CD-1700.血常规操作规程

《CD-1700.血常规操作规程》由会员分享，可在线阅读，更多相关《CD-1700.血常规操作规程（10页珍藏版）》请在装配图网上搜索。

1、长海医院实验诊断科Department of Diagnosis Changhai Hospital程序文件文件编号：MJZ01第 页共 10 页第 2 版第2次修改主题：血常规颁布日期：2003年06月01日血常规检验一、【检验方法】： CD1700 血细胞分析仪二、【原理及意义】：（一）Hb1、原理：红细胞被溶血素溶解，释放出血红蛋白，血红蛋白被SLS的亲水性的烷基部分所改变，由亚铁血红蛋白形态转变为高铁血红蛋白形态，形成SLS-Hb的正铁血红蛋白化合物，在555nm处有吸收峰，通过仪器内部的比色系统比色，可以测定Hb的浓度。该方法利用了氧化血红蛋白法和氰化血红蛋白法的优点。一方面，SLS

2、-Hb法具有和氧化血红蛋白法一样的检测快速、无毒性成分的优点；另一方面也具有氰化血红蛋白法检测结果精确、重复性好的特点。（二）RBC、MCV、MCH、MCHC、HCT、RDW-CV、RDW-SD1、原理：血液被稀释液稀释后，细胞一个一个通过狭缝，狭缝内外是有直流电的电解质环境，当细胞通过时会引起瞬时的电位变化，形成电脉冲，电脉冲的个数反应细胞的个数，大小反应细胞的大小。细胞体积在一定范围内划为红细胞；在某个范围划为血小板。同时通过仪器内部的数据分析系统换算出MCV、MCH、MCHC、Hct 和统计学处理得出RDW-CV、RDW-SD分析数据。 （三）WBC计数、及其分类1、原理（电阻检测法）：

3、仪器吸取样本，用一定量的试剂和稀释液稀释后，让白细胞一个个依次通过计数池的微孔，利用细胞通过微孔时瞬间的电阻变化产生脉冲电流而计数。脉冲信号经放大、甄别后，微机处理数据得到其体积分布直方图。淋巴细胞群为：35-90fl中间细胞群为：90-160fl粒细胞 群 为：160-300fl三、【试剂品牌】：1、 稀释液：Sandem 氯化钠6.38g/L 硼酸1.0g/L四硼酸钠0.2g/LEDTA-2K 0.2g/L2、 Hb溶血素：SULFOLYSER (SLS-200A) 月桂洗硫酸钠 1.7g/L3、 清洗液：SANDEM CELLCLEANSTACCLEANER-SYS 次氯酸盐 5%4、抗

4、凝剂： KEDTA2HO（1.5-2.2mg每毫升血液）四、【仪器】：CD1700 血细胞分析仪五、【操作步骤】：开机：1. 插上电源，打开CD1700 血细胞分析仪电源开关2. 仪器进入自动检测系统，自动检测各系统参数，同时测定本底参数。3. 当仪器显示窗口出现“Run Ready，说明仪器处于待测标本状态，进行血液质控品测试,通过后可以正常测定血常规标本。4. 打开中文报告处理电脑和打印机，进行中文处理系统,登录.关机：1. 仪器使用完毕，依次按”main”,”special protocol”more”进入”start clean”将清洗液置于针下,按键开始吸样,约十分分后清洗完毕,再按

5、“Shut Down”键。2. 自动血细胞计数仪进入自动冲洗状态，当自动血细胞仪显示窗口出现“stand by”时可以安全关机，关闭仪器开关，关闭电脑。血细胞分析仪的保养（每周一次）1. 按“main”键,选择drain bath项，按键进入,然后再按一次充满,。2. 选择“start clean”项，按键。3. ,在 “RBC”和“WBC”计数池中各加1毫升专用清洁液，浸泡十分钟4. 按“main”键,选择drain bath项,再按一次,再按”clear orifice”,仪器自动清洁保养。5. 仪器表面需经常擦洗，保持仪器整体清洁。 每日质控在每天样本检测前，取专用血液质控品做质控，并做

