。加入0。8mL的去离子水溶解. 3。贮存于4. 注意：30%的过硫酸胺溶液在4保存时间可使用2周左右，超过期限会失去催化作用。10SDSPAGE Running Buffer配制量： 1L配制方法：1称量下列试剂，置于1L蓝盖瓶中。Tris 20gG

25、lycine 144 g10% SDS 100 ml2加入约700 ml的去离子水搅拌溶解。3定容至1L，混匀，室温保存.10NATIVE-PAGE Running Buffer（PH8.5）配制量： 1L配制方法：1称量下列试剂，置于1L蓝盖瓶中.Tris 30gGlycine 142。7 gEDTA 3。92g2加入约800 ml的去离子水搅拌溶解.3定容至1L，混匀，室温保存.10Tricine SDS-PAGE Running Buffer 10Anode (Lower） buffer 外层缓冲液 (2M Tris/cl, PH8。9）Tris 121.1gWater make up

26、to 500mlPH to 8.9 with HCL10Cathode （Upper） buffer 内层缓冲液 （1M Tris/cl, 1M Tricine， 1 SDS， PH 8.25）Tris 60.6gTricine 89.6gSDS 5gWater make up to 500ml注:不用调PH值使用时稀释至1X1Tricine SDS-PAGE Gel Buffer（3.0 M Tris, pH 8。45/0。3% SDS）Tris 181.7g10%SDS 15mlWater make up to 500mlPH to 8.45 with HCL15% Tricine分离胶

27、2 ml separating acrylamide 2 ml gel buffer 2 ml 50 glycerol 50 ul 10 APS5 ul TEMED10% Tricine分离胶1.22 ml separating acrylamide 2 ml gel buffer 2 ml 50 glycerol 0.78 ml water50 ul 10% APS 5 ul TEMED Tricine浓缩胶0。25 ml stacking acrylamide 0.75 ml gel buffer 2。0 ml water 20 ul 10% APS 2 ul TEMED50X TAE B

28、uffer （pH8.5)组分浓度：2M Trisbase，100mM EDTA, 1M冰乙酸配制量: 1L配制方法：1、称取下列试剂,置于1L蓝盖瓶中：Tris-base 242.2g0。5M EDTA（PH8.0） 200ml 2加入约600ml的去离子水，充分搅拌溶解，再加入57.1ml的冰乙酸，混合均匀.3、加去离子水将溶液定容至1L。4、高温高压灭菌后，室温保存半年。5X TBE Buffer组分浓度：445mM Tris-base， 445mM 硼酸，10mM EDTA配制量： 1L配制方法:1。称取下列试剂，置于1L蓝盖瓶中:Tris-base 54g硼酸 27.5g0.5M E

29、DTA（PH8.0) 20ml 2加入约900ml的去离子水，充分搅拌溶解,3、加去离子水将溶液定容至1L后4、高温高压灭菌后，室温保存。10Tris-Glycine Buffer（PH8。5）组分浓度：0。25 M Tris25 M Glycine（MW：75。1)1%(W/V) SDS配制量： 1L配制方法：1称量下列试剂，置于1L蓝盖瓶中.Tris 30。2gGlycine 188 g10 SDS 100 ml2加入约600 ml的去离子水搅拌溶解,用HCL调PH至8。5。3定容至1L，室温保存.6X DNA Loading Buffer(Agarose）组分浓度:0。25%(W/V)溴

30、酚蓝30（W/V)甘油100X SYBR Green 配制量: 50ml配制方法：1。称取下列试剂，置于50ml离心管中：溴酚兰 0.125g2。向离心管中30ml去离子水,加热充分溶解。3.加入15ml甘油，最终用去离子水定容至50ml，混匀,室温保存。 4.使用时,分装1ml一管，加入10ul SYBR Green,4保存。3SDSPAGE Loading Buffer配制量： 50ml配制方法：1。称取下列试剂，置于50ml离心管中：溴酚兰 0。1g2.向离心管中15ml去离子水，加热充分溶解。3.加入20ml甘油，2.5ml Tris6.8,10ml 10% SDS，2.5mlME最终用去离子水定容至50ml，混匀，室温保存一个月。