6、好登记。若检测结果均在范围内，则可进行样本检测，若有失控出现，则需重新定标。六、【参考范围】：1 (1)白细胞(WBC)计数： 成人(4 10)109/L 儿童(5 -12) 109/L 新生儿(15-20) 109/L (2)白细胞分类(成人)：中性粒细胞 50-70% 淋巴细胞 20-40% 嗜酸性粒细胞 0.5-5% 嗜碱性粒细胞 0-1% 单核细胞 3-8%2 红细胞(RBC)：男(4-5.5) 1012/L 女(3.5-5) 1012/L 新生儿(6-7) 1012/L3 血红蛋白(HGB)：男120-160g/L女110-150g/L新生儿170-200g/L4血小板(PLT)：(

7、100-300) 109/L5血球压积(HCT)：男0.42-0.49 L/L女0.37-0.43 L/L6平均红细胞体积(MCV)：82-95flMCV（fl）=每升血液中血细胞比容（L/L）1015每升血液中红细胞总数7平均红细胞血红蛋白含量(MCH)：27-31pgMCH （g/L）=每升血液中血红蛋白浓度（g/L）每升血液中红细胞总数8 平均红细胞血红蛋白浓度(MCHC)：320-360g/L MCHC （g/L）=每升血液中血红蛋白浓度（g/L）升血液中血细胞比容（L/L） 9RDW-CV、RDW-SD： RDW-CV：11.6%-14.0%；RDW-SD：39.0-46.0fL。1

8、0PDW（15.05-18.1）%MPV(9.4-12.5)fl； P-LCR(13-43)。 七、【临床意义】：1白细胞（1） 白细胞计数生理性增加 新生儿、运动、饭后、冷水浴后、疼痛、月经期、受寒、妊娠、分娩、阵发性心动过速、阳光或紫外光照射、抽搐、恶心、呕吐、麻醉等。病理性增加 类白血病、白血病、急性化脓性细菌感染、急性溶血、急性失血、单核细胞增多症、淋巴细胞增多症、真性红细胞增多症、腮腺炎、病毒性肝炎、淋巴瘤、组织坏死、手术后、肿瘤转移、药物中毒、代谢性酸中毒、过敏等。减少 伤寒、副伤寒、斑疹伤寒、兔热病、布鲁杆菌热、流感、麻疹、风疹、革登热、传染性肝炎（亦可增多）、疟疾、过敏性休克、

9、系统性红斑狼疮、粟粒性结核、败血症、重症细菌感染、恶液质、放射治疗、肿瘤化疗。恶性贫血、非白细胞性贫血、再生障碍性贫血、脾功能亢进、戈谢病、Felty综合症、Chediak-Higashi综合症、阵发性睡眠性血红蛋白尿症等。（2） 白细胞分类计数：见下表各种白细胞增多、减少的临床意义细胞类别增多减少中性粒细胞嗜酸性粒细胞嗜碱性粒细胞淋巴细胞单核细胞类白血病、白血病、化脓性细胞感染、溶血性贫血、急性出血、急性溶血、手术后、恶性肿瘤、组织损伤、皮肤病、真性红细胞增多症、脾切除术后。参见嗜酸性粒细胞计数慢粒、何杰金病、癌转移、铅和铋中毒等。百日咳、传染性单核细胞增多症、淋巴细胞性白血病、传染淋巴细胞

10、增多症、病毒性肝炎、弓形虫病单核细胞性白血病、系统性红斑狼疮、亚急性细菌性心内膜炎、活动性结核、急性感染恢复期、原虫感染伤寒、副伤寒、流感、麻疹、再生障碍性贫血、黑热病、病毒感染、原虫感染、病毒性肝炎、脾功能亢进、贫血、原发性中性粒细胞减少症、肝硬化急性感染、粟粒性结核、晚期肿瘤、艾滋病、伴T淋巴细胞减少的免性缺陷使用皮质类固醇激素、再生障碍性 贫血、多毛细胞白血病.2 红细胞(RBC)：生理性减少 见于妊娠中后期、6个月至2岁的婴儿等。病理性减少 造血原料不足、造血功能障碍、红细胞破坏过多或失血所引起的各种贫血。相对性增多 主要因血浆容量减少所致，见于脱水、呕吐、腹泻、多尿、多汗、大面积烧伤

11、、吸烟、高血压、肥胖等。代偿性增多 主要见于缺氧、新生儿、高原环境、CO中毒、严重肺气肿、肺源性心脏病、先天性心脏病、心衰等。绝对性增多 克隆性真性红细胞增多；非隆性红细胞增多，与促红细胞生成素产生过多有关，见于肾癌、肝细胞癌、雄激素分泌细胞肿瘤、肾囊肿、肾盂积水、肾移植、小脑血管瘤、子宫肌瘤。3、血红蛋白(Hb)：生理性增加：新生儿、高原居住者。病理性增加：真性红细胞增多症、代偿性红细胞增多症（如先天性青紫性心脏病、慢性肺性疾病、脱水）。减少：各种贫血、白血病、产后、手术后、大量失血。4 红细胞比积(HCT) ：与红细胞计数、血红蛋白测定的意义类同。5 血小板(PLT)：（1） 生理性 正常

12、人血小板在一天内可有6%-10%变化；表现为早晨低，午后较高；春季低，冬季略高；平原较低，高原较高；静脉血比毛细血管血高10%；月经前低，后升高；妊娠中晚期升高，分娩后减低；运动后升高，休息后恢复。（2） 病理性 减少：除创伤之外，血小板减少是引起出血的常见原因。常见疾病有：、血小板生成障碍，如急性白血病、再生障碍性贫血；、血小板破坏过多，如ITP、脾功能亢进，系统性红斑狼疮；、血小板消耗过多，如DIC、血栓性血小板减少性紫癜。增多（血小板大于400109/L）：、骨髓增生性疾病：慢性粒细胞白血病，真性红细胞增多症；、原发性血小板增多症；、急性大出血，急性溶血，急性化脓性感染；、脾切除手术后。

13、6MCV、MCH、MCHC 主要用于贫血的形态学分类，见下表:贫血的形态学分类MCV（fL）MCH（pg）MCHC（g/L）大红细胞性贫血正红细胞性贫血单纯小细胞性贫血小细胞低色素性贫血100-16080-10072-8050-8035-5027-3521-2612-30310-370310-370300-370240-3007RDW-CV、RDW-SD：(1)用于缺铁性贫血的诊断和疗效观察，缺铁性贫血时RDW增大，经治疗后可恢复正常。(2)用于小细胞低色素性贫血的鉴别，缺铁性贫血时RDW增大，而轻型珠蛋白生 成障碍性贫血时RDW正常。(3)RDW与MCV结合可将贫血分为6种。小细胞均一性：M

14、CV下降，RDW正常，如轻型珠蛋白生成障碍性贫血。 小细胞不均一性：MCV下降，RDW增大，如缺铁性贫血。正常细胞均一性：MCV、RDW均正常，如某些慢性疾病。 正常细胞不均一性：MCV正常，RDW增大，如早期缺铁性贫血。大细胞均一性：MCV增大，RDW正常，如再生障碍性贫血。大细胞不均一性：MCV、RDW均增大，如巨幼细胞性贫血。8MPV、PDW、P-LCR：MPV 其临床意义要结合PLT的变化才有价值。、鉴别血小板减少的原因：当骨髓造血功能损伤致血小板减少时，MPV减少；当血小板在周围血液中破坏增多时，导致血小板减少，MPV增大；血小板分布异常致血小板减少时，MPC正常。、MPV增大可作为

15、骨髓造血功能恢复的较早期指征：骨髓造血功能衰竭时，MPV与PLT同时持续下降；造血功能抑制越严重，MPV越小；当造血功能恢复时，MPV增大常先于PLT升高。、其它：MPV增大见于骨髓纤维化、ITP、血栓性疾病及血栓前状态、脾切除、慢粒、巨大血小板综合症、镰刀细胞性贫血；MPV减小见于脾亢、化疗后、AA、巨幼细胞性贫血等。PDW 是反映血小板体积大小的异质性参数，增大见于急淋化疗后、巨幼细胞性贫血、脾切除、慢粒、巨大血小板综合症、血栓性疾病等；可用于鉴别原发性血小板增多症和反应性血小板增多症，前者PDW增加，后者PDW正常。P-LCR 代表血小板计数中体积 12fL的血小板的比值或数量，有助于识

16、别堆集血小板、大血小板和细胞碎片，并可监测骨髓的造血功能。八、【标本采集】：随机采取病人静脉血，用40g/L EDTA-K2 抗凝(50ul抗凝1ml血，相当于2mgEDTAK2/1ml血)。九、【注意事项】：1、血细胞计数应用EDTA-K2为抗凝剂，用量为EDTA-K2*2H2O1.52.0mg可抗凝1ml血，不能用肝素或枸橼酸钠等抗凝剂。2、采集后在室温中贮存不应超出6h；如需制用血涂片应在2h内完成。3、测定前抗凝血应充混匀，任何小凝块或血小板聚集均会影响血细胞计数。4、注意病理因素对血液分析仪使用的影响，特别是各系统的报警提示。如是否有大血小板对血小板计数的影响；有无有核红细胞对白细胞

17、计数的影响等等。5、如有冷凝集现象，将血置37水浴箱10min后立即测试。十、【质量控制】： 1 每日工作开始应先做全血质控品，。2 出现失控，应校正后并重做质控，直至符合质控要求。3 按要求做好仪器校正和仪器对比工作。4 做好质控、失控和校正登记。十一、【报告复查】：对以下情况的样本进行复查(仪器及手工)；(1) 白细胞低于3.0109/L； (2) 红细胞数与血红蛋白明显不符；(3) 血小板低于50109/L；(4) 白细胞分类时，中间细胞15%，以及机器未能分出的样本需手工分类。白细胞计数:原理：血液经稀酸溶液稀释后，红细胞被破坏，放入血细胞计数池内，置显微镜下计数，求得每微升中的白细胞

18、数。试剂：冰醋酸 10ml蒸馏水 加至500ml10g/L美蓝 3滴器材：20微升吸管，血细胞计数板，显微镜。操作：加计数试剂0.38ml于小试管内，取血20微升吹入试剂，混匀。静置1-2分钟。低倍计数，计数4角得4大方格，计数总数乘以50即为白细胞/微升。血小板计数:原理： 血液用血小板计数试剂稀释后，在显微镜下计数。试剂1. 草酸铵稀释液 草酸铵1.0g，乙二胺四乙酸二钠0.014g,40%甲醛溶液0.1ml加水至100ml，加亚甲蓝少许，过滤后置冰箱备用。2. 许汝和稀释液 尿素9g，乙二胺四乙酸二钠0.5g，巴比妥钠0.3g，加蒸馏水水至100ml，过滤后置冰箱备用。3. Barr稀释

19、液 白皂素0.25g，枸橼酸钠3.5g，煌焦油蓝0.1g，40%甲醛溶液1.0ml，加水至100ml，过滤后置冰箱备用。操作1. 选上述任一试剂（本科室用2液），每管加0.38ml，加入全血20微升，充分混匀。2. 用改良牛鲍计数板，将血液稀释液充池后，置于有滤纸得培养皿内，放置至少10min，待血小板沉降后计数。3. 计数中央大方格内5个中方格得血小板数，其结果乘1000，即得每微升血液中血小板数。手工白细胞分类计数:、原理把血液制成细胞分布均匀的薄膜涂片，用复合染料染色，根据各类白细胞形态特征予以分类计数，得出相对比值（百分率），以观察数量、形态和质量的变化，对疾病有辅助诊断意义。、试剂瑞

20、姬氏复合染色液液：取瑞氏染粉1g、姬姆萨染粉0.3g，置洁净研钵中，加少量甲醇（分析纯），研磨片刻，吸出上层染液。再加少量甲醇，继续研磨，再吸出上液。如此连续几次，共用甲醇500ml。收集于棕色玻璃瓶中，每天早、晚各振摇3分钟，共5天，以后存放一周即能使用。液：pH 6.4-6.8磷酸盐缓冲液 磷酸二氢钾（无水） 6.64g 磷酸二氢钠（无水） 2.56g加少量蒸馏水溶解，用 磷酸盐调整pH，加水至1000ml、操作1. 采血后推制厚薄适宜的血膜片应呈舌状，头、体、尾清晰可分。2. 推好的血膜在空气中晃动，以促使快干。天气寒冷或潮湿时，应于37温箱中促干，以免细胞变形缩小。3. 染色。平置玻片于染色架上，滴加染液3-5滴，使其迅速盖满血膜，约1分钟后，滴加缓冲液5-10滴，轻轻摇动玻片或对准血片吹气，与染液充分混合，5-1分钟后用冲去染液，待干。4. 选择涂片的体尾交界处染色良好的区域，在油镜下计数100个白细胞，按其形态特征进行分类计数，求出各类细胞所占比值（百分率）。编 写：科主任：主任：沈 茜质控负责人：马金龙